李岚 高瑛 张维华 侯丽敏 高秋英

[摘要] 目的 研究原發性血小板增多症（ET）患者血小板功能的变化和对血栓形成的影响，分析奥扎格雷钠对血栓的预防作用。 方法 选择2014年9月～2017年9月陕西省人民医院（以下简称“我院”）收治的32例ET患者为研究对象，按随机数字表法分为两组，每组各16例。常规组采用常规治疗患者作为常规组，研究组患者在常规治疗的基础上给予奥扎格雷钠治疗。另选取20名同期来我院进行健康体检的健康志愿者作为对照组。观察三组对象P选择素（CD62P）、抗纤维蛋白原受体单抗（PAC-1）、血栓素（TXB2）、6-酮-前列腺素1α（6-keto-PGF1α）水平以及血栓形成情况。 结果 治疗前常规组和研究组CD62P、PAC-1、TXB2及6-keto-PGF1α水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05），但均明显高于对照组（P < 0.05）。治疗后研究组CD62P、PAC-1、TXB2及6-keto-PGF1α水平明显低于常规组，但仍然高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。常规组、研究组治疗后CD62P、PAC-1、TXB2以及6-keto-PGF1α水平均低于治疗前，差异有统计学意义（P < 0.05）。研究组血栓形成率仅为6.25%，明显低于对照组的18.75%，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 ET患者血小板功能及活性等指标明显异于健康人群，且血栓发生率明显升高。奥扎格雷钠可明显改善ET患者血小板情况，促进治疗效果，降低血栓发生率，值得临床应用及推广。

[关键词] 原发性血小板增多症;血小板;血栓;奥扎格雷钠

[中图分类号] R558.3          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）07（b）-0145-04

Effects of primary thrombocytosis on platelet function and thrombus formation and the clinical effect of Sodium Ozagrel in preventing thrombus

LI Lan   GAO Ying   ZHANG Weihua   HOU Limin   GAO Qiuying

Department of Hematology， Shaanxi Provincial People′s Hospital， Shaanxi Province， Xi′an   710068， China

[Abstract] Objective To study the changes of platelet function and its effect on thrombosis in patients with essential thrombocytosis （ET）， and to analyze the effect of Sodium Ozagrel on thrombosis prevention. Methods Thirty-two patients with ET admitted to Shaanxi Provincial People′s Hospital （"our hospital" for short） from September 2014 to September 2017 were enrolled as the study object， and they were divided into two groups by random number table， 16 cases in each group. Patients in routine group were treated with routine therapy， while patients in study group were treated with Ozagrel Sodium on the basis of routine treatment. Another 20 healthy volunteers who received physical examination in our hospital during the same period were selected as control group. The levels of P-selectin （CD62P）， anti-fibrinogen receptor monoclonal antibody （PAC-1）， thromboxane B2 （TXB2）， 6-keto-prostaglandin F1α （6-keto-PGF1α） and thrombosis rate of three groups were observed. Results Before treatment， there were no differences in levels of CD62P， PAC-1， TXB2 and 6-keto-PGF1α between the routine group and study group （P > 0.05）， but they were significantly higher than those of the control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）. After treatment， the levels of CD62P， PAC-1， TXB2 and 6-keto-PGF1α in the study group were significantly lower than those in the routine group， but still higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The thrombosis rate in the study group was only 6.25%， which was significantly lower than 18.75% in the control group， the difference was statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The indexes of platelet function and activity in ET patients are significantly different from those in healthy person， and the incidence of thrombosis is significantly increased. Sodium Ozagrel can significantly improve the platelet status of ET patients， promote the therapeutic effect and reduce the incidence of thrombosis， which is worthy of clinical application and promotion.

[Key words] Thrombocythemia major; Platelet; Thrombus; Sodium Ozagrel

原发性血小板增多症（essential thrombocytosis，ET）是骨髓增殖性疾病，具体发病机制尚不明确，多数研究认为与JAK-2基因V617突变有关[1-2]。临床上ET发病隐匿，进展缓慢，患者早期无任何临床症状，仅在发生血栓或血细胞计数明显升高时被发现[3]。临床表现为反复血栓，多见于四肢血栓，严重者甚至引起心、脑、肺、肾等重要器官血栓，导致血小板计数明显升高，功能异常[4-5]。目前，临床上对ET患者血小板的功能关注较少，因此在对ET患者治疗时往往忽视血栓的形成和预防。但在目前数据中统计显示[6]，血栓是ET患者最常见的并发症之一，除了血小板计数明显升高以外，血小板的功能也明显发生改变[7]。因此，观察ET患者血小板功能的变化以及如何预防ET患者的血栓形成是临床研究的热点。本文通过对陕西省人民医院（以下简称“我院”）收治的ET患者进行研究，分析患者P选择素（CD62P）、抗纤维蛋白原受体单抗（PAC-1）、血栓素（TXB2）以及6-酮-前列腺素1α（6-keto-PGF1α）水平，观察ET患者血小板功能变化情况，分析血栓的预防措施，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年9月～2017年9月我院收治的32例ET患者为研究对象，纳入标准：①符合ET诊断标准[8];②年龄30～80岁;③自愿参加本次研究。排除标准：①心肺功能、肾功能不全;②对本研究用药过敏的患者;③存在其他严重疾病对研究造成影响的患者。按随机数字表法将32例ET患者分为两组，每组各16例。其中，常规组中男9例，女7例;年龄38～75岁，平均（56.8±4.4）岁。研究组中男8例，女8例;年龄35～76岁，平均（56.4±4.5）岁。另纳入20名同期来我院行健康体检的健康志愿者作为对照组，其中男10名，女10名;年龄34～79岁，平均（56.9±4.5）岁。三组对象性别、年龄比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准通过，所有研究对象均自愿参加本次研究。

1.2 治疗方法

常规组患者给予常规治疗，给予羟基脲（齐鲁制药有限公司，规格：0.5 g/片，产品批号：20140909）、干扰素[商品名：干复津，日本安斯泰来制药株式会社，规格：9 μg/（0.3 mL·支），注册证号S20020002，产品批号：20140820]，以及阿司匹林（上海信谊百路达药业有限公司，规格：25 mg/片，产品批号：20141209）治疗。研究组在常规组基础上加用奥扎格雷钠（山东华鲁制药有限公司，规格：100 mL/瓶，产品批号：20141024），160 mg加入生理盐水静脉滴注，1次/d。两组患者均连续治疗2周。

1.3观察指标

观察三组CD62P、PAC-1、TXB2以及6-keto-PGF1α水平以及血栓形成率情况。

1.3.1 试剂与仪器  由美国BD公司生产的流式细胞仪，美国BD公司提供的异硫氰酸荧光素（FITC）标记的单克隆抗体PAC-1 FITC和藻红蛋白（PE）标记的单克隆抗体CD62P-PE。

1.3.2 标本采集及检测方法  采集三组对象空腹晨静脉血3 mL，将样本注入抗凝管中摇匀，另准备2支流式试管，一支装入10 μL FITC标记的单克隆抗体PAC-1 FITC，另一支装入10 μL藻红蛋白（PE）标记的单克隆抗体CD62P-PE。分别于2支试管中注入标本10 μL，摇匀后置入室温暗处反应15 min，再加入1 mL PBS悬浮，采用流式细胞仪检测CD62P和PAC-1水平。再次采集三组对象空腹晨静脉血3 mL，将血液样本置入含有消炎痛-EDTA-二钠40 μL的试管中，混匀后离心机旋转离心，离心半径100 mm，离心温度2～8℃，3000 r/min离心15 min后分离血浆，采用放射免疫法测定TXB2以及6-keto-PGF1α水平。

1.4 統计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，两组间比较采用SNK-q检验;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组对象各项指标比较

治疗前两组患者CD62P、PAC-1、TXB2及6-keto-PGF1α水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;但均明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。治疗后研究组上述指标水平明显低于常规组，但仍然高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。常规组、研究组治疗后CD62P、PAC-1、TXB2以及6-keto-PGF1α水平均低于治疗前，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 两组患者血栓形成率比较

研究组血栓形成率仅为6.25%（1例），明显低于对照组的18.75%（3例），差异有统计学意义（χ2=7.143，P < 0.05）。

3 讨论

血小板是人体血液中重要的成分之一，健康正常人的血液中血小板基本处于静息状态，但在生理或病理血栓状态下，受到各种因素的影响，血液中的血小板受到各种因素影响从而发生不可逆性活化，则会导致血小板与纤维蛋白原聚集，引起动脉血栓，导致血管闭塞，最终使患者发生血栓[9-10]。

目前ET患者出现血栓的具体机制尚未完全明确，但人们认为与血小板功能及数量的异常有明显关系[11]。本文对我院ET患者血小板的功能变化进行研究，观察较为稳定的TXB2和6-keto-PGF1α水平，以评估TXA2和前列环素（PGI2）水平。结果显示，治疗后研究组CD62P、PAC-1、TXB2以及6-keto-PGF1α水平明显低于常规组，但与对照组仍然略有差距。而研究组血栓形成率仅为6.25%，明显低于常规组的18.75%，提示ET患者血小板功能较常人发生变化，且血栓形成率明显升高，但经过奥扎格雷钠治疗后，可有效改善血小板功能，减少血栓的形成，达到较好效果。CD62P是血小板膜上的一种糖蛋白，成为血小板活化依赖性颗粒性膜蛋白，位于血小板α颗粒及内皮细胞的Weibel-Palade小体中，在内皮细胞或血小板活化时，CD62P则有α颗粒上转至血小板膜表面，因此CD62P成为活化血小板的标志物之一[12-13]。PAC-1是早期活化血小板的标志物之一，由GPⅡb/Ⅲa复合而成，是血小板活化的灵敏指标，常被临床用于血栓疾病的检测和评估[14]。TXA2主要由白细胞和血小板分泌而成，是血小板中花生四烯酸的主要代谢产物，具有强烈收缩血管的作用，促进血小板聚集作用[15]。PGI2则是由血管内皮细胞分泌，是一种强烈的血管扩张因子和血小板聚集抑制剂[16]。在健康人体内，TXA2和PGI2处于平衡状态，当TXA2和PGI2平衡失调时，则会导致血管痉挛，血栓形成[17]。但TXA2和PGI2在体内极其不稳定，不易检测[18]。TXA2经过30 s后代谢为稳定的TXB2，PGI2经过3 min后则会代谢为较为稳定的6-keto-PGF1α[19]。有学者研究发现[20]，TXA2与PGI2在凝血功能中起着重要作用，而PT患者的TXA2与PGI2指标均高于正常人群，因此具有发生血栓的潜在风险。

综上所述，ET患者血小板功能及活性等指标明显异于健康人群，且血栓发生率明显升高。奥扎格雷钠可明显改善ET患者血小板情况，促进治疗效果，降低血栓发生率，值得临床应用及推广。

[参考文献]

[1]  谢晓玲.老年原发性血小板增多症患者Jak2基因v617f点突变检测的临床意义[J].中国老年学杂志，2017，37（18）：4614-4615.

[2]  杨娣娣，韩秀蕊，赵园，等.原发性血小板增多症骨髓病理及JAK2-V617 F突变分析[J].现代肿瘤医学，2016，24（19）：3108-3111.

[3]  付荣凤，刘晓帆，刘葳，等.125例中国年轻原发性血小板增多症患者的临床特点及预后分析[J].中国实验血液学杂志，2017，25（3）：837-842.

[4]  陈沫，侯丽君，刘增香，等.原发性血小板增多症患者的预后和生存分析[J].中国实验血液学杂志，2017，25（2）：510-516.

[5]  Finazzi G，Carobbio A，Thiele J，et al. Incidence and risk factors for bleeding in 1104 patients with essential thrombocythemia or prefibrotic myelofibrosis diagnosed according to the 2008 WHO criteria [J]. Leukemia，2012，26（4）：716-719.

[6]  李小妮.151例低危原发性血小板增多症患者的临床特点和血栓危险因素相关分析[J].内科急危重症杂志，2016， 22（5）：379-380.

[7]  雷瑚儀，韩素芳.阿司匹林对老年原发性血小板增多症血小板活化及血液流变学的影响[J].中国现代医学杂志，2015，25（11）：94-96.

[8]  吴明正，周泽平，文静，等.原发性血小板增多症的危险分层与治疗进展[J].实用医学杂志，2015，31（17）：2920-2921.

[9]  吴艳丽，卢岑，梁志伟，等.治疗性血小板清除术治疗原发性血小板增多症1例[J].血栓与止血学，2015，21（6）：412-413.

[10]  车菲菲，王晓冬，万纯黔，等.原发性血小板增多症钙网蛋白基因突变及与临床特征的关系[J].血栓与止血学，2016，22（5）：524-526.

[11]  葛振嵘，李秀芬.急性冠脉综合征合并继发性血小板增多症患者血栓事件的预防及治疗[J].中国全科医学，2016， 19（14）：1719-1721.

[12]  陈荣华.阿司匹林对老年原发性血小板增多症血小板活化及血液流变学的影响[J].临床研究，2016，24（11）：13-14.

[13]  Barbui T，Finazzi G，Carobbio A，et al. Development and validation of an International Prognostic Score of thrombosis in World Health Organization-essential thrombocythemia （IPSET-thrombosis） [J]. Blood，2012，120（26）：5128-5133，5252.

[14]  彭育红.CALR基因突变引起的原发性血小板增多症合并急性心肌梗死1例[J].中华老年多器官疾病杂志，2017，16（5）：379-380.

[15]  Campregher PV，Santos FP，Perini GF，et al. Molecular biology of Philadelphia-negative myeloproliferative neoplasms [J]. Rev Bras Hematol Hemoter，2012，34（2）：150-155.

[16]  付荣凤，李慧媛，薛峰，等.修订版国际血栓预测模型（IPSET）在746例中国成人原发性血小板增多症患者中的应用评价[J].中华血液学杂志，2017，38（2）：92-96.

[17]  崔智勇，段金玲，聂彦博，等.阿那格雷和羟基脲在治疗原发性血小板增多症中血栓形成风险的Meta分析[J].临床内科杂志，2016，33（11）：759-762.

[18]  刘宇宏，刘卉.以血栓为首发表现的青年原发性血小板增多症6例临床分析[J].血栓与止血学，2016，22（1）：77-78.

[19]  何深，匡霞.以血栓为首发的原发性血小板增多症33例临床分析[J].中国现代药物应用，2015，9（14）：42-43.

[20]  廖彩翔.干扰素联合阿司匹林在ET维持治疗中的应用分析[J].河北医学，2017，23（3）：504-508.