熊静悦 牟道华 唐大轩 谭正怀

(四川省中医药科学院◦国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室,四川 成都 610041)

白附子始载于汉代《名医别录》,植物来源有毛茛科植物黄花乌头Aconitum coreanum(Levl)Rap.的块根及天南星科植物独角莲Typhonium giganteum Engl.的干燥块茎,后者为《中国药典》2005年版收载,即本研究采用品种。白附子为中医临床常用药,具有祛风湿、定惊搐、解毒散结止痛等功效,主要用于中风痰壅,口眼㖞斜,破伤风等症的治疗,由于历代本草记载白附子为毒性中药,故本品一般经炮制后使用(如矾制、姜制、黑豆制、甘草制、皂角制等),生品多为外用。为了明确白附子的毒性作用及其物质基础,使其毒性能够定性、定量、定位地表达,本研究通过小鼠急性毒性试验,初步探讨了生、制白附子70%乙醇提取物及制白附子水提物的毒性范围,以期为其临床应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 样品 制白附子水提取物,乳白色膏体,1ml浸膏相当于1.43g原生药;制白附子70%乙醇提取物,深棕色膏体,1ml浸膏相当于13.33g原生药;生白附子70%乙醇浸膏,棕色膏体,1ml浸膏相当于9.09g原生药。制白附子(姜矾法,按 2005版药典方法进行炮制)和生白附子饮片购自四川新荷花饮片公司,提取物由中国科学院成都生物研究所提供,给药时以蒸馏水配制,给药剂量以原生药g◦kg-1表示。

1.2 实验动物 昆明种小鼠,SPF级,♀♂各半,由四川省中医药科学院实验动物中心提供,合格证号SCXK(川)2008-19。小鼠饲养于SPF屏障系统中,光照条件为12h/12h明暗交替,温度20℃-26℃,相对湿度40%-70%,以鼠全价颗粒饲料喂养。

1.3 方法

1.3.1 制白附子水提取物最大给药量试验 40只小鼠禁食不禁水16h后按体重随机分为对照组和制白附子组,20只◦组-1,以最大浓度(1.43g原生药◦ml-1)、最大给药体积(0.4ml◦10g-1)灌胃小鼠2次,间隔6h;给药当天密切观察小鼠体征(1次◦h-1,共 4次),此后每天观察1次,连续 14d;于给药前、第7d及第14d称体重,第 14d处死小鼠取心、肝、脾、肺、肾计算脏器指数。

1.3.2 制白附子70%乙醇提取物LD50试验 50只小鼠禁食不禁水16h后按体重随机分为5组,分组及给药见表2,给药体积0.3ml◦10g-1,灌胃给予小鼠1次;给药当天密切观察小鼠体征(1次◦h-1,共4次),此后每天观察1次,连续观察14d并记录小鼠出现的中毒及死亡情况。

1.3.3 生白附子70%乙醇提取物最大给药量试验 40只小鼠禁食不禁水16h后按体重随机分为对照组和生白附子组,20只◦组-1;以最大浓度(9.09g原生药◦ml-1)、最大给药体积灌胃小鼠1次。给药当天及此后14天同1.3.1方法观察。

2 结果

2.1 制白附子水提取物最大给药量试验

未发现小鼠死亡或行为学、排泄物、分泌物等出现异常。小鼠灌胃给予制白附子水提取物或蒸馏水后,给药组体重与对照组比较无统计学差异,见表1。肉眼检查各组小鼠主要脏器均未发现明显异常;脏器系数见表1。制白附子水提取物的最大给药量为114.4g◦kg-1。

表1 制白附子水提取物对小鼠体重的影响(,n=20)

表1 制白附子水提取物对小鼠体重的影响(,n=20)

组别 剂量(g◦kg-1)体重(g)脏器系数(g◦10g-1)给药前 7d 14d 心 肝 脾 肾 肺对照组 -- 18.33±1.44 30.73±3.21 34.04±3.19 0.05±0.01 0.61±0.06 0.04±0.01 0.14±0.03 0.06±0.01制白附子水提物组 114.4 17.89±1.41 30.41±2.91 34.84±4.48 0.05±0.01 0.57±0.07 0.04±0.01 0.13±0.02 0.06±0.01

2.2 制白附子70%乙醇提取物LD50试验 由Bliss法计算得LD50为250.04g◦kg-1,LD5为183.04g◦kg-1,LD95为341.56g◦kg-1。制白附子70%乙醇提取物对小鼠毒性症状多见呼吸急促,俯卧、自发活动减少,解剖死亡小鼠见呼吸先于心脏搏动停止。

表2 制白附子70%乙醇提取物对小鼠LD50

2.3 生白附子70%乙醇提取物最大给药量试验

药物组小鼠给药后自发活动较对照组减少,给药后24h内雄性小鼠死亡2只,雌性小鼠死亡3只,呼吸先于心脏搏动停止。小鼠灌胃给予生白附子70%乙醇提取物或蒸馏水后,给药组体重与对照组比较无统计学差异,见表3。肉眼检查各组小鼠主要脏器均未发现明显异常,给药组心、肝、脾、肺、肾脏器系数与对照组比较无统计学差异。两组初始小鼠数均为20只,给药后生白附子70%醇提物组小鼠死亡5只,测得生白附子70%乙醇提物的 LD50大于364.0g◦kg-1。

表3 生白附子70%醇提物对小鼠体重的影响(,n=20)

表3 生白附子70%醇提物对小鼠体重的影响(,n=20)

组别 剂量(g◦kg-1)体重(g)脏器系数(g◦10g-1)给药前 7d 14d 心 肝 脾 肾 肺对照组 -- 20.45±1.27 35.06±4.16 42.39±5.43 0.05±0.01 0.58±0.09 0.03±0.01 0.13±0.02 0.06±0.01生白附子70%醇提物组 364.0 20.78±0.95 34.47±3.80 39.96±5.67 0.05±0.01 0.53±0.07 0.03±0.01 0.12±0.02 0.06±0.01

3 讨论

白附子为中医临床常用的有毒中药之一,历代本草除《日华子本草》外,均记载其为毒性药材[1],1988年国务院发布的《医疗用毒性药品管理办法》也将白附子列入毒性药品管理范围,故除外用和少数配方外,其均以炮制品入药。一般认为,白附子经白矾(KAl(SO4)2◦12H2O)及生姜炮制后,其毒性成分被Al(OH)3凝胶吸附或中和从而解毒[2],但此法在炮制过程中又引入了数百倍以上的Al3+[3],极易对神经系统造成影响。有报道一名女性患者服用制白附子(约20g)煎液,20min后出现口舌及四肢麻木、头晕、心慌、言语不清,恶心、呕吐数次后意识丧失,呼之不应[4];40%制白附子水混悬液可造成家兔结膜水肿(0.12g◦只-1),制白附子冷水浸液20.0g◦kg-1腹腔注射,小鼠72h内死亡率为40%,大鼠连续21d灌胃制白附子混悬液6.0g◦kg-1,其体重增加减慢[5];制白附子水提液静注小鼠的LD50为 29.6±2.7g◦kg-1,生白附子的 LD50为 32.6±2.7g◦kg-1,制白附子温水浸液180.0g◦kg-1分3次灌胃小鼠,见竖毛俯卧,制白附子煎剂120.0g◦kg-1分4次灌胃小鼠,出现呼吸困难、活动减少,并有动物死亡[6],由此可见,制白附子尚存在潜在的毒性作用。

本研究测得制白附子水提物的最大给药量和70%乙醇提取物的 LD50分别为 114.4g◦kg-1和 250.04g◦kg-1,生白附子70%乙醇提取物的 LD50＞364.0g◦kg-1,以期为中医临床应用提供剂量设计的参考。

1 杨振翔,张振凌.禹白附炮制及临床应用研究进展[J].医药世界,2006,7：175-177.

2 周玉朱.有毒中药重用摭拾[J].中国中医药信息杂志,2000,7(1)：64-65.

3 王毅,张静修.制白附子饮片中铝含量的研究[J].中成药,1992,14(5)：19-21.

4 周晓霞,汪弘.白附子中毒1例报告[J].浙江实用医学,2003,8(1)：49-49.

5 吴连英,仝燕,程丽萍,等.白附子不同炮制品毒性比较研究[J].中国医药学报,1992,7(1)：13-15.

6 常东明,李庆华,朱明,等.白附子炮制前后药理作用的初步观察[J].中药通报,1981,4：23-25.