西南齿唇兰的组织培养与快速繁殖

2010-01-31李洪超

文山学院学报 2010年1期

张铁,李洪超

(1.文山学院生化系,云南文山 663000;2.文山州生物资源开发研究中心,云南文山 663000)

1 植物名称

西南齿唇兰 [Anoectochilus e lwesii(Clarke ex Hook.f.)King et Pantl](图 1),别名:西南开唇兰(横断山区维管植物、中国兰花全书)、锺氏齿唇兰(台大实验林研究报告)、锺氏金线莲 (台湾兰科植物彩色图志)[1]。

2 材料类别

种子。

3 培养条件

种子萌发培养基: (1)MS+100 mL·L-1椰汁;(2)1/2MS+100 mL·L-1椰汁。原球茎继代增殖培养基: (3)MS+6-BA 1.0 mg·L-1(单位下同)+NAA 0.5 mg·L-1; (4)MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.0。生根培养基: (5)1/2MS+6-BA0.2+NAA0.05+AC(活性碳 )0.5 mg·L-1+蛋白胨2 g·L-1+100 mL·L-1香蕉汁。以上培养基中均加入 3%的蔗糖、5.5 g卡拉胶,pH 5.6～5.8。培养温度 (25±2)℃,光照每天 10～12 h。

4 生长与分化情况

4.1 材料的无菌处理

供试种子来源于移栽 1年的野生西南齿唇兰未开裂的蒴果。首先在超净工作台内将蒴果用 75%的酒精处理 30 s,无菌水冲洗 3～5次,将种子取出,再用 0.1%的 HgCl2溶液浸泡 10 min,无菌水冲洗 3～5次,用无菌滤纸吸干种子表面水分。用解剖刀切开蒴果,将种子接种到培养基上。

4.2 种子萌发

将种子分别接种到萌发培养基 (1)和 (2)上,暗培养 30 d后,可见白色原球体出现 (图 2),转入光下培养,1周后原球茎转绿 (图 3),4周后原球茎上长芽。培养基 (1)的萌发率比较低,在50%左右,且培养 1个月后发现部分原球茎死亡;培养基 (2)上种子的萌发速度和生长速度更快,约有 85%萌发,结果表明 1/2MS培养基较MS培养基更有利于西南齿唇兰种子萌发。

4.3 原球茎继代增殖

将初代培养的原球茎和芽分别转接至培养基(3)和 (4)上继代增殖培养,在培养基 (3)和(4)上原球茎大多形成植株,但是在培养基 (4)上原球茎增殖、生长速度最快 (图 4),约 50～60 d能继代增殖 1次。由此可见,生长素NAA和细胞分裂素 6-BA组合是原球茎继代增殖的主要因素,以细胞分裂素与生长素浓度比为 1∶2时效果最佳。

4.4 生根与移栽

将增殖瓶中 3～4 cm长的苗切下,接入培养基(5)中进行根的诱导。15 d开始生根 (图 5),生根率可达 98%,待根长至 3～4 cm时,生长为高 3～5 cm的小苗,在室温下炼苗 1周,取出洗去根部培养基,移栽至腐叶土∶锯木 (2∶1)的基质中。管理中保持适度温湿度,置于阴凉通风处栽培,期间不要浇水,有利于新根生长和防止病害发生,4周后可以进行正常水、肥、药管理,成活率可达 90%以上。

5 意义与进展

西南齿唇兰为兰科开唇兰属植物,为国家 II级保护植物 (第二批),西南齿唇兰主要靠有性繁殖和无性繁殖两种方式繁衍种群,种子自然繁殖非常困难,自然增殖率低,通过种子进行组织培养可以解决这个问题。同属的金线莲、台湾金线莲和滇越金线莲的组织培养已有报道[2-5],但西南齿唇兰的组织培养和快速繁殖尚未见报道。本文研究结果对开齿唇兰属植物的保护与开发,有一定的参考价值。