王 平， 陈成飞， 戴春伟， 苏为科

（浙江工业大学药学院，浙江杭州 310014）

茶多酚（Tea－polyphenols）是茶叶中一类重要的化学成分，含量一般为18% ～36%［1］。茶多酚主要包括儿茶素（黄烷酮类）、黄酮、黄酮醇类、花青素类、花白素、酚酸及缩酚酸类。其中儿茶素是茶多酚的主要成分，包括表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素（EGC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）等［1］。茶多酚是一种天然的抗氧化剂，具有很强的消除有害自由基、抗衰老、抗辐射、抗过敏、消炎、抑制癌细胞、抗菌、杀菌和对艾滋病毒的抑制作用［2］，现已广泛应用于食品、粮油、药品、精细化工等各个领域［3～5］。

茶叶中提取茶多酚主要有三种方法［6－10］:溶剂萃取法，离子沉淀法，树脂吸附法。近年来，具有高度选择性的吸附树脂被广泛应用于天然产物的提取和纯化中，具有提纯效率高等优点。李冬梅等［11］研究发现HPD－600大孔吸附树脂对淫羊藿总黄酮表现出较好的吸附和解吸附性能，而且得到纯度高的总黄酮。本实验选用HPD－600大孔吸附树脂从茶汤中分离纯化茶多酚。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器 主要试剂与原料:乙醇（工业级，杭州方亭试剂厂）;HPD－600大孔吸附树脂（河北沧州宝恩化工有限公司）;低质粗茶叶（产地为福建大田）;732PC型紫外分光光度计（上海普光仪器公司）。

1.2 树脂的预处理［12］将HPD－600大孔吸附树脂装入柱子内，先用2%NaOH浸泡2 h后洗脱，流速为2 mL/min，共洗脱2BV，用纯水洗至pH中性，再用4BV乙醇洗脱，再用纯水洗至无乙醇味，备用。

1.3 茶叶浸提液的制备 称取100 g茶叶，置于1 000 mL烧瓶中，加入800 mL的水，在80℃水浴中不断搅拌，浸提3 h后过滤。滤渣再用500 mL的水浸提1 h后过滤。然后滤渣再用500 mL水浸提30 min后滤过。合并3次滤过所得滤液。将滤液浓缩至原体积的1/3，加入3倍量乙醇，出现大量絮状沉淀，静置8 h，滤过，得澄清液。澄清液浓缩至一定体积，得到浓缩液。

1.4 静态吸附实验 称取一定量树脂，加入一定体积的浓缩液，隔10 min取1 mL上清液进行检测。测定茶多酚的吸附率。

1.5 动态吸附实验 采用内径为11 mm的25 mL酸式滴定管作为吸附柱，树脂层高度8 cm，将浓缩液以3 mL/min的平均流速流过吸附柱。吸附后，先用适量的水洗柱，再用一定浓度的乙醇溶液以1.5 mL/min的平均流速洗脱，并用分光光度法测定流出液中的茶多酚浓度。

1.6 分析测定方法

1.6.1 国标法［13］准确称取样品0.1 g样品（精确至0.000 1 g），置100 mL量瓶中，用蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀。准确吸取试液1 mL，置于25 mL量瓶中，加蒸馏水4 mL和酒石酸亚铁溶液5 mL，充分混匀，再用pH7.5的磷酸缓冲液定容，以试剂空白液作参比，用10 mL比色杯于540 nm测定吸光度（A）。

A:吸光度;

M:样品重量（G）;

m:样品干物率（%）;L1:样品的总量（mL）;

L2:测定时的用液量（mL）;

1.6.2 高效液相法［14］采用HPLC法定量分析茶多酚和咖啡碱，其检测条件为，反相色谱柱:ZORBA×SB－Aq（3.0×150 mm），流动相:乙腈－水（体积比为8∶92，用磷酸调pH值为2.55），检测波长:280 nm，流速:1 mL/min。分别配制不同浓度的茶多酚和咖啡碱的标准溶液，作HPLC分析测定，得到茶多酚和咖啡碱溶液浓度与相应HPLC峰面积的线性关系式如下:

式中C为浓度（mg/mL），A为HPLC峰的积分峰面积。

2 结果与讨论

2.1 HPD－600大孔吸附树脂对茶多酚的吸附性能

2.1.1 静态吸附方法，用该树脂对不同比重的浓缩液中茶多酚进行静态吸附，以国标法分析测定茶多酚。

2.1.1.1 静态吸附量的考察 配置比重为1.1 g/mL的浓缩液，分别按照浓缩液体积与树脂质量比为4∶1，4∶2，4∶4，4 ∶8，4∶16进行考察。结果见图1。

图1 浓缩液体积与树脂质量比

由图1可知，4∶2（树脂量:上样体积）比例的吸附率仍超过95%，说明此时的吸附效果较好;4∶2为较佳上样比例。

2.1.1.2 茶汤上样液比重的考察 在6 mL比重为1.1 g/mL的浓缩液中分别加入0，0.67，1.5，2.5 mL的浓缩液使其比重分别为 1.1，1.09，1.08，1.07 g/mL 及比重为 1.12 g/mL和1.15 g/mL的浓缩液，然后吸取适量的试液于2 g树脂内，进行静态吸附试验，静置一夜。结果见图2。

图2 上样液比重对吸附的影响

由图2可知，比重为1.12 g/mL、1.15 g/mL与1.1 g/mL的茶多酚含量差不多，而且比重高于1.1 g/mL的浓缩液有一定黏度，影响上样效果。综上两点，吸附比重为1.1 g/mL较好。

2.1.1.3 吸附时间的考察 称取20 g树脂，加入20 mL比重为1.1 g/mL的浓缩液，隔10 min取上清液检测。结果见图3（由于吸光度值偏大，换算成茶多酚含量值太大，直接用吸光度值表示）。

图3 吸附时间的影响

由图3可知:30 min后吸附基本上无变化，认为树脂已经吸附饱和。所以，建议吸附时间为30 min。

2.1.2 动态吸附量的考察 将比重为1.1 g/mL的浓缩液上柱（装树脂20 g），做泄漏曲线，共收集6管，共60 mL。用分光光度计测定。结果见图4（由吸光度值偏大，换算成茶多酚含量值太大，直接用吸光值表示）。

图4 动态吸附量的考查

由图4显示可知:收集量达到10 mL的时已有泄漏，综合考虑静态吸附试验结果，确定上样体积比树脂质量为4∶2（即2∶1）。

2.2 不同乙醇浓度洗脱对茶多酚含量的影响 考察用一定浓度的乙醇洗脱及其对洗脱能力的影响，由实验可知，洗脱率随着乙醇浓度的提高而增大，但是当乙醇浓度达到80%后，洗脱率增加缓慢，且高浓度乙醇洗脱会有更多的杂质出现。张效林等［14］研究也发现用一定酸性的10%乙醇溶液对咖啡碱有较好的选择洗脱能力，故在洗脱之前用一定酸性的10%乙醇溶液进行处理。而且我们也证实在洗脱茶多酚之前用一定酸性的10%乙醇溶液进行处理，可以得到咖啡碱含量小于7%的茶多酚产品。

2.3 按较佳条件处理所得最终产品的HPLC检测结果 图5为茶多酚产品HPLC分析测定结果，表明通过HPD－600大孔吸附树脂吸附解吸后，可以有效去除部分咖啡碱，组分EGCG含量为40%，咖啡碱残余量为7%。

图5 最终茶多酚产品的HPLC色谱

3 结论

3.1 本工艺上柱前用一定浓度的乙醇，先除去茶汤浓缩液中的杂质和茶多糖，增加了树脂的使用寿命，降低生产成本。

3.2 HPD－600大孔吸附树脂易吸附茶多酚，而且茶多酚容易被解吸。用80%乙醇洗脱，得到的茶多酚纯度达95%，其中EGCG含量大于40%，而且咖啡碱残余量小于7%。

3.3 本工艺避免使用氯仿等溶剂，基本无污染。而且咖啡碱与茶多酚的分离分步进行，有利于咖啡碱的回收利用。

［1］杨贤强，王岳飞，陈留记.茶多酚化学［M］.上海:上海科学技术出版社，2003.

［2］Lambert J D，Yang C S.Cancer chemopreventive activity and bioavailaility of tea and tea－polyphenols［J］.Mutation Rasearch，2003，523（2）:201－208.

［3］Xu Jun，Wang Jue，Deng Fei，et al.Green tea extract and its major component epigallocatechin gallate inhibits hepatitis B virus in vitro［J］.Antiviral Res，2008，78:242－249.

［4］Bachrach U，Wang Y C.Cancer therapy and prevention by green tea:role of ornithinedecarboxylase［J］.Amino Acids，2002，22:1－13.

［5］陆爱霞，姚 开，吕远平，等.茶多酚的提取和应用研究进展［J］. 食品科技，2003（2）:53－55.

［6］张庆云.茶多酚提取方法的进展［J］.福建茶叶，2002，2:15－16.

［7］桑红源，王 蕾.茶多酚提取和应用［J］.天津化工，2008，22（3）:42－44.

［8］李咏梅，王学松，于艳春，等.茶叶中茶多酚的提取方法研究［J］. 广州化学，2003，28（1）:59－62.

［9］张效林，薛伟明，李 平，等.树脂吸附法分离茶多酚及咖啡碱［J］.化学工程，2001，29（3）:15－19.

［10］Chen Rongyi，Zhang Xinshen，Shen Jinshan，et al.Study on comprehensive extraction of tea polyphenols，caffeine，theanine and tea polysaccharides［J］.Shipin Kexue，2005，26（4）:174－177.

［11］李冬梅，尹小飞，蔡大伟.HPD－600大孔吸附树脂对淫羊霍总黄酮的动态吸附洗脱性能研究［J］.中国药师，2007，10（8）:760－762.

［12］贾存清，李阳春，屠鹏飞，等.HPD系列大孔吸附树脂预处理方法研究［J］. 中国中药杂志，2005，30（18）:1425－1427.

［13］GB8317－87，茶多酚的测定［S］.

［14］Lee B L，Ong C N.Comparative analysis of tea catechins and theaflavins by highperformance liquid chromatograohy and capillary electrophoresis［J］.Chromatogra A，2000（881）:439－447.

［15］王同宝，张效林，张卫红.阶段洗脱吸附层析法分离茶多酚咖啡碱［J］.离子交换与吸附，2005，21（4）:329－334.