胡金飞，胡望远

(金华市中心医院放疗科，浙江 金华 321000)

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，该病的发病原因至今尚未明确，可能与患者的遗传、环境因素、心理情志因素等有关，近年发病率呈升高的趋势，其死亡率占女性肿瘤的第二位，且呈低龄化发展[1]。据统计约10%的患者确诊时已合并有远处转移(TNM分期 Ⅳ期)[2]，约30%的转移性乳腺癌(metastatic breast cancer，MBC)患者生存期超过5年，10%的患者生存期超过10年[3]。针对已经发生远处转移的乳腺癌患者行原发病灶切除应对远期疗效具有积极影响，因此，本次研究入选的所有患者均进行原发病灶的切除以期观察预后情况。RNA解旋酶DDX3是DEAD box家族成员之一，参与mRNA的转录和翻译，有研究报道其与多种恶性肿瘤如乳腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌等有关，有可能作为潜在的治疗靶点[4]。目前关于DDX3与转移性乳腺癌的预后关系研究尚未见报道，因此，本文研究RNA解旋酶DDX3在转移性乳腺癌中的表达情况，为转移性乳腺癌患者的预后判断提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料

本次研究的患者为2010年1月至2012年6月期间就诊金华市中心医院确诊为转移性乳腺癌的83例患者，年龄范围35～74岁，平均年龄(51.25±2.41)岁，原发病灶经穿刺活检及病理组织切片检测确认，转移病灶经计算机断层扫描(computed tomography, CT)、核磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging, MRI)、放射性核素扫描确认。所有患者书面签署知情同意书并经医院伦理委员会审批通过后开展本次研究。入选标准：初次就诊经穿刺活检及病理组织切片检测确认为转移性乳腺癌患者，术前未进行过放化疗，预计生存期3个月以上，具备完整的病例和临床资料包括随访资料完整，无其他严重脏器功能及慢性疾病，血液学检查各项指标基本正常，东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG)评分≤3分。排除标准：复发转移乳腺癌患者，颅脑转移者，术前进行过放化疗者，妊娠或精神病史者，哺乳期妇女，生存期预计3月以内者，临床资料和随访资料不完整者，不配合完整治疗者，合并有其他恶性肿瘤及慢性疾病者。

1.2 治疗方法

入选的83例转移性乳腺癌患者，均进行原发病灶组织切除，术后19例患者仅进行放疗，其余64例患者均进行相应个体化放疗+化疗。所有入选的患者均采用电话或门诊随访的方式，截止日期为2017年7月31日，平均随访时间为(47.3±2.7)个月，随访内容主要为患者术后3年的复发情况、生活情况等。

1.3 试验方法

采用反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测RNA解旋酶DDX3的表达，具体方法为：于术中取83例患者的癌组织和癌旁组织各30mg，经常规石蜡包埋后供检测使用，检测时经液氮吹打成粉末状，加Trizol试剂提取总RNA，经分光光度计测总RNA后行逆转录，具体操作步骤按照逆转录试剂盒(Prime-ScriptTM，美国)说明书进行，经30℃10min、55℃35min反应后置于-80℃冰箱保存备用，PCR扩增体系及扩增条件为：1.5μL浓度为25mmol/L的MgCl2，2μL浓度为2.5mmol/L的dNTP，各1.25μL的PCR引物，2μL的DNA模板，0.5μL Tag DNA合成酶、2.5μL的10倍缓冲液，其余均用双蒸水加至25μL，先于95℃预变性3min，再94℃变性30s，55℃退火37s，72℃延伸30s，共33个循环，最后72℃延伸3min。DDX3的表达量采用2表示。

1.4统计学方法

2结果

2.1 RNA解旋酶DDX3在转移性乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

通过RT-PCR检测结果显示，RNA解旋酶DDX3在转移性乳腺癌组织中的表达(0.49±0.06)显著高于癌旁组织的表达量(0.23±0.02)(P<0.05)。同时，RNA解旋酶DDX3在转移部位、转移部位数、雌激素受体/孕激素受体(estrogen receptor/progesterone receptor，ER/PR)状态临床因素中表达存在明显差异(均P<0.05)，而在年龄、是否绝经、癌组织类型临床因素中不存在明显差异(均P>0.05)，见图1和表1。

图1 RNA解旋酶DDX3在转移性乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况

Fig.1 Expression of RNA helicase DDX3 in metastatic breast cancer tissues and adjacent tissues

因素例数(n)DDX3表达量t/FP年龄(岁)1.4320.149 <50310.49±0.04 ≥50520.43±0.04是否绝经0.9140.206 是630.49±0.06 否200.47±0.03癌组织类型1.1070.163 浸润性导管癌450.50±0.04 浸润性小叶癌270.49±0.03 其他110.49±0.02转移部位8.0130.003 软组织170.40±0.03 淋巴结230.54±0.04 内脏转移210.39±0.03 骨转移220.37±0.03转移部位数9.2270.001 1～2510.37±0.04 ≥3320.52±0.04ER/PR状态8.2460.002 阴性340.39±0.03 阳性490.52±0.04

2.2 DDX3的表达水平与转移性乳腺癌患者术后复发的关系

DDX3的表达水平≥0.45在术后3年的复发率明显高于其表达水平<0.45者(P<0.05)。同时，DDX3的表达水平≥0.45者的平均复发时间也短于其表达水平<0.45者，两组差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3 ROC曲线分析DDX3的表达水平与转移性乳腺癌患者复发诊断的预测价值

根据ROC曲线分析得到：RNA解旋酶DDX3的表达对转移性乳腺癌术后复发诊断的曲线下面积AUC为0.813(95%CI:0.702～0.906)，灵敏度为0.787，特异度为0.869，具体见图2。

图2 ROC曲线分析DDX3的表达水平与转移性乳腺癌患者复发诊断的预测价值研究

Fig.2 Predictive value of DDX3 expression on recurrence of metastatic breast cancer analyzed by ROC curve

2.4转移性乳腺癌患者临床病理资料与生存率关系的单因素分析

转移性乳腺癌患者术后3年、5年的生存率分别为45.85%、25.37%，将患者临床资料与生存率进行单因素分析结果显示，转移部位、转移部位数、术后辅助放化疗、DDX3表达量是影响患者3年、5年生存率的影响因素(P<0.05)，具体见表3、图3。

Table 2 The relationship between DDX3 expression level and recurrence rate and recurrence time of metastatic breast cancer

表3 转移性乳腺癌患者临床病理资料与生存率关系的单因素分析[n(%)]

(转下表)

(续上表)

因素例数(n) 3年生存情况(n=38) 5年生存情况(n=21) 生存率χ2P生存率χ2P癌组织类型1.2180.1161.1030.205 浸润性导管癌4520(44.44)15(33.33) 浸润性小叶癌2712(44.44)5(18.52) 其他116(54.55)1(9.09)转移部位8.4330.0049.2160.002 软组织177(41.17)2(11.76) 淋巴结2311(47.83)9(39.13) 内脏转移2113(61.90)8(38.09) 骨转移227(31.82)2(9.09)转移部位数5.8730.0255.7970.028 1～25127(52.94)18(35.29) ≥33211(34.38)3(9.38)ER/PR状态3.1120.0652.5320.074 阴性3418(52.94)11(32.35) 阳性4920(40.82)10(20.41)术后辅助放化疗6.1140.0215.8400.032 放疗+化疗6429(45.31)19(29.69) 放疗199(47.37)2(10.53)DDX3的表达量8.7740.0036.8930.011 ≥0.455119(37.25)9(17.65) <0.453219(59.38)12(37.50)

图3利用Kaplan-Meier法分析影响转移性乳腺癌生存率的影响因素

Fig. 3 Influencing factors of survival rate for metastatic breast cancer analyzed by Kaplan-Meier

2.5转移性乳腺癌患者预后多因素分析

将患者临床病理资料与患者5年生存情况单因素分析中有统计学意义的因素作为因变量，预后5年生存情况为自变量进行Cox风险比例回归模型分析，分析结果得到转移部位、转移部位数、DDX3表达量升高是转移性乳腺癌患者预后的独立危险因素，术后进行辅助放化疗是患者预后的保护因素(P<0.05)，见表4。

表4 转移性乳腺癌患者预后多因素分析

3讨论

3.1乳腺癌治疗和预后判断进展

乳腺癌是女性中常见的恶性肿瘤，在我国每年有近17万女性罹患乳腺癌，近年该病的发病率和死亡率均明显上升[5]。据流行病学统计，乳腺癌易发在45岁以上的患者尤以绝经后女性为多见，70%以上组织学类型为浸润性导管癌[6]，本次入选的转移性乳腺癌患者中绝大多数以浸润性导管癌为主且以绝经后女性为主，部分符合既往的主流报道。但有研究指出[7]，年轻患者易出现淋巴结转移，经治疗后极易出现复发转移，但是我们本次研究通过对入选患者的分析发现出现复发转移的患者仍以50岁以上患者居多，这与既往的报道不一致。Puig-Vives等[8]和Elkablawy等[9]报道指出疾病的分子分型是预后的独立危险因素，本次研究中DDX3的表达水平在ER/PR阴性与阳性组间表达存在差异，但是患者3年、5年生存率在ER/PR阴性与阳性组间无明显差异，不具有统计学意义(P>0.05)。发生转移的患者主要以淋巴转移、骨转移及内脏转移为主，转移部位数较多者预后明显较差。

3.2 DDX3对乳腺癌临床预后的判断作用

DDX3是DEAD盒蛋白RNA解旋酶家族一员，参与RNA代谢的重要过程，已有研究显示它与多种恶性肿瘤的发生发展有关，参与细胞周期及凋亡的调控，在肝细胞癌中的表达明显高于癌旁组织[4,10]。本研究显示DDX3在转移性乳腺癌的癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.05)，可能的机制是乳腺癌发生转移时，癌细胞的细胞周期及细胞凋亡过程失常，导致参与细胞周期及细胞凋亡调控的DDX3表达上调。此外，DDX3的表达水平≥0.45在术后3年的复发率明显高于其表达水平<0.45者，同时，DDX3的表达水平≥0.45者的平均复发时间也短于其表达水平<0.45者，提示DDX3的高表达预示转移性乳腺癌的预后较差。临床病理资料与3年、5年生存率的单因素分析结果显示，转移部位、转移部位数、术后辅助放化疗、DDX3表达量是影响患者3年、5年生存率的影响因素(P<0.05)，但Cox多因素分析结果得到术后辅助放化疗是患者预后的保护因素，而转移部位、转移部位数、DDX3表达量是患者预后的独立危险因素(P<0.05)。 已有报道证实，疾病的临床分期每增加一期，患者死亡的风险便增加数倍[2，11]。本次研究中转移性乳腺癌患者已处于晚期，DXX3的诊断效果依然明显。利用ROC曲线分析得到DDX3对转移性乳腺癌患者术后3年复发的诊断具有良好的灵敏度和特异度。

综合以上分析结果，对于转移性乳腺癌患者检测其DDX3的表达对患者预后的评估具有重要的意义，可为临床医生选择更优的治疗方案提供参考依据，也为临床开发靶向治疗药物提供一定的方向。