谭 诗，李春莉，陈 霞，易四维△

(重庆市妇幼保健院：1.检验科；2.遗传与生殖研究所 401147)

珠蛋白生成障碍性贫血是由于珠蛋白基因突变，使α链与非α链的合成不平衡，导致血红蛋白(Hb)成分发生改变而引起的一类小细胞低色素性贫血[1]。广东、广西等地均为高发区，以α-、β-珠蛋白生成障碍性贫血最常见，而重庆地区由于地域迁徙的原因，其检出率也较高，被相关部门定为高发省份[2-3]。众所周知，重型珠蛋白生成障碍性贫血治疗较困难，费用昂贵，尽管骨髓移植可治愈，但风险大且难以广泛开展，给家庭及社会带来严重的经济负担。因珠蛋白生成障碍性贫血虽难治但可防，故提倡育龄夫妇把珠蛋白生成障碍性贫血作为孕前或产前常规检测，确定高风险对象，扩大优生优育，降低该疾病患儿的出生率，提高出生人口素质。目前的筛查诊断方法主要有血常规、Hb电泳、基因检测等，基因检测费用昂贵、要求条件高。作为公共卫生项目，应综合考虑经济水平、成本、效能、可操作性等，以选择最适宜的产前筛查方案。因此，现探讨血常规及Hb电泳联合检测，提高珠蛋白生成障碍性贫血产前筛查的检出率。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2015年1月至2017年1月该院妇保、产科、遗传生殖门诊就诊的育龄期夫妇，经基因检测确诊珠蛋白生成障碍性贫血患者922例，年龄20～40岁，平均年龄(31.0±4.3)岁。

1.2方法

1.2.1血细胞分析 采用日本Sysmex XN全自动血细胞分析仪，检测红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白(MCH)、Hb、红细胞分布宽度(RDW)等参数，严格按照仪器标准操作规程进行标本与质控检测，保证每批检测质控均在控，质控物由四川迈克公司提供。MCV正常参考区间为82～100 fL；MCH为27～34 pg；Hb为男性：130～175 g/L、女性：115～150 g/L；RDW<14.6%。

1.2.2Hb电泳 仪器为法国Sebia公司的Capillarys 2全自动电泳仪，质控物为Sebia公司原装配套。诊断截断值为HbA2<2.5%或>3.5%，HbF>2.0%或者存在异常Hb条带(HbCS、HbH、HbBart′s)等。

1.2.3基因诊断 提取抗凝全血DNA进行基因检测。采用深圳亚能公司的试剂盒进行α-和β-珠蛋白基因分析；使用跨越裂口聚合酶链反应(Gap-PCR)检测α-珠蛋白基因--SEA、-α3.7和-α4.23种常见缺失；应用PCR结合反向斑点杂交法(RDB)检测β-珠蛋白基因17个常见突变位点和α-珠蛋白基因αCS、αQS、αWS3种点突变类型。按照试剂盒说明书进行操作和结果判定。

2 结 果

2.1基因检测结果 922例患者α-珠蛋白生成障碍性贫血541例(58.7%)，β-珠蛋白生成障碍性贫血363例(39.4%)，α-和β-复合珠蛋白生成障碍性贫血18例(1.9%)。α-珠蛋白生成障碍性贫血患者标准型(--SEA) 221例，静止型(-α3.7、-α4.2)278例，HbH 4例。β-珠蛋白生成障碍性贫血患者CD17(111/363)和CD41-42(99/363)2种基因突变最常见。见表1。

2.2血常规指标的筛查结果 β-珠蛋白生成障碍性贫血患者MCV、MCH、Hb最低，RDW最高。α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型患者MCV为(84.49±4.85)fL，MCH为(27.22±1.83)pg，Hb为(132.64±17.89)g/L，RDW为(13.58±1.19)%，均在正常参考值范围。见表2。

表1 α-珠蛋白生成障碍性贫血与β-珠蛋白生成障碍性贫血基因类型

表2 血常规指标的筛查结果

表3 Hb电泳的检测结果

表4 各指标单独检测的漏检率结果

2.3Hb电泳的检测结果 α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型患者HbA2为(2.51±0.24)%，属于正常参考范围；α-珠蛋白生成障碍性贫血轻型患者HbA2为(2.31±0.22)%，仅稍低于正常参考范围；β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的Hb电泳结果显示，HbA2达到(5.21±0.74)%，显著高于α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型及轻型(P=0.000)。见表3。

2.4各指标单独检测的漏检率结果 MCV、MCH、Hb电泳单独检测对α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型患者的漏检率较高，分别为66.55%、44.24%、61.87%，而对β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的漏检率为15.70%、16.25%、2.48%。见表4。

2.5各指标联合检测的漏检率结果 各指标联合检测为任何1种出现阳性结果即判为阳性，MCH与Hb电泳联合检测对各型珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率最低，对α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型为27.34%、α-珠蛋白生成障碍性贫血轻型为13.78%、β-珠蛋白生成障碍性贫血为0.28%。见表5。

表5 各指标联合检测的漏检率结果

3 讨 论

珠蛋白生成障碍性贫血是全球最常见的单基因隐性遗传病，已成为我国南方地区一个重大的公共卫生问题，其中α-珠蛋白生成障碍性贫血是导致围产儿病死和产科并发症的原因之一[4-5]。目前在南方10省开展珠蛋白生成障碍性贫血产前预防控制项目，重庆则于2015年正式启动该项目，重型珠蛋白生成障碍性贫血的产前筛查和早期干预是其主要内容之一。

本研究结果表明，α-珠蛋白生成障碍性贫血占58.7%，β-珠蛋白生成障碍性贫血占39.4%，α-和β-复合珠蛋白生成障碍性贫血占1.9%。α-珠蛋白生成障碍性贫血的标准型(--SEA、-α3.7、-α4.2)所占比例依次处于前3位；β-珠蛋白生成障碍性贫血的(CD17、CD41-42)2种基因突变最多(见表1)，与杜伟等[3]研究的重庆9区12县珠蛋白生成障碍性贫血基因分布基本一致。临床分型显示，α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型(-α3.7、-α4.2)所占比例最大，其次是轻型(包括--SEA、-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2)。

本研究结果显示，α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型患者血常规各参数及Hb电泳结果均在正常参考值范围，因此各指标单独检测对该类患者的漏检率较高。有研究建议，以血常规MCV、MCH作为珠蛋白生成障碍性贫血尤其是静止型α-珠蛋白生成障碍性贫血的筛查手段时应以一种平行实验作为初筛，即2项指标中任一项阳性则视为筛查阳性，该方法能提高筛查的灵敏度，降低漏检率[6]。本研究结果也证实，静止型α-珠蛋白生成障碍性贫血患者MCV单独检测的漏检率为66.55%，MCH为44.24%，而两者联合检测的漏检率降至39.21%。

本研究联合检测结果表明，血常规与Hb电泳联合检测后可不同程度地降低各型珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率。与单独检测比较，MCV与MCH联合检测除了能降低静止型α-珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率外(P<0.05)，对其他型珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率并不显著(P>0.05)。与MCV单独检测比较，MCV与HbA2联合检测后可降低α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型、β-珠蛋白生成障碍性贫血、α-和β-复合珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率；MCH与HbA2联合检测的漏检率最低，对α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型为27.34%、α-珠蛋白生成障碍性贫血轻型为13.78%，α-和β-复合珠蛋白生成障碍性贫血为5.56%、而β-珠蛋白生成障碍性贫血仅为0.28%，HbA2是β-珠蛋白生成障碍性贫血的良好检出指标[7]。因此，MCH与Hb电泳联合检测可用于珠蛋白生成障碍性贫血的产前筛查。

本研究结果还发现，MCH与Hb电泳联合检测尽管能显著降低α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型及β-珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率，但对α-珠蛋白生成障碍性贫血轻型的漏检率并不明显。根据遗传规律，如果夫妻双方均为α-珠蛋白生成障碍性贫血轻型患者，则子代有1/4的概率为重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿。因此，提高α-珠蛋白生成障碍性贫血轻型的检出率至关重要，后续工作中还有待深入研究。

综上所述，目前治疗重型珠蛋白生成障碍性贫血费用昂贵且疗效有限，预防和控制重症珠蛋白生成障碍性贫血患儿出生显得尤其重要。在高发地区加强育龄人群的知识普及与宣教，建立高效的筛查机制及完善的孕前咨询、产前诊断是减少重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿出生最有效的措施。除了对珠蛋白生成障碍性贫血漏检率的分析外，还需要进一步探讨各指标联合检测的灵敏度和特异度，寻找合适的筛查截断值，提高产前筛查效率。

参考文献

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[3]杜伟，欧阳小峰，甘承文，等．重庆地区8 024例地中海贫血筛查结果及地贫基因型分析[J]．重庆医科大学学报，2014，38(5)：694-697．

[4]WEATHERALL D J.Thalassemia as a global health problem:recent progress toward its control in the developing countries[J].Ann N Y Acad Sci,2010,120(1):17-23.

[5]李兵，张小庄，潘小英，等．诊断水平对医院监测胎儿水肿综合征发生率的影响[J]．中国妇幼保健，2009，24(24)：3365-3368．

[6]方小武，干志锋，谢丰华，等．血常规MCV,MCH对静止型α-地中海贫血的筛查意义[J]．中国优生与遗传杂志，2012，20(3)：26-33．

[7]吴蓓颖，江岑，王也飞，等．血常规、血清铁及血红蛋白电泳联合检测在地中海贫血非高发地区的筛查意义[J].中华血液学杂志，2016，37(10):908-911.