李静,石巍，魏曼

(郑州大学第三附属医院妇产科,河南郑州450052)

性腺激素释放激素激动剂对子宫内膜异位症在位及异位内膜细胞凋亡的影响

李静,石巍，魏曼

(郑州大学第三附属医院妇产科,河南郑州450052)

目的分析子宫内膜异位症在位及异位内膜细胞凋亡受到性腺激素释放激素激动剂的影响。方法以30例子宫内膜异位症患者为研究对象，均给予体外培养，并利用不同浓度的性腺激素释放激素激动剂处理在位细胞和异位细胞，观察细胞生长及细胞凋亡受到性腺激素释放激素激动剂的影响情况。结果子宫内膜异位症在位细胞核异位细胞生长率与性腺激素释放激素激动剂浓度及作用时间呈反比。性腺激素释放激素激动剂作用24 h后，高浓度在位、异位细胞凋亡率均高于低浓度，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论子宫内膜异位症在位及异位内膜细胞在性腺激素释放激素激动剂作用下加速凋亡，可促进患者康复。

性腺激素释放激素激动剂；子宫内膜异位症；细胞凋亡

子宫内膜异位症为临床常见病，多发于育龄期女性，内膜异位至盆腔腹膜为主要发病部位，卵巢、输尿管等也可发病。研究显示，合并不孕症的患者约占子宫内膜异位症患者的30%，严重影响患者的生活质量[1]。临床治疗子宫内膜异位症时，多采用手术方式，而在控制病情进展、减少术后复发方面，药物治疗具有重要作用，本研究中以收治的子宫内膜异位症患者为研究对象，体外培养在位及异位内膜细胞，并给予性腺激素释放激素激动剂，观察期对细胞凋亡的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料以本院2014年10月～2015年10月收治的子宫内膜异位症患者30例为研究对象，年龄29～43岁，平均（36.7±2.3）岁。纳入标准：均给予手术治疗，术前未接受激素治疗，无其他妇科合并症，经病理学检查明确。

1.2 方法

1.2.1 内膜细胞培养方法术中，每名患者均收治典型卵巢异位内膜病灶、子宫在位内膜，用于体外培养，培养方法为组织块消化法。剪碎组织，在37℃下，利用0.1%Ⅳ型胶原酶笑话，时间为2～3 h，完成后，离心细胞，在细胞培养瓶中接种，培养液选择为改良杜氏伊格尔培养基（内含胎牛血清10%、谷氨酸10 mmol/L、胰岛素0.1 U/mL、青霉素及链霉素各100 mg/mL），培养时间12 h，之后利用倒置显微镜进行1次细胞形态观察，24 h后，培养液更换，内膜细胞如未贴壁，直接剔除，以后培养液更换时间为2～3 d，细胞平的80%～90%被细胞铺满时，开始传代培养。

1.2.2 细胞增殖活性检测方法内膜细胞增殖活性利用四甲胺偶氮唑蓝比色法（MTT）检测。首先，制动单细胞悬液，同样采用改良杜氏伊格尔培养基进行，内膜细胞进入到对数生长期后，在96孔培养板中接种内膜细胞，每孔接种密度为1×104个，完成后，于CO2培养箱中放置培养板，进行24 h培养。其次，加入性腺激素释放激素激动剂，剂量浓度分别为100 ng/mL、200 ng/mL，每个浓度中，包含空白孔、对照孔、3个平行孔，培养时间分别为12 h、24 h、36 h、48 h，完成后，将20μLMTT溶液（5 mg/mL）加入到每个孔中，在37℃下，将其放置在培养箱中，继续4 h，培养终止，孔内上清液去除，再将二甲基亚砜150μL加入到每个孔中，振荡10 min，充分溶解蓝紫色结晶物。最后，利用MTT比色，波长570 nm，利用酶联免疫检测仪，将各孔吸光度（A）值测定。

1.2.3 细胞凋亡率检测方法细胞凋亡检测利用AnnexinV-FITC/PI，利用胰酶消化培养24 h后不同浓度的各孔中的细胞，洗涤液为磷酸缓冲液，洗涤次数2次，细胞混匀采用AnnexinV-FITC/PI与缓冲液进行，并记录细胞数量，细胞浓度调整为1×104/mL，将AnnexinV-FITC溶液5μL、PI溶液10μL分别加入到100μL悬浮细胞中，室温下，进行15 min孵育，避免光照，将磷酸缓冲液混匀细胞400μL加入，数据应用流式细胞仪检测。

1.3 统计学方法采用SPSS18.0统计分析，计数资料利用χ2检验，P＜0.05表明差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 内膜细胞培养结果由体外培养结果可知，30例患者中，成功培养在位内膜细胞29例，成功率96.7%；成功培养异位内膜细胞24例，成功率80.0%。

2.2 在位、异位内膜细胞生长率受性腺激素释放激素激动剂影响情况由细胞增殖活性检测结果可知，性腺激素释放激素激动剂浓度越高、培养时间越长时，细胞生长率越低。见表1。

表1 在位、异位内膜细胞生长率受性腺激素释放激素激动剂影响情况（%）

2.3 在位、异位内膜细胞凋亡率受性腺激素释放激素激动剂影响情况由细胞凋亡率检测结果可知，性腺激素释放激素激动剂浓度为100 ng/mL时，在位、异位细胞凋亡率均低于浓度为200ng/mL时，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 在位、异位内膜细胞凋亡率受性腺激素释放激素激动剂影响情况（%）

3 讨论

近年来，人们的生活方式发生了比较大的改变，由此提高了子宫内膜异位症的发病率。子宫内膜异位症多见于育龄期女性，症状表现为痛经、性交痛、不孕等，对患者身体健康及生活质量产生比较大的影响。临床治疗子宫内膜异位症时，多给予患者手术治疗，可将病灶组织有效的清除，并解除盆腔粘连，但深层浸润病灶无法清除，导致残留病灶组织，提高了术后复发率，影响患者术后妊娠[2]。

随着子宫内膜异位症治疗水平的提升，临床中开始较为广泛的应用性腺激素释放激素激动剂，取得了良好的治疗效果。性腺激素释放激素激动剂在多种激素依赖性疾病中均有较好的疗效，通常认为，促性腺激素释放激素受体在此种药物的作用下受到调节，从而显著降低促性腺激素以及雌激素水平，发挥间接性的疗效[3]。近年研究显示，除了下丘脑一垂体轴外，病变组织以及正常组织中也有促性腺激素释放受体的表达。

细胞凋亡中，凋亡刺激信号作用于有核细胞中，将细胞内的死亡机制启动，促使细胞发生程序性的变性及坏死。子宫内膜细胞的凋亡可自发性进行，说明内膜组织的结构及功能正常，当患者患有子宫内膜异位症时，内膜组织的结构及功能受到影响发生异常，从而影响内膜细胞的自发性凋亡，造成患者病情进展[4]。研究发现，子宫内膜异位症患者内膜中的各个调控蛋白发生变化时，在位内膜细胞的凋亡特性也会发生相应的改变[5]。子宫内膜细胞处于增生期时，会增加Bel-2蛋白表达，与正常子宫内膜细胞相比，Bel-2/bax蛋白比值更高，提高了内膜细胞抵抗凋亡刺激信号的能力，降低内膜细胞凋亡率；内膜细胞处于分泌期时，尽管会降低Bel-2蛋白表达，而且不会明显提高Bax蛋白，但与正常分泌期内膜细胞相比，Bel-2/bax蛋白比值依然比较高，从而抑制细胞凋亡[6]。经由本研究的结果可知，子宫内膜异位症患者在位内膜细胞及异位内膜细胞的凋亡率均会受到性腺激素释放激素激动剂的影响，而且性腺激素释放激素激动剂的浓度越高时，细胞凋亡率越高，这说明，性腺激素释放激素激动剂的浓度与子宫内膜异位症在位及异位细胞凋亡率之间成正比。综上所述，子宫内膜异位症患者在位、异位内膜细胞增殖活性随着性腺激素释放激素激动剂浓度及培育时间的增加而降低，细胞凋亡率则随之升高，表示子宫内膜细胞凋亡与性腺激素释放激素激动剂之间关系密切，临床治疗子宫内膜异位症患者时，可给予患者促性腺激素释放激素激动剂药物，以提升治疗效果。

[1]王小霞，康佳丽，邵雪飞，等.GnRHa对子宫腺肌病在位内膜细胞凋亡及VEGF分泌的影响[J].细胞与分子免疫学杂志，2012，28（1）：72-75.

[2]王丽.子宫内膜异位症不孕患者腹腔镜术后应用促性腺激素释放激素激动剂对妊娠影响研究[J].现代诊断与治疗，2014，25（10）：2226-2227.

[3]佟玉.促性腺激素释放激素激动剂对子宫内膜异位症不孕患者远期妊娠率的影响[J].中国现代药物应用，2016，10（4）：187-188.

[4]余莎，谢梅青.GnRH-a对内异症在位子宫内膜细胞HOXA10表达的影响[J].海南医学院学报，2016，22（3）：225-228.

[5]黄凤英，王焕萍，伍媚，等.GnRHⅡ与GnRHⅠa对子宫内膜异位症患者离体间质细胞增殖抑制的影响[J].中南大学学报(医学版)，2011，36（6）：554-558.

[6]洪湘兰.GnRHa对子宫内膜异位症术后的疗效观察[J].当代医学，2012，18（36）：54-55.