栾正云， 黄燕， 沙敏， 徐捷， 郭婷， 叶军， 丁蔚,*

(1. 江苏大学医学院， 江苏 镇江 212013； 2. 泰州市人民医院中心实验室， 江苏 泰州 225300)

心房颤动(房颤)是临床上最常见的持续性快速心律失常，可产生严重的临床事件。目前，药物治疗房颤的效果有限，并且对房颤并发症的疗效也不佳。维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达于多种免疫细胞，如巨噬细胞、树突状细胞和激活的T细胞表面，另外在心肌细胞和成纤维细胞等表面也有表达。VDR基因位于常染色体12q12-14，是甾体类受体超家族中的一员，由14个外显子和数个内含子组成，总长度约75 kb。近年来国内外有关VDR等位基因频率的研究表明，VDR的基因型与身高[1]、骨质疏松[2-3]、糖尿病视网膜病变[4-5]等相关，且VDR等位基因分布因人种不同也存在较大差异[6]。本研究通过检测房颤患者外周血VDR基因rs2228570单核苷酸多态性(SNP)，探讨VDR基因多态性对房颤发病的影响，为该疾病的临床治疗提供理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

房颤患者173例来源于泰州市人民医院2016年2月至2017年1月的住院患者，其中男104例，女69例，平均年龄(60.09±19.59)岁。另选择同期在泰州市人民医院体检中心健康体检者173例作为健康对照组，其中男92例，女81例，平均年龄(54.50±15.01)岁。

1.2 引物的设计与合成

在NCBI基因数据库中找出VDR的序列信息(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_000376.2)，再找出rs2228570部分的序列信息(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=2228570)，根据基因序列及参考文献，设计VDR基因rs2228570位点扩增引物，由南京一道生物科技有限公司合成。rs2228570位点引物序列：上游5′-GCACCAAGGATGCCAGCTGGCCCTGGCACT-3′；下游5′-CACCTTGCTTCTTCTCCCTCCCTTTCCACT-3′。

1.3 血液样本基因提取

清晨空腹采集EDTA-K2抗凝静脉血，混匀。使用Blood Gen Mini Kit血液基因组柱式提取试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)提取VDR基因。

1.4 VDR基因的PCR扩增及测序

反应体系：基因组模板3 μL 、DEPC水39 μL、10×Tag缓冲液 5 μL、2.5 mmol/L dNTP(江苏省弗泰生物科技有限公司，Cat No.：BS004)1 μL、正向引物(50 pmol/L)0.5 μL、反向引物(50 pmol/L)0.5 μL、Taq酶(江苏省弗泰生物科技有限公司，Cat No.：RD003)1 μL。然后进行PCR：预变性95 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s,35个循环;72 ℃ 5 min。将PCR产物测序、分析，结果见图1。

图1 VDR基因rs2228570的多态性测序图

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料

见表1。与健康对照组比较，房颤组白细胞计数、中性粒细胞百分比、总胆固醇、三酰甘油、C反应蛋白均显著升高(P<0.05或<0.01)，而淋巴细胞百分比显著降低(P<0.01)。

表1 健康对照组、房颤组一般资料比较

2.2 两组VDR基因rs2228570多态性

VDR基因 rs2228570的SNP的差异分析结果显示，房颤组VDR基因的CC型占20.2%(35/173)、TC型占68.8%(119/173)、TT型占11.0% (19/ 173)；对照组 CC型占31.2%(54/173)、TC型占43.4%(75/173)、TT型占25.4%(44/173)，两组基因型分布差异有统计学意义(χ2=23.956，P<0.01)。

2.3 房颤组VDR基因rs2228570不同基因型患者实验室指标的差异

VDR基因rs2228570的TC型房颤患者白细胞计数、中性粒细胞百分比显著高于CC型和TT型(P<0.05)，而淋巴细胞百分比、单核细胞百分比显著低于CC型和TT型(P<0.05)。而不同基因型房颤患者肌酸激酶、CK-MB、总胆固醇、三酰甘油、C反应蛋白均无统计学差异(P>0.05)。见表2。

3 讨论

房颤的发病机制非常复杂，心脏的电生理、炎症、心房重构、肾素-血管紧张素-醛固酮系统等在房颤的发病机制中都具有重要的作用。VDR属于类固醇激素/甲状腺受体超家族成员，表达于心脏中的心肌细胞和成纤维细胞表面，由427个氨基酸残基组成，其与25-OH-VD3结合后的复合物可与靶基因上游启动子区或调控区域上的特定DNA序列相结合，进而对靶基因的转录表达进行调控。

表2 VDR基因rs2228570不同基因型房颤患者实验室指标差异

a：P<0.05，与TC型比较

本研究显示，房颤组VDR基因rs2228570的TC型比例显著高于健康人群，且TC型房颤患者白细胞计数、中性粒细胞比例显著高于CC型和TT型，而淋巴细胞比例、单核细胞比例显著低于CC型和TT型。该结果提示rs2228570位点的TC型是房颤发病的危险因素，可能与炎症的发生相关，从而导致房颤的发病。本研究为回顾性研究，且样本数偏少，VDR基因多态性与房颤发生、发展和预后之间的关系，仍有待于进一步大规模的前瞻性研究证实。