王 楠，刘 杰，周 轶，牛艳昕

(金华市人民医院妇产科，浙江 金华 321000)

卵巢癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤，发病率较高，临床症状以月经不调、消瘦最常见[1]。相关研究表明，大部分卵巢癌患者在初诊时即处于晚期，5年生存率大约在30%[2-3]。采取有效的检查方式对早期卵巢癌患者进行准确诊断，可及早确立患者病情进展程度，并针对患者疾病严重程度开展相应的治疗，在临床中具有重要意义。目前，临床中针对卵巢癌的诊断主要采用糖类抗原125(carbohydrate antigen125，CA125)标志物，长期的临床研究发现，该标志物虽具有一定检出率，但采用该标志物进行诊断特异性较低，相应的假阳性率较高[4]。近期，我们参考诸多学者相关研究发现，血清nidogen-2、人附睾蛋白4(human epididymisprotein 4，HE4)和胸苷激酶1(thymidine kinase1，TK1)等标志物应用于卵巢癌患者临床诊断中具有较高的诊断价值[5]。为探讨上述三种标志物与卵巢癌疾病进展的关系以及其在卵巢癌患者发病过程中的具体表现，本次研究选取我院近期收治的多例卵巢癌患者、良性卵巢疾病患者以及近期于我院进行体检的健康女性作为研究对象，就血清nidogen-2、HE4和TK1联合检测在卵巢癌诊断中的应用价值进行分析，报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

本次研究选取金华市人民医院2015年10月至2017年10月期间收治的74例卵巢癌患者作为卵巢癌组，选同期于我院治疗的48例良性卵巢作为良性组，另选同期于我院体检的45例健康女性作为对照组。卵巢癌组中，患者最大年龄77岁，最小年龄35岁，平均年龄(54.68±6.43)岁，74例患者均参考国际妇产科联盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO)手术病理分期，其中早期卵巢癌(Ⅰ～Ⅱ期)患者共27例，晚期卵巢癌(Ⅲ期)患者共47例，参考分化程度可分为：52例低分化、18例中分化，4例高分化；良性组中，患者最大年龄75岁，最小年龄32岁，平均年龄(52.17±6.41)岁，其中浆液性囊腺瘤9例，卵巢巧克力囊肿14例，畸胎瘤12例，子宫内膜异位症5例；对照组中，体检人群最大年龄73岁，最小年龄34岁，平均年龄(53.41±6.34)岁。三组受检人员在各项基本资料上无显著差异(P>0.05)，可进行后续多组间对比研究。

1.2纳入标准

卵巢癌组入选所有患者均符合《卵巢癌诊治指南》[6]中相关诊断标准，患者在入院后经多项常规检查后初步诊断，后经手术病理检查确诊。所有患者在入院后均表现出不同程度月经不调、消瘦等症状。卵巢癌患者均为首发，未经任何治疗，排除入院前于他院进行放疗与化疗方式进行治疗的患者；排除合并有机体多项器官严重功能障碍的患者；排除其他系统性肿瘤病史的患者；排除多项临床病案资料不齐全的患者。对照组体检人群均未出现冠心病、糖尿病及高血压疾病。所有患者及家属均对本研究知情，并签署知情同意书，本研究已获金华市人民医院伦理委员会批准。

1.3检验方法

进行标本采集时，所有受检对象均处于非月经期，在对所有研究对象进行血液样本采集时均需空腹8h以上，样本为5mL肘静脉血液，将所得样本置于红色试管中，后于4℃恒温环境下静置1h，在3 000r/min离心机下进行离心处理，离心操作时间为15min，取得上层血清置入无菌EP管中，并将最终样本放置于-20℃的恒温环境中待测。针对血清HE4、血清TK1的检测主要采用酶联吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法，具体操作方法参考检测试剂盒说明书中相关要求规范进行，血清中nidogen-2采用化学免疫增强发光法，检测仪器为UniCelDxl 800型化学发光仪(Beckman Coulter)。组织中nidogen-2的检验主要采用免疫组化检测(SP试剂盒)。nidogen-2判定的标准为：上皮下基底膜组织未被染成黄色或棕褐色为阴性反应(-)；染色部位呈点状为阴性反应(-)；上皮下基底膜呈现棕褐色不连续状为阳性反应(+)，上皮下基底膜呈现棕褐色毛细线状为阳性反应(++)，呈深棕色粗线状为阳性反应(+++)。阳性表达率=阳性患者例数/总例数×100%。血清HE4值正常范围在0～150pmol/L之间，若所检测值超过150pmol/L则可认为呈阳性反应。血清TK1正常范围在2pmol/L之间，若所检测值超过2pmol/L则可认为呈阳性反应。

1.4统计学方法

2结果

2.1三组检测指标结果比较

三组间nidogen-2、HE4和TK1水平比较有显著性差异(均P<0.05)，进一步每两组之间比较，结果发现卵巢癌组nidogen-2、HE4和TK1等指标表达量显著高于良性组、对照组(t值分别为21.36、26.97、15.22、23.69、29.55、16.01，均P<0.05)，但良性组与对照组上述指标比较无显著性差异(t值分别为1.41、1.85、1.22、1.08，均P>0.05)，见表1。

组别例数(n)nidogen-2(μg/L)HE4(pmol/L)TK1(pmol/L)卵巢癌组7461.30±6.48481.47±69.383.16±1.03良性组4815.36±3.74*67.12±23.33*0.47±0.12*对照组4514.91±3.20*#60.89±23.14*#0.40±0.11*#F1 725.231 469.80318.88P0.0000.0000.000

注：*表示与卵巢癌组对比，良性组与对照组nidogen-2、HE4和TK1等数据差异P<0.05；#表示与良性组对比，对照组nidogen-2、HE4和TK1等数据差异P>0.05。

2.2阳性情况分析

卵巢癌组74例患者中，共检出nidogen-2阳性表达66例，HE4阳性表达56例，TK1阳性表达57例；良性组48例患者中，共检出nidogen-2阳性表达3例，HE4阳性表达2例，TK1阳性表达0例；对照组45例健康人群中，共检出nidogen-2阳性表达0例，HE4阳性表达0例，TK1阳性表达0例(图1)。卵巢癌组nidogen-2、HE4和TK1阳性表达率均高于良性组与对照组(χ2值分别为8.991、7.695，均P<0.05)，良性组与对照组nidogen-2、HE4和TK1阳性表达率无显著差异(均P>0.05)，见表2。

注：图A卵巢癌组；图B良性组；图C对照组。

图1不同组别nidogen-2检测结果(×200)

Fig.1 Nidogen-2 detecting results of different groups (×200)

表2三组阳性表达率对比[n(%)]

Table 2 Comparison of positive expression rates among three groups[n(%)]

注：*表示与卵巢癌组对比，良性组与对照组nidogen-2、HE4和TK1等数据阳性表达率差异P<0.05；#表示与良性组对比，对照组nidogen-2、HE4和TK1等数据阳性表达率差异P>0.05。

2.3联合检测结果分析

以卵巢癌组患者作为后续研究对象，不同检测方法敏感性、特异性、准确率均有显著性差异(χ2值分别为29.321、98.129、31.941，均P<0.05)，三联检测均最高，见表3。

表3联合检测结果对比(%)

Table 3 Comparison of combined detecting results(%)

检测方法敏感性特异性准确性nidogen-286.4983.3389.19HE472.9747.4575.68TK160.8134.6862.16三联检测94.5990.9195.95χ229.32198.12931.941P<0.01<0.01<0.01

3讨论

3.1肿瘤标志物在临床中的应用

肿瘤标志物可对患者疾病机体内肿瘤生长情况及疾病进展情况进行一定程度的反馈，Xu等[7]在研究中提出，同一肿瘤可能存在多种不同的肿瘤标志物，而不同的肿瘤组织类型中也可能存在相同的肿瘤标志物。肿瘤标志物对各类肿瘤疾病的筛选与诊断均具有一定的准确性，且利用肿瘤标志物对患者患病情况及病情进展程度进行预测时，对患者机体造成的创伤较小，且检测方式较为简单[8]，现已在临床中被广泛推荐应用。针对卵巢肿瘤的诊断，目前临床中最为常用的肿瘤标志物为CA125，Goff 等[9]在研究中证实，CA125肿瘤标志物在对化疗药物的敏感性、肿瘤复发情况及其他盆腔肿瘤的鉴别均具有重要临床价值。另有学者在上述研究基础上提出，卵巢癌患者在患病期间，其血液中血清CA125水平显著升高，且CA125肿瘤标志物在对浆液性卵巢癌患者进行临床诊断时敏感性最高。但我们在以往类似的临床研究中发现，CA125在对卵巢癌患者进行临床诊断时虽具有一定的敏感性，但诊断特异性较低，对假阳性患者不能较好的排除，对患者后期治疗有较为严重的影响[10-11]。

3.2 nidogen-2、HE4、TK1对卵巢癌的诊断价值分析

上个世纪至今，不断有学者对nidogen-2进行相关分析，研究提出nidogen-2可能成为新的具有较高价值的卵巢癌肿瘤标志物[12]。本次研究中通过对卵巢癌患者、良性卵巢疾病患者、正常健康女性进行分组分析，其中卵巢癌组nidogen-2表达水平显著高于良性组与对照组(P<0.05)，说明其对卵巢肿瘤与卵巢疾病的鉴别有显著效果，可作为一种新型血清肿瘤标志物。而HE4则是近期出现的一种对卵巢癌具有较高诊断敏感性与特异性的肿瘤标志物，程喜锋等[13]在研究中指出，HE4基因的激活可被用于卵巢癌靶向性基因治疗，本次研究同样通过卵巢癌组患者HE4表达水平显著高于良性组与对照组(P<0.05)，证实了其在卵巢癌临床诊断的可行性。除此之外，本次研究结果还表明了，TK1在正常组织中的含量较低，而在肿瘤组织中的含量较高，结合相关学者研究报告，推测其原因为：恶心肿瘤内部细胞增殖速度较快，因而TK1在其中表现了累积增加状态，其表现水平不断升高。本次研究还通过对上述三种肿瘤标志物阳性表达率的检测证实了它们在卵巢癌疾病临床诊断中的应用价值[14]。表明了上述三种肿瘤标志物在健康女性中不具备阳性表达，而在卵巢良性疾病中仅具有极地的阳性表达，在卵巢癌患者中具有较高的阳性表达。通过该项结果可对疑为卵巢癌疾病的患者进行初步诊断，并通过后续对敏感性、特异性诊断结果对患者疾病状态进行细致分析[15]。本次研究中，我们发现nidogen-2、HE4和TK1在单项诊断上敏感性、特异性无显著差异，但均低于三联诊断(P<0.05)，初步推断采用上述肿瘤标志物对患者进行三联诊断更有利于肿瘤疾病的检出，临床中可考虑使用，但具体结论还有待后续大样本数据进一步研究。

综上所述，在针对卵巢癌患者临床诊断时，采用血清nidogen-2、HE4和TK1联合检测可有效提高诊断敏感性、特异性及诊断准确率，可考虑临床推广应用。