王晨亮 薛国辉 陈雪礼 刘晓峰 张仕佩 华琳 李观华▲

1.江西省九江市第一人民医院病理科，江西九江 332000；2.江西省九江市第一人民医院检验科，江西九江 332000

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率都很高，乳腺癌发病率在女性超过35岁之后会大大增加，55～65岁达到发病高峰，乳腺癌发病也日益年轻化[1]。据统计，在2018年全球新增乳腺癌病例中就有62.6万人因乳腺癌死亡，对现代女性的健康带来了极大威胁[2-3]。现今乳腺癌的发病机制尚不明确，了解乳腺癌发病的机制，从分子角度了解乳腺癌是具有意义的[4]。三阴性乳腺癌占乳腺癌总数的15%～20%，是一类较为特殊的乳腺癌类型[5]。人类表皮生长因子受体2，孕激素受体和雌激素受体表达均为阴性时患者属于三阴性乳腺癌[6]。三阴性乳腺癌恶性程度较高，侵袭能力很强，易出现远处转移，疾病后果较为严重，预后不良，且死亡率较高[7]。LAIR-1是人类丝氨酸/苏氨酸激酶（aurora/ipllp kinase，AIK）中的一个蛋白类型，曾被称为乳腺癌扩增激酶（breasttumor amplified kinase，BTAK）。在细胞有丝分裂过程中，纺锤体形成和胞质分裂尤为关键，LAIR-1是纺锤体形成所必须的蛋白。LAIR-1与细胞有丝分裂具有相关性，在多种恶性肿瘤中均有表达[8]。本研究探讨LAIR-1在三阴性乳腺癌中的表达情况及临床价值，旨在为三阴性乳腺癌的评估诊断治疗提供一定参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年5月至2020年12月于九江市第一人民医院治疗的55例原发性乳腺癌患者为研究对象，收集患者的癌组织及癌旁组织（距离癌组织5 cm以上）。其中三阴性乳腺癌25例，非三阴性乳腺癌30例；年龄24～67岁，平均（44.64±13.98）岁；病理TNM分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期31例。本研究经过医院伦理委员会审核批准通过（伦理批号：2022-087）。纳入标准：①患者粗针穿刺确诊为乳腺癌，术前均已进行放化疗；②患者均签署知情同意书。排除标准：①患者伴有其他器官恶性肿瘤；②患者合并有严重的多器官功能障碍；③患者有精神疾病；④临床资料不全。

1.2 方法

1.2.1 实验方法应用免疫组化技术检测55例乳腺癌组织和乳腺癌旁组织中LAIR-1的表达水平。

1.2.2 实验试剂LAIR-1兔抗人单克隆抗体（美国Santa Cruz公司），EDTAKA抗原修复原液pH8.0、抗鼠兔通用型免疫组化检测试剂盒、DAB染色液、PBS磷酸盐冲洗液、苏木素-伊红染液、二甲苯。以上药物和试剂均购自北京中杉金桥生物科技有限公司。

1.2.3 免疫组化步骤切片：将癌组织蜡块处理为厚度为2 μm的石蜡切片，放置于60℃烤箱中进行烤片处理以固定组织切片。脱蜡水化：用二甲苯浸泡脱蜡，共进行三次，每次10 min；后分别用95%、85%、65%的酒精冲洗残余二甲苯，共进行2次，每次10 min。冲洗：现用蒸馏水冲洗3次，每次3 min，再用PBS液冲洗3次，每次3 min。组织抗原修复：将组织切片放入高压锅内，加入柠檬酸缓冲液浸没组织切片，沸腾后缓慢加热3 min，冷却处理，再用PBS溶液冲洗3次，每次3 min。灭活内源性过氧化物酶：将过氧化氢溶液滴在片上室温下反应15 min，随后用PBS溶液冲洗3次，每次3 min。加入一抗和二抗：将比例为1∶200的LAIR-1兔抗人单克隆抗体滴入各个组织切片之中，放入冰箱一整夜；第二天取出切片，将切片用PBS溶液冲洗3次，每次持续3 min。DAB显色：将DAB显色液滴入组织切片，阳性呈棕黄色。苏木素复染：使用蒸馏水冲洗切片3 min，将切片放置于苏木素染色液中3 min，然后放于盐酸分化液浸泡5 s，完毕后冲洗15 min，随后放入无水酒精脱水处理两次，每次1 min。封片：将切片充分晾干后用中性树脂再次固定，不留气泡，晾干镜检。

1.3 观察指标及评价标准

选择4个视野，按照染色程度区分阳性和阴性细胞，评分标准如下。①按细胞核和细胞浆染色程度计分：不显色计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。②按照显色比例计分：选择4个高倍镜视野，100个细胞，显色细胞占细胞总数0%～25%，计1分；显色细胞占细胞总数25%～50%，计2分；显色细胞占细胞总数50%～75%，计3分；显色细胞占细胞总数＞75%，计4分。③按照两者乘积得分判定：（-）阴性：0分；（+）弱阳性：1～4分；（++）中等阳性：5～8分；（+++）强阳性：9～12分。考虑统计方便性，将（-）阴性和（+）弱阳性归为阴性组，将（++）中等阳性和（+++）强阳性归为阳性阻。

1.4 统计学方法

采用SPSS 25.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验，不符合正态分布者转换为正态分布后行统计学分析；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LAIR-1在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况

LAIR-1在乳腺癌组织中阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 LAIR-1在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况[n（%）]

2.2 LAIR-1在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达水平

LAIR-1在乳腺癌组织中的表达水平为（3.227±1.025），高于在癌旁组织中的表达（1.184±0.523），差异有统计学意义（t=13.167，P＜0.001）。

2.3 三阴性及非三阴性乳腺癌LAIR-1表达水平的比较

55例患者中，三阴性乳腺癌25例，非三阴性乳腺癌30例。LAIR-1在三阴性乳腺癌肿瘤组织中呈现高表达（0.952±0.287），高于非三阴性乳腺癌的表达水平（0.613±0.325），差异有统计学意义（t=4.107，P＜0.001）（图1）。

图1 LAIR-1在三阴性及非三阴性乳腺癌组织中的免疫组化（200×）

2.4 不同临床特征乳腺癌患者的LAIR-1表达水平比较

不同肿瘤直径和TNM分期患者的LAIR-1表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。年龄＞35岁、淋巴结转移阳性患者的LAIR-1表达水平高于年龄≤35岁、淋巴结转移阴性的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 不同临床特征乳腺癌患者的LAIR-1表达水平比较（±s）

表2 不同临床特征乳腺癌患者的LAIR-1表达水平比较（±s）

临床特征例数LAIR-1表达t值P值年龄（岁）≤35＞35肿瘤直径（mm）≤2＞2淋巴结转移阴性阳性TNM分期Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳ8.642＜0.001 7 48 0.526±0.238 1.042±0.131 0.658 0.514 18 37 0.691±0.138 0.722±0.175 4.030＜0.001 38 17 0.132±0.157 0.718±1.067 1.243 0.219 24 31 1.502±0.254 1.437±0.126

3 讨论

乳腺癌的形成、发生和发展是多种因素共同参与的一个非常复杂的生物过程。目前乳腺肿瘤的研究热点集中在细胞信号传导通路在肿瘤形成过程中发挥的作用（活化或调控异常）及机制[10]。

本研究显示，LAIR-1基因在乳腺癌和正常乳腺旁正常组织的比较中呈现高表达。LAIR-1在三阴性乳腺癌中的表达更高，这是较为特异的表现。在＞35岁、淋巴结转移阳性的患者乳腺肿瘤中呈高表达，表明LAIR-1与患者年龄和淋巴结转移具有一定程度上的相关性。AKT传导通路在细胞增殖，诱导肿瘤增殖、分化、转化、凋亡、放化疗拮抗等作用过程中起着比较关键的作用。该通路在乳腺癌、肝癌、肺癌、宫颈癌等部位恶性肿瘤中发挥了一定作用，并为靶向治疗提供了新的思路[11]。AKT全称是蛋白激酶B，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，LAIR-1是其中的一个家族成员。LAIR-1是纺锤体形成所必须的蛋白。纺锤体形成、配装缺失，细胞周期阻滞凋亡能够抑制活体乳腺癌的生长[12]。以往的研究显示[13]，被转染活化的AKT基因在细胞转染过程中发挥着稳定的恶性表型，此结果一定程度上说明了该基因在细胞异常活化和恶化过程中作用，在乳腺癌，前列腺癌，肝癌中均发现AKT活性显著升高。LAIR-1作为中心体调节蛋白，LAIR-1活性增强会导致中心体过度复制分离，有丝分裂纺锤体装配出现错误，继而导致染色体稳定性缺失，染色体异常分离刺激抑制癌症基因缺失，更易导致癌症细胞快速分化增殖引发恶性肿瘤[14]。有研究发现[15]，AKT基因家族在人类的细胞中表达较低，只有在细胞有丝分裂过程中更容易被表达和激活，近年来此细胞通路成为抗癌靶向药物中最有价值的靶点。研究发现在乳腺癌的分期中，AKT基因扮演着重要角色，乳腺癌分期、AKT基因都与非整倍体密切相关。在大鼠的实验中，研究者发现了大鼠乳腺肿瘤与AKT下游基因的相关，由此推测BTAK除了在形成异倍体、肿瘤恶性转化中发挥作用外，还可激活下游基因促使肿瘤发生发展[16]。

综上所述，LAIR-1对三阴性乳腺癌的发生和发展过程中呈现促进作用。