宇庆迎，刘墨林，薛玲★

（1. 山东中医药大学药学院，山东 济南；2. 山东中医药大学中医学院·国家中医管理局重点培育学科中医情志学学科·山东中医药大学情志病症科研创新团队，山东 济南）

0 引言

抑郁症作为一种常见的精神类疾病，发病率呈逐年上升趋势，其伴有心境低落、思维迟缓、意志活动减退、认知功能损害等临床表现，对人类身心健康危害极大。据统计，全球有超过3 亿人罹患抑郁症[1]，约占全球总人口的4.3%，其中中国有5400 万患者。世卫组织数据表明，抑郁症病患的自杀率高达28.5%～63.7%，其中自杀死亡率为15%。由于其极高的发病率和高危害性，抑郁症越来越受到国内外研究者的重视[2]。

柴胡为伞形科植物柴胡 Bupleurum chinenes BC.的根 ，味苦、微辛，性平 ，具有解表退热、疏肝解郁、升举阳气的功效。白芍为毛茛科植物白芍Paeonialactiflora Pall.的去皮干燥根，性微寒，味苦、酸，归肝、脾经。具平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功效。常用于治疗抑郁症的柴芍方剂有柴芍六君子汤[3]、丹栀逍遥散[4]、四逆散[5]及柴胡疏肝散[6]等。《太平惠民和剂局方》中的逍遥散，是中医药治疗抑郁情绪的经典组方之一，其中柴胡、白芍为君药[7]。柴胡功善条达肝气，疏肝解郁，升举阳气，具轻清上升，宣透疏达之性，可治情志抑郁等症；白芍酸敛肝阴，平抑肝阳，可治血虚肝郁，肝阳偏亢等症[8]；白芍酸敛可制柴胡辛散，柴胡辛散又可佐白芍酸敛，两者配伍协同而促进，善于疏肝止痛，治疗肝郁气滞诸症，行之有据[9]。

柴胡提取物及芍药苷分别为柴胡及白芍主要活性成分，现代研究表明柴胡提取物、芍药苷均具有抗抑郁功效，为两药的配伍提供了理论依据，鉴于药效与配比的密切关系，本文采用均匀设计优选柴胡提取物与芍药苷的配伍比例，并通过小鼠进行验证实验，得到二者的最佳配伍剂量，为抗抑郁药物的开发和利用提供实验依据。

1 材料

YP2001N 电子天平（上海菁海仪器有限公司），SuperFst 动物视频分析系统，强迫游泳桶（上海欣软信息科技有限公司），SuperTst 动物视频分析系统，悬尾实验箱（上海欣软信息科技有限公司），SuperMaze 动物视频分析系统（上海欣软信息科技有限公司），旷场实验箱（上海欣软信息科技有限公司），分析天平（上海精密科学仪器有限公司），一次性使用无菌注射器（河南曙光汇知康生物科技股份有限公司），温度计，压敏胶带（青岛海诺生物工程有限公司）。

柴胡药材购自山西，批号18060201，经山东中医药大学中药鉴定教研室徐凌川教授鉴定为伞形科植物柴胡Bupleurumchinense的干燥根；芍药苷（陕西慧科植物开发有限公司，相当于白芍生药量0.04 g·g-1，含量为50%）；盐酸氟西汀胶囊 （苏州中化药品工业有限公司，批号53515001）；实验用水均为纯水。

SPF 级雄性KM 小鼠，体质量18～22g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK（京）2016-0006。本文涉及的动物实验经山东中医药大学动物伦理委员会批准。

2 方法与结果

2.1 药物的制备

取柴胡饮片适量，加5 倍量95%乙醇提取2h，过滤，减压回收乙醇至生药质量浓度1g·mL-1，得柴胡提取物。

2.2 统计学分析

2.3 柴胡皂苷与芍药苷的配方优选

2.3.1 均匀试验设计

选择柴胡提取物、芍药苷剂量为考察因素，每个因素各设5 个水平，按均匀设计U5（25）及其使用表进行安排，共得5 种配比，见表1。柴胡和白芍依据2015 年版《中国药典》用量范围，折算成小鼠给药剂量为2.28g·Kg-1、1.82g·Kg-1。

表1 柴胡提取物与芍药苷配伍的均匀设计剂量

取健康KM 小鼠70 只，按体质量随机分为空白组、氟西汀组和5 个剂量组（按表1 相应剂量）。空白组灌胃等体积纯水，其余各组正常灌胃给药，1d/ 次，连续5d，于末次给药0.5h 后，进行旷场实验和强迫游泳实验。结果发现与给药前相比，氟西汀组小鼠旷场中央区时间延长（P＜0.05）、强迫游泳悬浮不动时间降低（P＜0.05）；配伍3 组小鼠矿场中央区停留时间延长（P＜0.05）；配伍4、5 组小鼠强迫游泳悬浮不动时间降低（P＜0.05）。

表2 不同配比柴胡提取物与芍药苷对小鼠旷场中央区停留时间的影响（，n=10）

表2 不同配比柴胡提取物与芍药苷对小鼠旷场中央区停留时间的影响（，n=10）

注：与给药前比较*P＜0.05。

组别 给药前/s 给药后/s空白组 183.8±453.8 631.6±1948阳性组 -21.86±553.8 344.7±1446*配伍1 146.5±1184 -15.06±2471配伍2 -245.0±881.2 -66.31±1243配伍3 -47.96±332.1 40.95±1930*配伍4 159.1±508.5 -147.0±1453配伍5 271.1±1449 524.0±1796

表3 不同配比柴胡提取物与芍药苷对小鼠强迫游泳悬浮不动时间的 影响（，n=10）

表3 不同配比柴胡提取物与芍药苷对小鼠强迫游泳悬浮不动时间的 影响（，n=10）

注：与给药前比较*P＜0.05。

组别 给药前/s 给药后/s空白 81.48 ± 166.4 34.05 ± 136.6阳性组 108.9 ± 224.0 20.17 ± 146.9*配伍1 80.92 ± 279.9 28.67 ± 170.2配伍2 71.02 ± 247.3 52.71 ± 150.2配伍3 87.24 ± 254.4 46.71 ± 180.3配伍4 129.5 ± 220.9 37.81 ± 170.2*配伍5 88.27± 234.5 -6.002 ± 126.4*

2.3.2 柴胡提取物与芍药苷配伍筛选结果的统计分析

通过SPSS Statistics 22 软件将均匀设计的结果进行多元回归分析，求得多元回归方程，分别以柴胡提取物剂量、芍药苷剂量为自变量x1 和x2，小鼠强迫游泳悬浮不动时间给药前后差值为因变量y1，得拟合方程y1=59.98+0.26x1+0.98x2；当x1 为9.1g·Kg-1， x2 为0.3 g·Kg-1，预期药效最佳。强迫游泳悬浮不动时间给药前后差值随柴胡提取物和芍药苷剂量增加而增加，确定柴胡提取物、芍药苷剂量分别为9.1、0.3g·Kg-1，两者配比30.33：1 为最优比例。设柴胡提取物+芍药苷高剂量组（18.2+0.6 g·Kg-1），柴胡提取物+芍药苷中剂量组（9.1+0.3 g·Kg-1），柴胡提取物+芍药苷低剂量组（4.55+0.15 g·Kg-1）3 组及氟西汀组（0.002 g·Kg-1），空白组（等体积纯水）进行验证实验。

2.4 优化配比下小鼠行为学实验

取KM 雄性小鼠50 只，按体质量随机分为5 组，即空白组、氟西汀组，柴胡提取物+芍药苷高组、柴胡提取物+芍药苷中组、柴胡提取物+芍药苷低组，每组10 只，空白组灌胃等体积纯水，其余各组正常灌胃给药，每天1 次，连续5d。于末次给药0.5h 后，进行旷场实验、悬尾实验和强迫游泳实验，结果见表4、5、6。

表4 不同剂量的柴胡提取物与芍药苷对小鼠旷场中央区停留时间的 影响（，n=10）

表4 不同剂量的柴胡提取物与芍药苷对小鼠旷场中央区停留时间的 影响（，n=10）

注：与给药前比较*P＜0.05。

中央区停留时间（给药后/s）空白组 - 9.98±20.06 7.92±6.57阳性药组 0.002 4.92±4.27 9.97±3.83柴芍高组 18.2+0.6 2.97±2.11 7.64±4.16柴芍中组 9.1+0.3 5.39±3.11 9.36±3.33*柴芍低组 4.55+0.15 5.60±2.34 2.91±2.78组别 剂量(g/Kg) 中央区停留时间（给药前/s）

由表4 可知，与给药前相比，柴胡提取物+芍药苷中剂量组旷场中央区停留时间延长（P＜0.05）。

表5 不同剂量的柴胡提取物与芍药苷对小鼠悬尾不动时间 的影响（，n=10）

表5 不同剂量的柴胡提取物与芍药苷对小鼠悬尾不动时间 的影响（，n=10）

注：与给药前比较*P＜0.05。

悬尾不动时间（给药后/s）空白组 等体积水 124.67±44.66 167.42±59.35阳性药组 0.002 110.93±26.38 148.35±42.48*柴芍高组 18.2+0.6 147.83±36.75 91.81±62.84*柴芍中组 9.1+0.3 164.78±38.64 139.24±34.50*柴芍低组 4.55+0.15 152.77±47.49 104.14±51.53组别 剂量（g/Kg） 悬尾不动时间（给药前/s）

由表5 可知，与给药前相比，柴胡提取物+芍药苷高剂量组、柴胡提取物+芍药苷中剂量组悬尾不动时间降低（P＜0.05）。

表6 不同剂量的柴胡提取物与芍药苷对小鼠强迫游泳悬浮不动时间的影响（，n=10）

表6 不同剂量的柴胡提取物与芍药苷对小鼠强迫游泳悬浮不动时间的影响（，n=10）

注：与给药前比较*P＜0.05，**P＜0.01。

悬浮不动时间（给药后/s）空白组 等体积水 224.75±71.48 178.62±57.51阳性药组 0.002 230.97±36.02 167.87±64.16*柴芍高组 18.2+0.6 243.54±41.48 170.03±69.44*柴芍中组 9.1+0.3 247.50±41.71 168.84±65.65**柴芍低组 4.55+0.15 224.55±45.48 169.51±62.64*组别 剂量（g/Kg） 悬浮不动时间（给药前/s）

由表6 可知，与给药前相比，阳性药组、柴胡提取物+芍药苷低剂量组强迫游泳悬浮不动时间降低（P＜0.05）；柴胡提取物+芍药苷高剂量组、柴胡提取物+芍药苷中剂量组强迫游泳悬浮不动时间显著降低（P＜0.01）。

3 讨论

本文基于均匀设计的配比优化方法，以小鼠评价柴胡提取物和芍药苷不同配比、剂量下的抗抑郁作用，确定了柴胡提取物与芍药苷的最佳配伍比例。

本文研究结果表明，在柴胡0～9.10g·kg-1（等效于 2015 年版《中国药典》柴胡用量）和芍药苷0～0.3g·kg-1（等效于《中国药典》白芍用量）剂量内，两药合用对小鼠血强迫游泳悬浮不动时间给药前后差值的影响作用随着柴胡提取物和芍药苷剂量的增加而增加。确定柴胡提取物与芍药苷比例为30.33：1，柴芍提取物剂量9.10g·kg-1，杂色蛤提取物剂量0.3g·kg-1。验证试验结果表明柴胡提取物与芍药苷在最佳配伍比例下，可显著延长小鼠的旷场中央区停留时间、降低悬尾不动时间以及强迫游泳悬浮不动时间，柴胡提取物与芍药苷配伍具有较好的抗抑郁作用，且两者合用的抗抑郁作用优于单用柴胡提取物或单用芍药苷。

传统医学认为抑郁症属中医学“郁证”范畴，其病位在肝，主要病机为情志所伤，肝失条达，故精神抑郁，情绪不宁。柴胡辛、苦、微寒，能疏泄肝气，升阳举陷。白芍苦、酸、性微寒，能养肝柔肝，敛阴止痛。二种药物一起使用起到疏肝解郁，解表敛阴，清胆止痛的作用。本文将柴胡提取物与芍药苷进行配伍，发挥协同增效的作用，为柴胡与白芍配伍的抗抑郁产品开发提供了实验依据。后续可围绕柴胡与白芍的抗抑郁作用特点深入开展其抗抑郁机制的研究。