柯吴坚 刘原君 姚卫锋 等

【摘要】目的：了解性病门诊就诊者中人乳头瘤病毒(human papinomavims，HPV)及其它性传播疾病(sexuallytransmltted disease，STD)病原体混合感染的流行情况。方法：对90例临床样本采用聚合酶链反应(polymerase chain reac-tion，PCR)技术检测尿道或宫颈拭子HPV DNA，同时检测其它STD病原体。结果：在90例就诊者中，HPV DNA阳性13例(14.4％)，女性、混合感染数多者及教育程度低者HPV感染率高(P<0.05)，HPV感染者至少同时伴有1种其它STD病原体感染。结论：HPV在性病门诊就诊者中存在一定的感染率，HPV感染与性别、混合感染数、教育程度等相关，HPV与其它STD病原体的混合感染多见。

【关键词】人乳头瘤病毒；性传播痰病；聚合酶链式反应

尖锐湿疣(condyloma acuminature，CA)是一种常见的性传播疾病(sexuauy transmitted disease，STD)。截止到2004年，我国尖锐湿疣的发病率为11.64／10万，占报告STD人数20.35％，排在7种报告STD的第三位。尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(human papiuoma—vims，HPV)感染引起的良性增生性疾病，在全球STD中，HPV感染约占15％～20％，在性活跃成人的一生中，75％的人感染过HPV，单在美国每年就有620万人新感染HPV。本研究通过检测天津医科大学总医院性病门诊就诊者HPV的感染以了解本地区HPV的感染情况及其与年龄、婚姻、教育程度、性伴数以及混合感染的相关性。

1材料和方法

1.1研究对象

天津医科大学总医院2009年4月至2009年6月性病门诊就诊者90例，男性60例，女性30例；年龄为18-70岁，平均32.47岁。

1.2标本采集

男性用灭菌细小棉拭子缓慢伸入尿道内约2cm处，停留片刻，轻轻捻转取柱状上皮细胞；女性采用窥阴器暴露官颈后，先用无菌棉拭子拭去宫颈表面分泌物，再用新的棉拭子伸入宫颈口内约lcm处，停留片刻，轻轻捻转取官颈黏膜上皮细胞；抽静脉血进行梅毒螺旋体(Treponema pallidum，TP)血清学及人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)血清抗体检测。

1.3方法

1.3.1 HPV DNA的检测过程：①引物合成：扩增HPV L1基因片段的通用引物对MY09／ll由南京金思特科技有限公司合成并纯化。②提取模板DNA。③PCR反应：反应总体系包含Premix Taq、模板DNA、上下游引物和灭菌蒸馏水。反应条件为94℃先加热5min后进入循环，循环条件为：94％变性30sec、55％退火30sec、72~C延伸60sec，共循环35次，最后72't2延伸8sec。④PCR产物鉴定：1％琼脂糖凝胶电泳在450bp处出现扩增条带说明HPV DNA阳性。

1.3.2其它STD病原体的检测沙眼衣原体(Chlamydia trachomafis，cT)采用免疫层析法检测CT特有的特异性脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)抗原；TP血清学检查采用梅毒快速血浆反应素试验(rapid plasma reagin test，RPR)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(treDonema pallidum particle aggutinafion test，TPPA)；HIV血清学检查采用酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay，ELISA)方法检测HIV(I+II型)抗体。以上各项实验严格按试剂盒说明书进行操作。解脲支原体(Ureaplasma urealyticum，UU)、白色念珠菌(Candida albicans，CA)、淋病奈瑟菌(Neisse-ria gonorrhoeae，NG)分别采用本室自制牛肉浸汁培养基、沙氏培养基、巧克力培养基进行培养和鉴定。

1.4统计分析

采用SPSS 15.0统计软件进行数据分析，两组间感染率比较采用X²检验，两组间均数比较采用￡检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1性病门诊患者HPV检测结果

在90例就诊者中，共有13例检测出HPV DNA，占总检测人数的14.4％；其中有6例临床诊断为尖锐湿疣。见图1。

2.2HPV感染相关因素分析见表1。

从表1可见，HPV的感染与性别、混合感染数、教育程度相关，女性、混合感染数多者及教育程度低者HPV感染率高(P

2.3 HPV感染与其它STD病原体的混合感染情况

见表2。

表2显示，13例HPV感染者都伴有1种或1种以上STD病原体感染，HPV感染同时合并CT和UU的感染率最高，达38.5％，其中有l例HPV感染者同时伴有另外4种STD病原体(CT、UU、IP、CA)感染。

3讨

论

HPV是一种具有高度宿主和组织特异性的DNA病毒，不同型的HPV感染可以引起不同的临床表现，其中侵犯泌尿生殖道上皮约有25～30个型。根据HPV感染宿主后的临床表现不同，可分为典型(显性)感染、HPV亚临床感染(subclinical papillomaviral infee.tion，SPI)和潜伏(隐性)感染(1atent papillomaviral in—feetion，LPI)。SPI和LPI的感染率明显高于典型(显性)感染。在性活跃人群中，至少有15％为SPI，而只有1％的HPV感染者临床出现可见的尖锐湿疣损害。SPI和LPI也具有传染性，在一定条件下可能发展成尖锐湿疣，临床医生通过采取各种干预手段来控制SPI和LPI，可有效的减少尖锐湿疣的发生和复发。因此，通过检测HPV可及早地发现SPI与LPI。但HPV在组织细胞内以复制的方式进行繁殖，很难在体外的组织或细胞培养中生长，也很难在实验动物中接种生长，并缺少一种可靠的血清学检测方法，所以目前主要应用分子生物学技术检测HPV。本实验所采用PCR方法是一种特异性强、敏感性高、简便快捷的分子生物学技术。选用Manos等设计的MY11／09通用引物对，通过扩增HPV晚期区L1开放阅读框架(open reading frame，ORF)序列，可以检测出39种HPV类型，它们中包含了绝大多数的HPV高危型及低危型，有利于HPV的流行病学调查。

本研究应用PCR技术对90例性病门诊就诊者进行HPV DNA检测，HPV检出率为14.4％(13／90)，与Van der Snoek等报道的15.8％接近，但低于Wik—strom等检测的20.4％。本研究显示，女性HPV检出率为26.7％(8／30)，与李红玉等对4666例妇科门诊女性患者HPV阳性率25.50％相仿；而男性就诊者HPV检出率为8.3％(5／60)，低于唐旭等对杭州地区性病门诊男性就诊者HPV DNA检测的阳性率13.8％(42／305)，可能与地区差异或样本量不够大有关。13例HPV阳性患者中，只有6例临床诊断为尖锐湿疣，其余7例没有出现肉眼可见的皮肤黏膜损害，为SPI或LPI。对这部分患者也应给予积极的治疗和随诊，以减少尖锐湿疣的发生。

HPV的感染与性别、混合感染数、教育程度相关，而与婚姻情况和年龄无关。女性的HPV感染率明显高于男性，二者差异具有统计学意义，可能与女性生殖道特殊的生理结构有关，因而比男性更易感染HPV.该结果与Siavinsky等的研究结果一致。HPV阳性者平均性伴数与HPV阴性者差异无统计学意义，但女性HPV感染者性伴数明显低于男性，差异具有统计学意义，说明随着男性的性伴数增多，将导致其与HPV感染者接触的机会增加。此外，性伴数的增多常伴有性生活频率的增加，使其感染HPV的风险性随之增高，而此项风险因素在女性身上体现并不显著。HPV感染者学历明显低于HPV阴性者，二者差异具有统计学意义，HPV阳性检出率与受教育程度成反比，因此提示应加强对文化程度较低人员进行必要的伦理道德和卫生保健知识宣传教育。

HPV感染者常同时伴有其它STD病原体感染，可能由于HPV感染导致患者体内及局部皮肤黏膜细胞免疫功能存在不同程度障碍，降低患者体内及局部的抗病能力，有利于其它STD病原体的感染；另外，某些糜烂溃疡性STD(如梅毒和生殖器疱疹等)可导致皮肤黏膜屏障受到破坏，有助于HPV的侵入，两方面的共同作用使HPV感染者出现STD高混合感染的情况。HPV的混合感染常使患者的临床症状变得复杂，给临床诊断和治疗带来困难。许多研究表明，尖锐湿疣合并其它STD是尖锐湿疣复发的重要因素之一。而在实际临床工作中，不少医生在诊断尖锐湿疣后马上给予患者进行各种治疗，而忽略了对其它STD病原体的检测，这样不仅会遗漏其它STD，也为尖锐湿疣的复发埋下隐患。在本研究中，13例HPV感染者全部伴有1种或1种以上的STD病原体混合感染，其中有1例同时发生5种病原体的混合感染。HPV的混合感染如此多见，提示临床医生应对HPV感染者或尖锐湿疣患者进行详细全面的STD病原学检查，以便发现STD混合感染并给予针对性治疗，从而提高尖锐湿疣的治愈率，减少其复发率。因此调查性病门诊就诊者的HPV感染情况及混合感染状况对性病的防治具有重要意义。