别小琳 王灿

(四川省食品药品检验所,四川 成都 610036)

按照《中国药典》2005年版的要求,所有药品在进行微生物限度检查之前,必须对所采用的方法进行验证,确认该方法能消除药品的抑菌作用,因此,我们对有一定抑菌作用的复方樟脑乳膏,建立了微生物限度检查方法,并对方法进行了验证。

1 材料与方法

1.1 材料

复方樟脑乳膏,批号070820,由四川省迪威药业有限责任公司生产;枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003,均为第三代,由四川省药检所提供。

1.2 方法

1.2.1 菌液制备

(1)取经37℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物1ml加9ml生理盐水稀释,细菌数约为50～100cfu◦ml-1,做活菌计数备用。

(2)取经25℃培养18～24h的白色念珠菌液体培养物1ml加9ml生理盐水稀释,菌落数约为50～100cfu◦ml-1,做活菌计数备用。

(3)取经25℃培养1w的黑曲霉斜面培养物,加3～5ml生理盐水洗下霉菌孢子,吸出菌液,取1ml加9ml生理盐水稀释,菌落数约为50～100cfu◦ml-1,做活菌计数备用。

1.2.2 供试液制备

分别取样品10g、5g、3g加 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀,溶解,取上层液,分别作为1∶10、1∶20和1∶33的供试液。

表1 不同稀释法的试剂配比

1.2.3 回收率测定

将相应比例的供试液以及试验菌液同时加入平皿中(具体见表1),立即倾注琼脂培养基,作为试验组,待凝固后,置规定温度培养24～72h观察,记录菌落数。每种菌液各制备2个平皿。同时作活菌组和相应比例供试液对照组的菌落计数。并按照下式计算试验组菌回收率。

试验组菌回收率=[(试验组菌落数-供试液对照菌落数)/活菌组菌数]×100%

1.2.4 控制菌检查法验证测定

按常规检查方法,分别取1∶10供试液 10ml,接种至 3瓶100ml营养肉汤培养基中,其中一瓶加入1ml金黄色葡萄球菌菌液(50～100个◦ml-1)作为阳性菌对照,一瓶加入1ml大肠埃希菌(50～100个◦ml-1)为阴性菌对照,按金黄色葡萄球菌检查法进行检验。同时做1∶33供试液的检验,取1∶33供试液33ml,接种至3瓶 200ml营养肉汤培养基中,按照上述方法进行金黄色葡萄球菌检验。

2 结果

2.1 菌回收率测定

结果见表2,显示用常规法测定细菌、霉菌的回收率,大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的回收率均小于70%,改用培养基稀释法重新进行验证,显示培养基稀释法3测定的菌回收率均大于70%。

表2 不同测定复方樟脑乳膏菌回收率试验

2.2 金黄色葡萄球菌控制菌检查法验证结果

金黄色葡萄球菌控制菌检查法验证结果见表3,显示1∶10供试液检验中阳性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌。1∶33供试液检验中,阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌,阳性菌对照组检出金黄色葡萄球菌。由以上结果可见,可以采用1∶33供试品溶液进行本品的金黄色葡萄球菌检查。

表3 金黄色葡萄球菌控制菌检查法验证

3 讨论

复方樟脑乳膏是具有一定抑菌作用的药品,在选择消除其抑菌作用的方法时,由于药品本身的物理性质所限,只能采用培养基稀释法,而其它消除抑菌作用的方法则不可行。通过不同浓度的培养基稀释方法的加菌回收比较,最终确认采用1∶33供试品溶液按培养基稀释法(0.1ml◦皿-1)进行试验：用1∶33供试品溶液按培养基稀释法(0.1ml◦皿-1)进行细菌、霉菌检查;采用供试品溶液(1∶33)33ml加入至相应的增菌培养基进行金黄色葡萄球菌(200ml◦瓶-1)测定。

1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(S).一部.北京：化学工业出版社,2005：附录70-79.

2 苏德模,马绪荣.药品微生物学检验技术[M].北京：华龄出版社,2007,209-227.