吴艳霞 宋姗姗 刘瑞宝 段 钰 路雪婧，3*

(1.成都中医药大学眼科学院，成都，610075；2.中医药眼病防治与视功能保护四川省重点实验室，成都，610075；3.成都中医大银海眼科医院，成都，610075)

随着视网膜血管信息测定技术的发展，可通过视网膜血氧计直接、非侵入性地测量视网膜血管氧饱和度[1]和血管直径[2]。虽然不同种族的健康人或不同眼病患者的管径研究已被报道[2-4]，但灵长类动物猕猴(Macacamulatta)视网膜血管管径的研究仍较少。猕猴是研究人类视网膜血管的良好动物模型[5]，在眼底疾病的诊断、治疗研究中极其重要。为了进一步了解猕猴视网膜血管信息，研究基于Oxymap视网膜血氧计测量技术测量了猕猴的视网膜血管管径。

1 材料和方法

1.1 实验动物

6—12岁成年猕猴12只，雌雄各半，体重为7—12 kg，实验动物许可证书编号：SCYK(川)2014-029)，由四川横竖生物科技有限公司提供。所有操作均符合成都中医药大学实验动物福利伦理(备案编号：2013-04)。纳入标准：(1)外眼无畸形，无眼科疾病。(2)双眼瞳仁直接、间接对光反射正常。(3)无糖尿病、高血压、心脏病等重大疾病，无外伤及手术史。

1.2 实验试剂和设备

复方托吡卡胺滴眼液10 mL/瓶(产品批号：M589871)；爱尔凯因滴眼液15 mL/瓶(生产批号：H20160133)；0.9%氯化钠注射液(国药准字H52020723)；盐酸氯胺酮注射液10 mL：0.1 g(兽药字(2015)100761663)。视网膜血氧计Oxymapehf.Hamrahlid17-105Reykjavik-Iceland(雷克雅未克，冰岛)；KJQ-6兽用动物开睑器(成都百特生物科技有限公司，中国)，电子计重称(上海寺冈电子有限公司生产，型号：12510893，中国)。

1.3 实验方法

1.3.1 实验动物麻醉

麻醉前准备：首先确保实验动物在麻醉前禁食8 h，然后将2.5%浓度的阿托品注射液以0.05 mg/kg的剂量分别给每只猕猴左后肢根部外侧肌肉注射，并观察15 min，无明显异常后准备麻醉。肌肉注射麻醉：给予每只猕猴1 mg/kg盐酸氯胺酮肌肉注射。观察20—25 min后，触碰其四肢无明显抵抗性活动视为麻醉成功。

1.3.2 散瞳

双眼滴入复方托吡胺滴眼液2—3滴，作用10 min后，检查散瞳情况，散开直径在6 mm以上为宜。

1.3.3 开睑器开睑

双眼滴入2—3滴爱尔凯因滴眼液，然后放置开睑器以撑开眼睑。

1.3.4 眼底图片采集

用视网膜血氧计对12只(24眼)猕猴进行眼底照相采集视网膜信息，由同一操作者在眼底相机50°视野下(以视盘为中心)拍摄。

1.4 视网膜血管血氧饱和度、管径的测量

按照视网膜血氧计标准操作手册要求进行图片筛选，选取图片质量合格的图片使用图像分析软件Oxymap Analyzer v.2.4进行分析。通过 Oxymap 软件标识内圈(视盘)和外圈(2倍视盘管径)，两圆之间的区域作为分析范围，依次测量上侧静脉、下侧静脉、鼻上动脉、鼻下动脉、颞上动脉和颞下动脉的管径(图1)。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 正常猕猴视网膜平均动静脉管径

正常猕猴平均动静脉管径见表1。其中，平均动静脉管径比较差异有统计学意义(P<0.001)。

表1 正常猕猴视网膜平均动、静脉管径及相关管径比较参数Tab.1 The mean diameter of retinal vein and artery in normal rhesus monkeys

2.2 正常猕猴不同眼别各象限视网膜血管管径比较

正常猕猴左右眼各象限管径比较差异均无统计学意义(P>0.05)(表2)。

表2 正常猕猴双眼各象限视网膜动静脉管径比较Tab.2 Comparison of retinal vein diameters in different quadrants of normal rhesus monkeys eyes

3 讨论

在有关人类视网膜功能和疾病的研究中，常常需要实验动物。但是，实验动物和人类之间存在结构和功能上的差异。因此，研究这些物种的视网膜结构和血液供应的特征对于将对动物进行的眼科研究推广到人类是必要的。我们注意到黄斑区的中央凹在灵长类动物中是暂时存在的。关于视网膜血液供应，只有灵长类动物拥有起源于视盘中心的视网膜中央动脉，并扩散到视网膜的每一象限[6]。因此本研究选择猕猴作为研究动物，以便在日后的研究中与人类进行比较。视网膜血管直径是一个重要的生理参数，它会随着年龄[7]、血压[8]、眼压[9]和各种疾病及治疗的变化而变化。视网膜血氧计测量视网膜血管直径[10]的可靠性也已被证实。

本次研究得到的正常6—12岁猕猴眼视网膜血管管径的测量结果与人类动静脉管径差异相似，视网膜平均动脉管径为(158.375±28.317)μm，平均静脉管径为(188.229±42.386)μm(P<0.05)(表1)。这与Jonas等[11]通过眼底彩色立体复视图像测得的12—23岁猕猴的视网膜管径宽度最大的动脉管径(0.055±0.008)mm有着明显差异。因猕猴视网膜神经纤维层在特定区域的可见性与该区域的边缘宽度和视网膜动脉口径呈正相关，而视神经纤维计数会随年龄的增加而明显降低[11-14]。因此，我们推测这种差异可能与年龄相关，年轻的猕猴视网膜动脉管径较年长者大。

本研究通过双眼各象限血管管径的比较(表2)，其中双眼颞下动脉的管径与颞上动脉的管径无显著差异、鼻上动脉的管径与鼻下动脉的管径无显著差异(P>0.05)，这与已报道的猕猴视网膜颞上与颞下、鼻上与鼻下动脉管径比较结果一致[11]，但该报道同时指出视网膜动脉在颞侧的血管管径明显宽于鼻侧象限，这与本研究的结论不同。本研究得出视网膜双眼鼻侧动脉管径与颞侧动脉管径比较均无显著差异，而且鼻侧动脉管径较颞侧普遍偏大。已知猕猴视网膜动脉直径的区域分布模式与视网膜神经纤维层可见性的区域分布相平行，颞下象限管径最大，其次是颞上象限[11]；而猕猴在早期青光眼中的神经纤维层的丢失主要发生在颞下区，其次是颞上区[15]。在机体健康状态下，视网膜神经纤维层数量随年龄增长的年丢失率可能会在颞侧以外的象限。而且，Jonas等[11]实验猕猴平均年龄为(16.94±2.7)岁，与本研究猕猴相比，需要多储备至少5年的丢失需求。因此，在更年少的健康猕猴视网膜中，鼻侧象限神经纤维层密度可能比颞侧更厚，其所属分布区域的动脉管径也就可能越大。目前尚无猕猴视网膜静脉管径大小相关因素报道，根据研究结果，我们推测上侧静脉平均管径较下侧大的原因可能是静脉管壁薄、平滑肌和弹性纤维均较少，下侧静脉输送血液回心时，受自身重力影响而管径缩小。

本研究得出的猕猴视网膜动静脉比值约等于(0.864±0.161)(0.831，0.897)，平均动静脉管径差值为(29.854±33.316)μm(表1)。正常人视网膜动静脉管径比值为2∶3。视网膜动静脉比值的测量可用于高血压性视网膜病变[16]、糖尿病视网膜病变[17]等眼底病的诊治中。而猕猴视网膜动静脉比值的测量，则有助于监测实验性诱导的视网膜血管疾病病理形态的变化、眼科仪器设备的研发和眼底疾病药物实验评价等。

综上所述，本研究得出了6—12岁正常猕猴双眼视网膜管径水平，比较了各象限管径差异，但因为与其他研究所研究物种、测量软件的不同无法进行全面比较。由于样本量较小，不能完全代表所有正常猕猴视网膜动静脉管径水平。在未来的研究中，需进一步扩大样本量来验证各象限血管管径差异的显著性、动静脉管径比值的准确性，以及对比不同测量设备下各象限管径的变化。