陈志琳， 杜洪志， 伍莎莎， 张 静， 李 玮

(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

博落回为罂粟科植物博落回〔Macleayacordata(Willd.) R.Br.〕的干燥全草，其性味苦、寒、大毒，具有清热解毒，活血散瘀，杀虫止痒的功效，用于风湿痹痛，跌打损伤，痈肿疮毒，下肢溃疡，顽癣，阴痒。使用方法主要是外用，捣烂敷，煎水熏洗，乙醇浸渍液涂搽[1]。其主要活性成分为生物碱，至今已被分离鉴定的生物碱达74个，其含量最高且活性较强的为苯胼异喹啉类生物碱，主要包括血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱等[2-4]。博落回具有抗菌消炎、杀虫止痒、改善肝功能、增强免疫功能、抗肿瘤等药理作用[5-10]。博落回为贵州省特色民族药，因其具有良好的抗菌消炎、散淤止痛之功，在少数民族地区应用广泛。2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中仅对其植物的性状、薄层鉴别、功能主治等进行简要描述，其质量控制指标不完善，不能全面、有效控制该药材质量。

近年来，博落回在养猪业、养禽业和水产养殖业方面均有良好应用效果[11]，且还作为原料制备相关医药制剂[12]，开发前景良好。目前，有关博落回质量标准的研究较少。为进一步保障博落回质量及相关制剂安全有效、稳定可控，以博落回为研究对象，采用薄层色谱法和高效液相色谱法，建立博落回的薄层鉴别方法和血根碱的含量测定方法，参照2015年版《中国药典》(4部)要求，测定博落回饮片的水分、灰分、浸出物含量，并初步建立博落回饮片质量标准，以期为博落回更好地开发利用及其药材的质量控制提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

对照品：血根碱(批号：510001-201101，纯度：99.3%)，中国食品药品检定研究院。

博落回样品：共10批，分别采自贵州黔东南州凯里市雷山县西江镇和广西壮族自治区全州县安和镇等地，其样品信息见表1。经贵州中医药大学生药教研室鉴定为罂粟科博落回属植物博落回的带根全草，药材根切厚片，茎切短段，叶于60℃烘箱烘干，备用。

表1 10批博落回饮片信息Table 1 Information on 10 batches of M. cordata decoction pieces

仪器：LC-20 AT型高效液相色谱仪，日本岛津；色谱柱Sino Chrom ODS-BP C18(4.6 mm×250 mm)，上海月旭科技股份有限公司；TU-1810PC型紫外可见分光光度计，上海元析仪器有限公司；AUW220D型全自动电子分析天平，上海梅特勒-托利多仪器有限公司；BX41显微镜、DP显像系统日本OLYMPUS公司。

试剂：乙腈，天津市科密欧化学试剂有限公司；磷酸(色谱纯)，天津市科密欧化学试剂有限公司；水为娃哈哈纯净水；水合氯醛(分析纯批号20161121)，天津市大茂化学试剂厂；甘油(分析纯批号20161113)，天津市瑞金特化学品有限公司；冰醋酸(批号20160701)，重庆川东化工集团有限公司，其余试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 药材性状鉴定 对采集的10批博落回全草的大小、颜色、形状、断面、质地等特征进行对比观察和描述。

1.2.2 显微鉴别 对采集的10批博落回样品粉末用水合氯醛透化制片，应用光学显微镜对其组织结构、细胞形态等进行观察、测量和描述，并对有代表性的特征进行拍照记录。

1.2.3 薄层色谱鉴别 对照药材及供试品药材的制备。精密称定博落回对照品约1.0 g，置于100 mL圆底烧瓶中，精密加入80%乙醇40 mL，静置1 h，称定重量，回流提取1 h，放冷，补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。同法制得供试品溶液。按照2015年版《中国药典》4部薄层色谱法(通则0502)试验，分别取对照品和供试品溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-石油醚-丙酮(15∶10∶1)为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内饱和20 min，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。

1.2.4 水分、灰分、浸出物的测定 水分测定按照2015年版《中国药典》(4部，通则 0832)水分测定法第2法烘干法测定，灰分测定按照2015年版《中国药典》(4部，通则2302)灰分测定法测定，浸出物按照2015年版《中国药典》(4部，通则2201)浸出物测定法采用热浸法测定，50%乙醇作为提取溶剂。每批样品平行测定3份。

1.2.5 血根碱的含量测定

1) 对照品溶液的配制。将血根碱对照品置于五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h，精密称取血根碱对照品12.1 mg，置于50 mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解至刻度，制成0.420 mg/mL的血根碱对照品。

2) 供试品溶液的制备。精密称定博落回样品粉末(过4号筛)约1.0 g，置于100 mL圆底烧瓶中，精密加入80%乙醇40 mL，静置1 h，称定重量，回流提取1 h，放冷，补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

3) 色谱条件。色谱柱，SinoChrom ODS-BP C18(4.6 mm×250 mm×5 μm)；流动相，乙腈-0.3%磷酸(29∶71)；检测波长285 nm，流速1.2 mL/min；进样量10 μL，柱温30℃。

4) 阴性对照及系统适应性试验。以乙醇为阴性对照溶液。取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，按色谱条件进行测定。理论塔板数以血根碱计应不小于6 000，分离度大于1.5。

5) 绘制标准曲线。精密吸取血根碱对照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL和25 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以质量为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)，求回归线性方程。

6) 精密度试验。精密吸取血根碱对照品溶液10 μL注入色谱仪，重复进样6次，每次10 μL，记录峰面积，计算RSD值。

7) 稳定性试验。取同一供试品溶液，在 0 h、3 h、6 h、9 h、12 h，分别进样10 μL，计算血根碱含量和RSD值。

8) 重复性试验。精密称取同一批号的博落回粉末(过4号筛)，共6份，每份约1 g，供试品溶液制备方法制备，进样10 μL，计算血根碱含量和RSD值。

9) 加样回收率试验。精密称取博落回粉末约0.5 g，共6份，加入适量血根碱对照品，按供试品溶液的制备方法制备，分别进样10 μL，测平均回收率和RSD值。

2 结果与分析

2.1 博落回的性状特征

博落回根粗壮，棕褐色，有纵沟纹。茎圆柱形，直径2～4 cm，中空，浅绿色，被白色粉霜，上部有分枝。单叶互生，具长柄；叶片皱缩，完整叶片展平后呈宽卵形或近圆形，5～9浅裂，裂片边缘具不规则波状齿，上表面浅绿色或灰绿色，下表面被白霜及细密茸毛。圆锥花序多顶生，残存小花白色或淡红色，易脱落。气微，味苦。

2.2 博落回饮片粉末特征

博落回饮片粉末薄壁细胞中见草酸钙簇晶，直径为20～44 μm，有黄棕色团块，有淀粉粒，单粒类圆形，直径2～10 μm，导管有网纹导管，梯纹导管，具缘纹导管，孔纹导管，非腺毛1～6个细胞，直径6～28 μm，长55～297 μm(图1)。

2.3 博落回饮片的薄层色谱图

从图2可知，10批博落回样品的薄层色谱斑点清晰，分离度好，Rf值适当。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。

2.4 博落回的水分、灰分及浸出物含量

从表2可知，不同产区10批博落回饮片的水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量有一定差异，水分含量在10.42%～12.66%，平均为10.86%，其中，贵州凯里市西江镇最高，贵阳市红枫湖镇最低；总灰分含量在5.08%～9.27%，平均为6.65%，其中，桂林市凤凰镇最高，贵州凯里市西江镇最低；酸不溶性灰分含量在0.20%～1.55%，其中，贵阳市青岩镇最高，桂林市安和镇最低；水溶性浸出物含量在16.28%～29.59%，平均19.97%，其中，贵州凯里市西江镇最高，贵阳市青岩镇最低；醇溶性浸出物含量在18.35%～26.48%，平均为21.16%，其中，贵州凯里市西江镇最高，桂林市安和镇最低。

表2 10批博落回饮片样品中的水分、灰分及浸出物测含量Table 2 Content of moisture, ash and extract in 10 batches of M. cordata decoction pieces %

2.5 博落回饮片中的血根碱含量

2.5.1 对照品及样品色谱图 从图3看出，血根碱对照品和博落回样品的相对保留时间基本一致，且成分分离良好，分离度大于1.5，均达到有效分离。

2.5.2 线性方程 根据试验结果，血根碱的线性方程为Y=52 010 048.78X+31 107.370 73，r=0.999 7，表明血根碱在进样含量为0.083～1.043 μg的范围内线性关系良好。

2.5.3 精密度、重复性和稳定性 根据精密度试验，血根碱的RSD为2.87%，表明测定仪器的精密度良好。根据重复性试验，血根碱的平均含量为0.61%，RSD为1.85%，表明测定血根碱方法的重复性良好。根据稳定性试验血根碱的RSD为3.0%，表明样品在12 h内稳定性良好。

2.5.4 加样回收率 从表3可知，血根碱的平均回收率为102.24%，RSD为2.43%，说明测定方法准确性良好。

表3 血根碱的加样回收率(n=6)Table 3 Recovery of sanguinarine(n=6)

2.5.5 10批博落回样品中的血根碱含量 从表4可知，贵州、广西不同地区博落回中均能检测出血根碱，且各成分含量存在一定差异。血根碱含量为0.27%～0.71%，平均为0.43%，以贵州凯里市雷山县西江镇的最高，为0.712 6%。

表4 10批博落回样品中的血根碱的含量Table 4 Content of sanguinarine in 10 batches of M. cordata decoction pieces %

3 结论与讨论

研究表明，在乙腈-0.3%磷酸水溶液(29∶71)梯度洗脱，流速为1.2 mL/min ，进样量为10 μL，柱温为30℃，检测波长为285 nm条件下检测所得色谱峰的峰形对称、分离度高。通过方法的研究及系统方法学考察，所建立的含量测定方法专属性强、合理可行。

经测定，10批博落回样品的的水分含量为10.42%～12.66%，平均10.86%；总灰分含量为5.08～9.27%，平均6.66%；酸不溶性灰分含量为0.20%～1.57%，平均0.61%；醇溶性浸出物含量为18.35%～26.48%，平均21.16%，水溶性浸出物含量为16.42%～29.59%，平均19.97%；血根碱含量为0.27%～0.71%，平均0.43%。

初步拟定水分、总灰分、酸不溶性灰分检查项按平均值的120%设限，建议拟定标准为水分≤13.0%，总灰分≤8.0%，酸不溶性灰分≤0.70%。浸出物以平均值的80%为限，拟定浸出物≥17.0%。血根碱的含量以平均值的80%设限，为0.20%，故拟定按干燥品计算，含血根碱(C20H14NO4)≥0.20%。

在建立薄层色谱鉴别方法时，以血根碱为对照，不仅专属性强，且能够多成分全面反映其质量。在进行展开剂考察时发现，氯仿-石油醚-丙酮不加甲醇展开斑点较多，且比较清晰，但分离效果不理想，加入极性较小的石油醚调极性后分离度得到很大改善；考察不同比例得出以氯仿-石油醚-丙酮(15∶10∶1)为展开剂展开斑点清晰可见，Rf值适当。

博落回药材药效成分主要以异喹啉类生物碱为主，故可按烘干法测定水分。生物碱类成分易溶于乙醇，控制醇浸出物含量，对确保药材样品质量稳定具有重要意义。检测博落回药材样品总灰分和酸不溶性灰分含量，可控制药材样品中泥土、砂石等外来无机物的量，对确保药材样品净度具有重要意义。

血根碱是博落回有效成分之一，现代药理研究表明，血根碱具有抑制血管平滑肌收缩、抑肿瘤、抗真菌的作用[10-12]。将血根碱作为博落回饮片质量控制指标对保证博落回饮片质量具有重要意义，研究采用HPLC测定血根碱含量，方法简便快捷，可用于博落回中血根碱的含量测定。