RP-HPLC法测定猫豆中猫豆胍的含量Δ

2010-05-22黄增琼蒋伟哲黄敏黄兴振巫世红广西医科大学药学院南宁市53002右江民族医学院药学系百色市533000

中国药房 2010年11期

黄增琼，蒋伟哲，黄敏，黄兴振，巫世红（.广西医科大学药学院，南宁市 53002；2.右江民族医学院药学系，百色市 533000）

猫豆又名猫爪豆、狗爪豆、龙爪豆，是豆科藜豆属植物龙爪藜豆 Stizotobium cochinchinensis（Lour）.Tang et Wang的种子[1]，广西是最主要的产区。猫豆中主要成分为左旋多巴，是国内提取左旋多巴最主要的原料药材[2]。笔者已经从猫豆中提取分离得到一种生物碱类化合物——猫豆胍，其具有一定的镇静催眠作用[3]。有关猫豆中猫豆胍的含量测定方法目前未见有报道，为了今后更好地对猫豆胍药物制剂进行质量控制，本研究建立了以反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定猫豆中猫豆胍含量的方法。研究结果表明，所建立的方法准确、简便、专属性强、重复性好，可作为猫豆药材或含猫豆胍的药物制剂的含量测定方法。

1 材料

1.1 仪器

LC-9000D型HPLC仪（南宁市威玛龙色谱科技有限公司）；ME215S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；AS5150A型超声波处理器（天津奥特比赛恩斯有限公司）。

1.2 试药

猫豆胍标准品（纯度：99.54%，广西医科大学新药研究开发中心制备）；猫豆药材（广西邦尔植物制品有限公司，批号：070309，经右江民族医学院附属医院刘春荣副主任中药师鉴定为真品）；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：PhenomenexTMC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.1 mol·L-1冰醋酸-甲醇（95∶5）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：324 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准品溶液的制备：取猫豆胍标准品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1冰醋酸溶解至刻度，配制成浓度为0.1180 mg·mL-1的标准品贮备液。精密量取该贮备液10 mL，置25 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1冰醋酸至刻度，制成浓度为0.0472 mg·mL-1的标准品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备：取猫豆粗粉约1 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加0.1 mol·L-1盐酸至刻度，浸泡24 h，不时振摇，抽滤，记录滤液体积，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备：以0.1 mol·L-1盐酸溶液和0.1mol·L-1冰醋酸溶液作为阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

取标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按“2.1”项下色谱条件分别注入HPLC仪测定，记录色谱图（见图1）。猫豆胍保留时间约为7.2 min，主峰与相邻杂质峰的分离度＞1.5。理论塔板数按猫豆胍峰计算应应不低于10000。在该色谱条件下，阴性对照溶液对样品测定无干扰。

图1 高效液相色谱图A.标准品；B.供试品；C.盐酸阴性对照；D.冰醋酸阴性对照Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.sample；C.negative control of hydrochloric acid；D.negative control of glacial acetic acid

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下标准品贮备液0.5、1、2、4、8 mL，分别置于10 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1冰醋酸至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.0059、0.0118、0.0236、0.0472、0.0944 mg·mL-1的系列溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。以对照品质量浓度（X，mg·mL-1）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝2000000X－3547.4（r＝0.9999）。结果表明，猫豆胍的质量浓度在0.00590～0.0944 mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。