赵玉玲,张天生,张巧艳

(1.河南省沁阳技术监督局检验测试中心,河南沁阳 454550;2.广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005)

沙门菌属(Salmonella)是肠杆菌科中一大类重要致病菌,感染畜禽后可引起一系列的疾病,成为畜禽肉胴体、畜禽产品污染的重要来源[1],并可通过各种途经传染给人,引起人的食源性疾病。在我国70%～80%细菌性食物中毒事件是由沙门菌引起,而引起沙门菌中毒的食品中,约90%是肉、蛋、奶等畜产品[2]。传统的检测方法是先采用非选择性和选择性培养基增菌,然后分离培养、生化反应和血清学鉴定等,检验程序十分繁琐,且肠杆菌科细菌间的生化反应多有交叉,需4～7 d才能完成,因此传统的检测方法在快速、敏感与特异性等方面有自身的局限性[3]。本研究应用传统的生化鉴定的方法对受试菌株进行了鉴定,同时根据编码沙门菌毒力蛋白基因结构特点,成功地建立了沙门氏菌的PCR检测方法,通过对比为沙门菌的检测提供了更快速、敏感的方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 受试菌株 来自某生猪屠宰场生猪胴体体表和肌肉样品中分离的可疑沙门菌4株。

1.1.2 对照菌株 本研究室保存的鼠伤寒沙门菌C77-31菌株。

1.1.3 试剂及培养基 buffer、dNTPs、Taq酶、低分子量PCR Marker,购自广州东盛生物工程公司。细菌培养基包括肉汤增菌液、三糖铁琼脂、选择培养基和生化鉴定管等,均按国标配制或购自上海生工公司。

1.1.4 仪器 自动摇床(ZD-9556ZD)、电泳仪(B IORAD PowerPacBasicT M)凝胶成像分析系统(uV I)、PCR仪(PE2400)。

1.1.5 引物的设计 根据已发表的鼠伤寒沙门菌侵袭基……