刘 洁，周 晟

转移癌并不一定是癌症的晚期，临床通常可见有较明显的原发灶，其特性、治疗原则也与原发灶类似，行手术治疗或仅行放、化疗，不同的原发灶均有不同的治疗方案，因此确定原发灶的部位具有重要意义。免疫组化染色可以明确转移癌来源，如角蛋白抗体CK20在胃肠道癌、胆管癌、胰腺癌中均呈阳性，而在肺癌、乳腺癌、肾癌中均呈阴性；Tg阳性可考虑甲状腺转移；vimentin阳性支持肉瘤的诊断；前列腺特异性抗原PSA阳性可考虑前列腺转移。但有些单一的标志物较难确定转移癌的原发灶，选择几种抗体联合检测可缩小转移癌原发灶的查找范围。近年有学者采用TTF-1抗体判断非小细胞肺癌和肺腺癌[1]，也有学者应用CK7联合其他抗体在肝癌中的表达进行分析[2]。本文采用免疫组化EnVision法检测256例腹壁肿块中CK5/6、CK7和TTF-1的表达，分析三者与不同来源转移癌的相关性，并探讨三者在判断肿瘤原发灶的临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料收集2017年1月～2019年3月我院病理科送检的腹壁肿块，病理诊断为其他部位来源转移癌的组织蜡块合计256例，其中肺癌189例、结肠癌20例、直肠癌4例、肝癌4例、乳腺癌35例、卵巢癌4例；连续4 μm厚切片4张，编号为1、2、3、4，置于60 ℃烤箱中2 h，冷却后进行染色。

1.2 方法将1号切片行HE染色，2、3和4号切片分别行CK5/6、CK7和TTF-1免疫组化EnVision两步法染色，具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行，一抗稀释比为1 ∶400，组织切片常规脱蜡、水化，用PBS缓冲液连续冲洗2次，每次3 min；一、二抗孵育，DAB显色，苏木精复染经乙醇脱水干燥，中性树胶封固，置于40倍光镜下观察。用PBS缓冲液取代一抗作为阴性对照，阳性判断标准：CK5/6定位于细胞质和细胞膜，CK7定位于细胞质，TTF-1定位于细胞核，阳性染色均为棕黄色颗粒。由经验丰富的病理科医师对染色结果进行判断，无阳性细胞或阳性细胞数<1%为阴性，≥1%为阳性。

2 结果

2.1 腹壁肿块转移癌中CK5/6、CK7、TTF-1的表达CK5/6在92例腹壁肿块转移癌中呈阳性，阳性率为35.9%(92/256)，其中来源于肺81例，占比高达88.0%(81/92)；CK7在45例腹壁肿块转移癌中呈阳性，阳性率为17.6%(45/256)，其中来源于肺20例，占44.4%(20/45)，来源乳腺占46.7%(21/45)；TTF-1在169例腹壁肿块转移癌中呈阳性，阳性率为66.0%(169/256)，均来源于原发肺的转移癌组织(图1～3)。

2.2 三种抗体在腹壁肿块转移癌中的联合表达本组中CK5/6、CK7、TTF-1有8种组合模式，通过检测发现CK5/6+/CK7+/TTF-1+和CK5/6-/CK7+/TTF-1+组肺癌来源占比较高，达89.4%(169/189)，提示CK7+/TTF-1+对肺来源肿瘤有较高的特异性；而结、直肠来源的肿瘤CK5/6-/CK7-/TTF-1-；乳腺癌中CK7+，但CK5/6-/TTF-1-；卵巢癌中通常CK5/6+/CK7-/TTF-1-，占比高达100%(4/4)；肝癌中通常CK5/6-/CK7+/TTF-1-，在本实验中占比高达100%(4/4)(表1)。

表1 三种抗体在腹壁肿块转移癌中的联合表达[n(%)]

①②③图1 肺鳞癌组织中CK5/6呈阳性,EnVision两步法图2 乳腺癌组织中CK7呈阳性,EnVision两步法图3 肺腺癌组织中TTF-1呈阳性,EnVision两步法

3 讨论

原发灶不明转移癌占恶性肿瘤的5%～10%，目前治疗手段有限，患者预后较差。如果能确定转移癌的原发灶，对于其后续治疗及预后评估有重大意义。近年，免疫治疗在结直肠癌卵巢转移中取得显著进展[3-4]。联合CK7与TTF-1检测在鉴别不同病理类型的非小细胞肺癌中有一定作用[5]，但在其他部位来源癌的鉴别诊断中存在不足。本组将CK7、TTF-1、CK5/6三种抗体联合应用对256例标本进行检测，结果显示三种抗体联合应用可以将腹壁肿块转移癌的原发灶判断范围进一步缩小。

CK5/6属于基底细胞角蛋白，分子量较大，在正常组织中的鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞、间皮细胞中呈阳性，在腺上皮细胞中呈阴性；因此可用于鳞癌和肺腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。CK7是许多腺上皮及移行上皮中的碱性角蛋白，分子量较小，通常在腺癌、卵巢癌、肺癌和乳腺癌上皮癌中常呈阳性，而在结肠、前列腺、胃肠道上皮中呈阴性。TTF-1是甲状腺转录因子，在甲状腺腺上皮和肺上皮细胞中呈阳性；在肺小细胞癌、原发性和转移性肺腺癌、大细胞未分化肺癌、非典型神经内分泌肿瘤中TTF-1多呈阳性，而在肺鳞癌、典型类癌中TTF-1多呈阴性。

本组通过三种不同抗体的联合检测，进行8种模式的划分，将不同原发灶癌做了部分排除，明确肿瘤可能存在哪些范围，根据它们出现的比例考虑其发生的可能性，减少一些不必要抗体的使用。如CK7和TTF-1双阳性，那么肺原发来源的可能性较高，CK5/6和CK7可进一步用来鉴别肺鳞癌和肺腺癌；CK5/6、CK7和TTF-1三者均阴性的转移癌，应考虑结肠癌、乳腺癌和直肠癌可能，而不考虑为肺癌、卵巢癌、肝癌，并结合患者的病史及临床检查，采用相对应的特异性抗体确定转移癌的原发灶。

目前肿瘤特异性标志物越来越多，应用也越来越广泛，各种组合层出不穷；本组只选取三种经典标志物作为组合，降低了组合的数量，增加判断的直达度和辨识率，为将来更精确、更复杂的组合做出初步探索。本组中CK5/6、CK7和TTF-1是多种肿瘤的特异性指标，有助于判断部分腹壁肿块转移癌的来源，对于缩小转移癌原发灶的搜寻范围具有指导意义。