顾利萍，俞吉霞

封片程序是常规制片过程中的收关环节，日常工作中发现切片必须湿封，用温箱烤干或电吹风吹干后干燥切片，易引起细胞收缩、龟裂或切片出现黑色结晶样小点[1]，切片频繁出现空气结晶，在镜下见类似色素样的点状缩晶和黑色光滑的细胞核[2]，导致细胞核内细微结构无法观察，严重影响病理诊断。目前，切片制作中关于空气结晶的报道较少。本科室总结实践工作经验，探讨空气结晶产生的情况及处理方法，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂DAKO Cover Stainer全自动染色封片一体机，Leica 2235切片机，DAKO HE染液组(苏木精、伊红、返蓝液)，中性树胶。

1.2 材料收集乳腺、扁桃体、胃肠组织、肝脏、脾脏、淋巴结、肾脏、甲状腺组织作为分析对象，送检标本均经10%中性福尔马林固定，常规脱水，包埋，4 μm厚切片。

1.3 方法将不同组织进行常规石蜡切片，切片厚为4 μm，烤片20 min，置于染色机选择常规HE染色不封片程序，分别置于空气中5、10、20、30、60 min及过夜，然后进行手工封片。另将二甲苯取出切片进行手工湿封与其进行对比，观察切片中空气结晶情况。

2 结果

HE染色后直接进行手工湿封的切片镜下红蓝对比鲜明、透亮，核内结构清晰；染色后从二甲苯取出置于空气中自然干燥再封片的切片，可见类似色素样的点状缩晶或黑色结晶样小点(图1、2)，不同组织均会产生空气结晶(表1)。

表1 不同组织产生空气结晶的情况

图1 大量类似色素样的点状缩晶(红色箭头所示) 图2 黑色光滑的细胞核或黑色结晶样小体(红色箭头所示)，结构清晰的细胞核(蓝色箭头所示)

3 讨论

常规制片质控要求封片不溢胶、无气泡，科室全自动染色封片一体机替代手工封片后，该环节往往被大家忽略，有文献报道封片不及时易引起组织干涸，出现组织收缩和裂痕即龟裂现象，或因吸收空气中的水分使部分细胞核透明不良而出现黑核现象[3]，通过实验我们也发现严格按规范制作的切片，镜下可见细胞核结构清晰，红蓝对比鲜明，透亮清晰的优良切片，而在空气中静置干燥的切片封片后均出现空气结晶。

3.1 空气结晶产生原因我们在日常工作中发现空气结晶主要发生在以下几种情况。(1)切片干封：染色机设置的封片过程，1个染色架切片10张需要耗时2 min，染色架后面封片的几张切片中会产生黑色光滑的细胞核，由于其封片时二甲苯已挥发，处于干燥状态；(2)染色机故障：在无水乙醇缸处发生撞架的情况后手工取出置于空气中干燥，而后切片未经重新处理直接手工封片，出现大量成片的褐色区域或者黑色光滑的细胞核；(3)试剂更换错误：染色脱水无水乙醇三道，更换了第一缸无水乙醇，后两缸无水乙醇未经更换直接使用时，出现大量成片的褐色区域或者黑色光滑的细胞核；(4)重新湿封效果不佳：出现空气结晶的切片移去盖玻片，二甲苯5 min，中性树胶封固，切片高倍镜下仍然可见空气结晶。综合以上几种情况可见产生空气结晶的主要原因：切片置于空气中吸收了水分使部分细胞核脱水透明不良，经过树胶封片后产生点状缩晶或黑核现象。

3.2 空气结晶避免方法严格按照常规制片的规范化流程进行操作，使切片脱水、透明充分，手工封片必须要湿封，采用封片机封片时尽量保持全封闭、实验室保持恒温，减慢二甲苯的挥发，树胶浓稠用二甲苯调均匀。

3.3 空气结晶补救措施对于已经产生的空气结晶，我们采取补救措施：(1)重新切片；(2)无法重新切片的组织进行手工处理，加温去掉盖玻片或者将切片置于二甲苯中去掉盖玻片，然后置于二甲苯中两道各5～10 min，置于无水乙醇两道各2 min，95%乙醇1 min，75%乙醇1 min，流水充分冲洗，伊红染色，75%、95%乙醇各1 min，无水乙醇两道各2 min，二甲苯两道各2 min，中性树胶封固，处理后的切片镜下细胞核结构清晰，红蓝对比鲜明，透亮清晰的优良切片。

封片环节看似简单，但也同样会影响切片质量，影响病理诊断，随着ISO 15 189的推进，常规技术操作需要严格按照标准化程序进行，抓好常规制片过程中的每个细节，制作出一张高质量的HE切片，给病理诊断提供需要的信息，规避风险，更好的服务于患者。