刘新育,靖梅贞,宋安东,刘亮伟,陈红歌

(河南农业大学生命科学学院,河南郑州 450002)

天然纤维素原料是地球上最丰富的可再生资源,但目前被利用的只有11%。纤维素大多被半纤维素包裹,其降解必然受到半纤维素(大多是木聚糖)的制约,所以纤维素酶和木聚糖酶两种酶的联合使用,广泛应用到造纸、食品加工、纺织、动物饲料和能源工业等诸多领域[1-2],具有明显的应用效果。自然界中的微生物通常能同时产生纤维素酶和木聚糖酶,但目前同时产纤维素酶和木聚糖酶的菌株产酶能力还不理想,所以获得既产纤维素酶又产木聚糖酶的微生物成为高效降解纤维素原料的热点途径[3]。本研究利用纤维素酶活力为目前国内领先水平的斜卧青霉A50作为出发菌株,通过原生质体诱变育种方式获得了产双酶且双酶酶活都很高的6号菌,并对该菌株双酶的酶学性质进行了初步研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验菌株 斜卧青霉(Penicillium decumbens)A50,由山东大学微生物技术国家重点实验室曲音波教授馈赠。

1.1.2 试剂与仪器 桦木木聚糖是Sigma产品,蛋白质分子量Marker为TaKaRa产品;DNS溶液配置参照文献[4]方法。UN ICO-7200型可见分光光度计为上海尤尼柯仪器有限公司产品;凝胶成像系统为Gene公司产品。

1.1.3 培养基 ①菌丝生长培养基：改良Mandels营养盐液中加总液量10%的麸皮,煮沸10～15 min。4层纱布过滤,滤液5 000 r/min离心5 min,上清液即为菌丝生长培养基;②再生高渗培养基：向生长培养基中加入0.6 mol/L的葡萄糖;③孢子萌发培养基：生长培养基中加入0.059%的柠……