丛 悦,吴宏欣,冯 玲,王 艳,张 芳

(1.河南大学 药物研究所,河南 开封 475004;2.河南大学医院,河南 开封 475004;3.开封市第二人民医院 药剂科,河南 开封 475004)

紫花苜蓿3个品种的中药鉴定研究及总黄酮的含量比较

丛 悦1,吴宏欣2,冯 玲3,王 艳1,张 芳1

(1.河南大学 药物研究所,河南 开封 475004;2.河南大学医院,河南 开封 475004;3.开封市第二人民医院 药剂科,河南 开封 475004)

目的:对紫花苜蓿(Medicago sativa L.)3个品种陇东、北极星和阿尔冈金进行中药鉴别。方法:采用性状鉴别、显微鉴别及紫外分光光度法的方法。结果:紫花苜蓿3个品种根、茎特征没有区分,粉末特征有一定差别。陇东中总黄酮含量为0.0419%,阿尔冈金为0.0436%,北极星为0.0422%。结论:本实验结果可以为制定药材质量标准,研究和开发利用该药资源提供实验依据。

紫花苜蓿;性状鉴别;显微鉴别;紫外分光光度法

紫花苜蓿(Medicago sativa L.)为豆科植物紫花苜蓿的地上部分,全国各地多有栽培,是迄今发现营养最全面的草本植物之一,也是世界公认的健康食品。紫花苜蓿味苦、微涩、性平,有清热利尿和凉血通淋的功效,主治热病烦满、目黄赤、小便黄、沙石淋病等症,主要含皂苷、多糖、黄酮等成分[1]。至今未见对紫花苜蓿3个品种陇东、北极星、阿尔冈金的生药学研究报道,本文采用性状鉴别、显微鉴别及总黄酮含量测定的方法,对其进行生药学研究。

1 材料与仪器

重庆光电XSZ-H光学显微镜;721紫外分光光度计;实验药材于2009年3月采自河南大学生命科学学院实验室,经河南大学生命科学学院李文娆副教授鉴定为豆科植物紫花苜蓿的3个品种分别为陇东、北极星和阿尔冈金;芦丁对照品(编号080-200306)购于郑州药检所。

2 方法和结果

2.1 性状鉴别

紫花苜蓿的3个品种分别为陇东、北极星和阿尔冈金,植株高 30～100 cm。叶为羽状复叶;小叶3枚,倒卵形、椭圆形或披针形,长1～2.5 cm,宽约0.5 cm,先端圆钝或截形,中脉鞘突出,基部楔形,仅上部叶缘有锯齿,中下部全缘,上面无毛或近无毛,下面有白色伏毛;小叶柄长约1 mm,有毛托叶,披针形,先端尖,有柔毛,长约7 mm。总状花序腋生,花较密集,近头状;花萼有柔毛,茂盛齿窄披针形,急尖;花冠蓝紫色或紫色,长于花萼。

2.2 粉末特征

取紫花苜蓿的3个品种陇东、北极星和阿尔冈金进行石蜡切片及粉末制片[2-3],绘制该药材的显微特征墨线图进行描述。

2.2.1 陇东品种 粉末黄绿色,表皮细胞多角形或不规则,细胞壁波状弯曲,下表皮细胞不规则,气孔为不等式,副卫细胞3个。非腺毛较多,由1个细胞构成,长560～690 μ m,表面有许多疣状突起。导管多为螺纹,多聚集,有分叉。每个薄壁细胞内有2个草酸钙方晶。见图1。

2.2.2 阿尔冈金品种 粉末黄绿色,表皮细胞多角形或不规则,细胞壁波状弯曲,下表皮细胞不规则,气孔为不定式,副卫细胞5个。非腺毛较多,由1个细胞构成,长520～660 μ m,非腺毛表面有许多疣状突起,疣点突出。导管多为螺纹,多聚集,有分叉。每个薄壁细胞内有1个草酸钙方晶,细胞外少有散在。见图2。

2.2.3 北极星品种 粉末黄绿色,表皮细胞多边形,细胞壁平直,下表皮细胞不规则,气孔为不定式气孔,副卫细胞3个。非腺毛较多,非腺毛表面有许多疣状突起,疣点不如阿尔冈金品种和陇东品种突出。导管多为螺纹,少有网纹,多聚集,有分叉。晶鞘纤维多簇生。见图3。

2.3 组织特征

2.3.1 紫花苜蓿的根横切面特征 根横切面维管束多数,呈近散生状,中心无髓。木栓层薄,由3～5层木栓细胞组成,中柱鞘纤维多,排列成弯月形,韧皮部窄,木质部宽广,导管多呈径向放射状排列,维管束为无限外韧性,维管束之间的射线明显。可见草酸钙方晶及晶鞘纤维。见图4。

图1 陇东粉末显微图

图2 阿尔冈金粉末显微图

图3 北极星粉末显微图

图4 根的横切面显微详图

2.3.2 紫花苜蓿的茎横切面特征 茎横切片,维管束多数,呈近散生状,中心髓部宽广,皮层较宽,可见中柱鞘纤维,木质部不发达,维管束为无限外韧性。见图5。

图5 茎的横切面显微详图

3 总黄酮含量测定[4]

3.1 标准溶液配制

精密称取 10mg芦丁标准品,用体积分数为50%乙醇溶液稀释到50mL,即得标准溶液。

3.2 标准曲线绘制

精密量取标准溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0 和5.0mL,分别置于10mL容量瓶,各加体积分数为50%乙醇溶液至5mL,精密加入质量分数为5%亚硝酸钠溶液0.3mL,摇匀放置6min。加入质量分数为10%硝酸铝溶液0.3mL,摇匀放置6min,加入质量分数为1%氢氧化钠溶液4mL,分别用体积分数为50%乙醇稀释至刻度,摇匀,放置15min,置比色杯中在510nm处测定吸光度,测3次求平均值,绘制标准曲线,结果表明芦丁在0～0.1 g/L浓度范围符合Beer定律,吸收度与浓度呈良好的线性关系,其回归方程为:y=12.227x,r=0.9998。

3.3 供试品溶液配制

精密称取紫花苜蓿3个品种的样品粉末各0.5 g(60目),加10倍量无水乙醇超声提取20min,将提取液移至250mL容量瓶内定容至刻度线,量取200mL浓缩,定容到10mL。

3.4 精密度实验

精密量取标准溶液,按照“3.2”方法加入显色剂,连续测定6次,测得吸光度的RSD为0.15%。实验结果表明,仪器精密度良好。

3.5 稳定性实验

精密量取标准溶液,于室温分别放置0、2、4、6、12和24 h后,按照“3.2”方法加入显色剂,测得吸收度的RSD为0.23%。结果表明标准溶液在24 h内稳定。

3.6 重复性实验

精密称取同一品种药材粉末6份,按供试品溶液制备方法配制6份供试品溶液,按照“3.2”方法加入显色剂,测得吸光度RSD为2.86%,表明具有良好的重复性。

3.7 样品测定

精密量取3个样品的供试品各 1.0mL,按照“3.2”方法加入显色剂测定吸光度,测3次求平均值,结果见表1。

表1 样品测定结果(n=3)

4 小结

紫花苜蓿3个品种粉末特征为导管聚集,非腺毛多见,气孔有不定式和不等式2种。紫花苜蓿茎和根的横切面具有正常维管柱特征。紫花苜蓿3个品种的总黄酮含量有差别,其中北极星品种的总黄酮含量较高。总之,紫花苜蓿性状、显微和总黄酮含量测定都可以为药材质量标准的制定提供参考依据。

[1]王胜超,张国刚,米文珍.紫花苜蓿化学成分及药理活性的研究进展[J].沈阳药科大学学报,2009,26(3):243-248.

[2]杨春澍.药用植物学[M].上海:上海科学技术出版社,2005:336.

[3]李景原,谷艳芳.生物制片原理与技术[M].开封:河南大学出版社,1998:1-50.

[4]杨中林.中药炮制学实验与指导[M].北京:中国中医药出版社,2003:19.

[责任编辑 姬 荷]

Traditional Chinese medical appraisal research for 3 species of Medicago sativa L.and the comparison of the total flavanone content

CONG Yue1,WU Hong-xin2,FENG Ling3,WANG Yan1,ZHANG Fang1(1.Institute of pharmacology,Henan University,Kaifeng,Henan 475004;2.Hospital of Henan University,Kaifeng,Henan 475004;3.Department of Medicanent,Kaifeng Second People＇s Hospital,Kaifeng,Henan 475004)

Objective:To identify 3 species of Medicago sativa L.,namely Longdong,Beijixing and Aergangjin.Methods:3 species of Medicago sativa L.were identified by property distinction,microscopic distinction and ultraviolet spectrophotometric method.Results:There was no distinction between the roots and stems of 3 species of Medicago sativa L.while there exited the certain difference in the flower powder of the three.The total flavanone content in Longdong was 0.0419%,the Aergongjin 0.0436%and Beijixing 0.0422%.L.Conclusion:The experimental results can be used as the quality control standards to prepare the medicinal materials and provide the experimental evidence for developing and using this herbal resource.

Medicago sativa L.;Property distinction;Microscopic distinction;Ultraviolet spectrophotometric method

R284.1

A

1672-7606(2010)03-0170-03

2010-04-20

河南大学博士启动基金

丛悦(1978-),女,辽宁辽阳人,博士,副教授,从事中药学及中药炮制学研究及教学工作。