张国欣 徐金升 阮琳 薛兰芬 聂丽敏 潘志兰 牛文明

糖基化终末产物(AGEs)是还原糖(如葡萄糖、果糖及葡萄糖-6-磷酸等酮糖)与蛋白质、氨基酸等的游离氨基酸通过一系列复杂的非酶促反应形成的结构多样的不可逆聚合物［1］。在不同组织中AGEs的聚集可以通过诱发氧化应激等机制导致糖尿病的各种慢性并发症［2］。肾脏是氧化应激反应比较敏感的组织，所以AGEs在糖尿病肾病的发生发展中起着重要作用。本试验探讨了糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐水平及糖尿病肾病分期对血清AGEs水平的影响，以期为进一步研究AGEs在糖尿病肾病中的作用提供依据。

1 资料与方法

1．1 一般资料 2007年1至9月在我科住院明确诊断糖尿病肾病患者27例，男15例，女12例;平均年龄(64±7)岁;所有患者糖尿病病史＞5年，查眼底均合并视网膜病变，既往无高血压及肾脏病史。按Mogensen的DN分期:Ⅲ期DN患者(尿微量白蛋白30～300 mg/24 h)8例，Ⅳ期DN患者 (尿蛋白定量＞0．5 g/24 h)11例，Ⅴ期未进行血液透析DN患者血肌酐(Scr)＞133 μmol/L［(239±98)μmol/L］8例。

1．2 方法 血清AGEs的检测采用竞争性 ELISA法，由于AGEs存在共同的抗原决定簇，因此，可以用单一AGEs修饰蛋白的抗体检测总AGEs。在多种AGEs修饰蛋白中抗AGERNase抗体能够非选择性地识别所有 AGEs复合物，但与非AGEs修饰的蛋白及Amadori物质不起反应。

1．2．1 标准曲线及标准方程的建立［3］:3 mg/L AGE-Ag 100μl包被96孔板(pH 9．6碳酸氢盐缓冲液)，37℃ 2 h，4℃过夜，封闭1 h(封闭液0．01 mmol/L，PBS-1%BSA，150 μl)，洗3次;加入不同浓度标准 AGE-Ag(分 别 为 100、10、8、4、2、1、0．1 mg/L)和 AGE-Ab各50 μl(1∶1 000)，同时设总对照(不加标准AGE-Ag)和空白对照(不加AGE-Ab)，室温孵育2 h，振荡，洗3 次;加AKP-羊抗兔 IgG(1∶4 000，Sigma)100 μl，37℃孵育1 h，洗6次，稀释液均为0．01mmol/L PBS和0．5%Tween 20和2%山羊血清混合液，清洗液均为0．01 mmol/L PBS和0．5%Tween 20的混合液，均设复孔。……