陈 智， 生立嵩， 田景振

（山东中医药大学，山东济南 250355）

谷维素是从米糠油提取的一种维生素类药物，其主要成分是环木菠萝烯醇阿魏酯、2，4－亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯，主要用于自主神经失调所致的胃肠、心血管神经官能症、脑震荡后遗症、更年期综合症、月经前期紧张症肠易激综合症以及治疗各型心律失常［1］等。谷维素现有剂型均不能有效解决谷维素溶解度低、吸收差、生物利用度低的缺点。而自微乳化制剂则能够解决脂溶性好，油水分配系数高的药物的上述缺点。本实验考察谷维素自微乳在大鼠体内的药物动力学和生物利用度，以期为谷维素自微乳制剂的研究和开发提供依据。

1 实验材料

1.1 实验试剂

谷维素原料药（浙江银河药业有限公司，批号060105），谷维素片（陕西云鹏制药有限公司，批号:070202），阿魏酸钠标准品（购自山东省药物检验所，批号:0773－9809），枸橼酸钠（天津科密欧有限公司，批号071229）。

1.2实验仪器

Agilent1100高效液相色谱仪:四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，二极管阵列检测器（DAD）;Agilent ChemStation色谱工作站;电热恒温水浴锅（北京科伟永鑫仪器厂）;超声清洗器（KQ－250E型医用，江苏昆山市超声仪器有限公司），HitachiUV3010紫外分光光度计（日立仪器制作所）。

1.3 实验动物

SD大鼠，体重180～210 g（♂♀各半，山东鲁元动物中心提供，动物许可证号:鲁Sck20070512）。

2 方法与结果

2.1 体内方法学的建立

据文献报道，谷维素口服进入体内后，主要转化成为阿魏酸钠形式，因此本部分参考相关文献［2］建立了HPLC法测定大鼠体内的阿魏酸钠含量，并应用于大鼠体内动力学的研究。

2.1.1 阿魏酸钠对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的阿魏酸钠对照品适量，以甲醇溶解成浓度为9.7 μg/mL的溶液，即得。

2.1.2 最大吸收波长的确定 取阿魏酸钠对照溶液，在200～400 nm下全波长扫描。由扫描结果确定阿魏酸钠溶液在甲醇中的最大吸收波长为（320±2）nm。

2.1.3 色谱条件 色谱柱:venusil XBP－C18（L）色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流动相∶甲醇－0.08%磷酸水溶液（50∶50）;进样量:20 μL;检测波长:320 nm;流速:1 mL/min;柱温:25℃。

2.1.4 血浆样品的提取与分离 精密吸取血浆0.2 mL至离心管中，加入3 mL乙醚，漩涡振荡1 min，3 000 r/min离心10 min，吸取上层有机层2.5 mL置离心管中，加内标溶液20 μL，漩涡混匀，于40℃水浴中空气流下挥干，加入流动相200 μL溶解，漩涡混匀，3 000 r/min离心10 min，精密移取上清液20 μL进行HPLC测定。

2.1.5 系统适用性实验 取空白大鼠血浆，加入阿魏酸钠对照品的大鼠血浆，按2.1.4项下处理，进行分析，考察确定的色谱条件理论塔板数和分离度是否达到要求。结果见图1。

由图1可知内标物绿原酸的保留时间为14.8 min，阿魏酸钠的保留时间为5.4 min，内标物和样品峰的理论塔板分别为:2 513、2 029，色谱峰与血浆中内源性杂质峰分离良好。

2.1.6 标准曲线的配制

标准溶液的配制:精密称取阿魏酸钠对照品适量，用甲醇配制成浓度为1.0，5.0，10.0，20.0，30.0，50.0，100.0 μg/mL的溶液，4℃保存备用。

图1 阿魏酸钠标准品高效液相色谱图

内标溶液的配制:精密称取内标物适量，用甲醇配制成浓度为50 μg/mL的内标溶液，4℃保存备用。

取空白血浆0.2 mL置带塞离心管中，分别精密加入阿魏酸钠对照溶液，使血浆中药物浓度为0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，10.0 μg/mL。按2.1.4项下操作，记录阿魏酸钠和内标峰面积，以阿魏酸钠峰面积和内标峰面积的比值（f）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程:Y=1.692 5X+0.129 1（R2=0.997 7），阿魏酸钠在0.1～20 μg/mL的范围内线性关系良好。

2.1.7 回收率实验

2.1.7.1 方法回收率 取空白血浆按2.1.4项下操作，将阿魏酸钠峰面积和内标峰面积的比值（f）代入标准曲线计算测得量，计算方法回收率。回收率（%）=（测得量/加入量）×100%，求得低、中、高3个质量浓度平均方法回收率（n=3）分别为100.0%，96.69%，100.4%。

2.1.7.2 萃取回收率 取空白血浆按2.1.4项下操作，进样20 μL测得峰面积的比值（f）;另分别吸取以上三种浓度标准溶液和内标，吹干后用流动相200 μL溶解，进样20 μL测定峰面积的比值（f′），计算萃取回收率。萃取回收率（%）=（f/f′）×100% 求得低、中、高3个质量浓度萃取回收率（n=3）分别为102.0%，100.9%，96.1%。

2.1.8 精密度实验 吸取空白血浆按2.1.4项下操作，进样20 μL测得峰面积的比值（f）作为指标，测定日内精密度和日间精密度。求得日内精密度RSD（n=3）为0.49%，0.65%，1.23%，日间精密度RSD（n=3）为0.79%，0.51%，0.23%。

由上述方法学考察可知，建立的分析方法准确度高，精密度好，且药物的血浆萃取度回收率大于90%，说明血浆的提取处理方法良好。

2.2 谷维素大鼠药时曲线浓度（AUC）的测定

2.2.1 大鼠相对生物利用度的测定 取健康SD成年大鼠18只，♂♀各半，体重（250±20）g，随机分3组:谷维素表面活性剂胶束溶液组组，谷维素市售片剂组，谷维素自微乳胶囊组，每组6只，禁食过夜后每只大鼠按1 mg谷维素/100 g体重给药，给药后分别于 1，3，5，10，15，20，30，60，120，150 min，3 h，5 h，6 h，12 h，尾静脉取血 0.5 mL。3 000 r/min 离心20 min。移取上层血浆，按2.1.4项下操作，进样20 μL，测定血药浓度。

大鼠给药后，制剂中的药物在各时间点的平均血药浓度－经时曲线见图2。

图2 谷维素制剂血药浓度

2.2.2 药时曲线下面积和相对生物利用度的计算 使用3P87软件进行药物血药浓度数据处理，以谷维素市售片剂作为参比制剂，自微乳胶囊为受试制剂，进行谷维素自微乳胶囊的相对生物利用度的研究。结果见表1。

表1 血药浓度统计结果（n=6）

与谷维素市售片剂相比，谷维素自微乳胶囊的相对生物利用度为270.9%，由表1结果可知，自微乳制剂与市售胶囊相比，生物利用度有较大提高。

3 讨论与小结

3.1 建立了以高效液相色谱方法测定测定大鼠血浆中阿魏酸钠的含量。以绿原酸为内标采用C18色谱柱，流动相为甲醇－0.08%磷酸水溶液（50∶50），检测波长为320 nm，血浆内源杂质不干扰样品的测定，且阿魏酸钠与内标物分离良好，谷维素在0.1～20 μg/mL范围内线性关系良好，绝对回收率大于95%（n=3），相对回收率在95% ～105%之间。日内日间RSD小于5%。本方法准确可靠，适用于谷维素大鼠体内血药浓度测定。

3.2 本研究分别给谷维素表面活性剂胶束溶液组，谷维素市售片剂组，谷维素自微乳胶囊组，测定大鼠血浆中阿魏酸钠的浓度，考察了谷维素自微乳的生物利用度。三个组进行比较表明，谷维素自微乳组的血药浓度有显著提高，并且显著提高谷维素的生物利用度。

［1］王本坚，王保林，姜新道.谷维素的临床新用途［J］.中国临床医生，2004，32（3）:12－13.

［2］任志强，刘丽君，龙艾兵，等.高效液相色谱法测定血浆中阿魏酸钠含量［J］.中国药房，2003，14（1）:33－34.