史晨婕，郝利华，白 瑞 ，郑明学，苏文雪，张 黎，席 柔，贡 鑫，苏晓晴，张李琦

(1.山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801 ； 2.太原市动物园，山西太原030009)

过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对NDV和IBDV的杀灭试验

史晨婕1，郝利华2，白 瑞1，郑明学1，苏文雪1，张 黎1，席 柔1，贡 鑫1，苏晓晴1，张李琦1

(1.山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801 ； 2.太原市动物园，山西太原030009)

探讨过氧乙酸戊二醛复方消毒剂杀灭新城疫病毒(NDV)和传染性囊病病毒(IBDV)的效果，为鸡病毒性传染病的防治提供依据。分别采用鸡胚接种法、血凝试验和悬浮杀灭试验测定过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对NDV和IBDV的杀灭效果。过氧乙酸戊二醛复方消毒剂灭活NDV、IBDV的有效浓度均为0.04%，最快有效时间分别为10 min和30 min。过氧乙酸戊二醛复方消毒剂可有效杀灭NDV和IBDV。在有效杀灭浓度范围内，随浓度的增高和作用时间的延长对NDV和IBDV的灭活效果增强。

过氧乙酸戊二醛复方消毒剂 ； 新城疫病毒 ； 传染性囊病病毒

过氧乙酸戊二醛复方消毒剂是山西农业大学兽医病理实验室研制的对禽流感病毒(AIV)、大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、禽多杀性巴氏杆菌(C48-1)、溶血性链球菌C型、蜡样杆菌(8008)的杀菌作用迅速、高效、长效、抗干扰的复方消毒剂，但该消毒剂对新城疫病毒、传染性囊病病毒的杀灭效果尚不明确，为探讨该消毒剂的适用范围，在实践中得到合理应用，本试验依据《兽用消毒剂鉴定技术规范》[1]及《消毒技术规范》(2002版)[2]对过氧乙酸戊二醛复方消毒剂杀灭新城疫病毒(NDV)和传染性囊病病毒(IBDV)的效果进行研究。

新城疫病毒(NDV)是ssRNA病毒，有囊膜，为双层结构膜，由宿主细胞外膜的脂类与病毒糖蛋白结合衍生而来[3]。高富红等[4]研究表明，戊二醛苯扎溴铵溶液1 600倍稀释作用5 min可杀灭NDV。徐继英等[5]研究表明，复合亚氯酸钠粉1∶3 000倍稀释时，作用5 min 可100%杀灭NDV。

鸡传染性囊病病毒(IBDV)为双RNA病毒科、禽双RNA病毒属[6]。IBDV无囊膜，仅由核酸和衣壳组成。高富红等[7]研究指出，戊二醛苯扎溴铵溶液100倍稀释作用60 min可有效杀灭IBDV。

消毒剂对NDV和IBDV的杀灭作用均可用鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞进行测定[8]。本试验采用鸡胚为试验动物，通过观察接种NDV后鸡胚死亡情况及培养结束后鸡胚尿囊液HA滴度来反应是否有NDV存活，以及观察接种IBDV后鸡胚死亡情况及鸡胚有无典型病变来判定病毒灭活效果。

1 材料与方法

1.1 材料 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(主要含过氧乙酸、过氧化氢和戊二醛)，山西农业大学病理实验室研制。鸡新城疫病毒LaSota株、鸡传染性囊病病毒B87株，中国兽医药品监察所。10日龄SPF鸡胚，山西省隆克尔生物制药有限公司。

1.2 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂杀灭NDV效果试验

1.2.1 1%鸡红细胞悬液的制备 采集青年公鸡的血液，灭菌PBS清洗，2 000 r/min离心5 min，吸弃上清液和表面的白细胞，漂洗3次后收集红细胞，吸取1 mL红细胞加入9 mL PBS，即配成10%鸡红细胞，置于4 ℃冰箱备用(不超过2周)[9]。

1.2.2 NDV的EID50的测定 采用鸡胚接种法和血凝试验测定鸡胚尿囊液的HA滴度[10]，并按Karber方法计算新城疫病毒的EID50。用不同梯度新城疫病毒稀释液为控制变量，同时设立正常鸡胚对照组和PBS对照组。

1.2.3 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂加中和剂后对鸡胚的影响 用不同浓度的复方消毒剂加中和剂接种鸡胚，孵育，观察鸡胚死亡情况，以测定复方消毒剂加中和剂后对鸡胚的影响。

1.2.4 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对NDV的杀灭效果测定 采用悬浮杀灭试验评价复方消毒剂对新城疫病毒的杀灭效果。用不同浓度的消毒剂作为控制变量，同时设立接种病毒的阳性对照组和PBS对照组，并测定24～72 h内鸡胚尿囊液的HA滴度，计算各组病毒灭活率[11]。

试验重复3次，以病毒灭活率为100%的最大稀释倍数作为本消毒剂灭活NDV的有效浓度，以该浓度消毒剂灭活病毒的最短时间为最快有效时间。

1.3 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂杀灭IBDV效果试验

1.3.1 IBDV的ELD50的测定 采用鸡胚接种法测定IBDV的ELD50，并通过Karber方法计算，方法同1.2.2项。

1.3.2 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对IBDV的杀灭效果测定 采用悬浮杀灭试验评价复方消毒剂对IBDV的杀灭效果。用不同浓度的消毒剂作为控制变量，同时设立接种病毒的阳性对照组和PBS对照组，观察鸡胚并检查死胚有无出血、发育受阻等典型病变，若有，则为阳性[12-13]，计算各组病毒灭活率。

试验重复3次，以病毒灭活率为100%的最大稀释倍数作为本消毒剂灭活IBDV的有效浓度，以该浓度消毒剂灭活病毒的最短时间为最快有效时间。

2 结果

2.1 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂杀灭NDV效果试验

2.1.1 NDV的半数感染量(EID50)。

表1 各稀释度新城疫病毒接种鸡胚72 h后尿囊液HA情况

新城疫病毒尿囊液EID50=10-6.5/0.2 mL

2.1.2 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂加中和剂后对鸡胚的影响 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂加中和剂后，接种鸡胚，在24～72 h内鸡胚均无死亡，说明该消毒剂加中和剂后对鸡胚的生长无明显影响。

2.1.3 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对NDV的灭活效果 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂随稀释倍数的减小和作用时间的延长对NDV的灭活效果增高，该消毒剂灭活NDV的有效浓度为2 500倍稀释(浓度为0.04%)，其有效浓度对NDV的最快有效时间为 10 min。该消毒剂125倍稀释(浓度为0.8%)时，5 min 即可灭活100%的NDV，见表2。

表2 复方消毒剂对新城疫病毒的杀灭效果

2.2 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂杀灭IBDV效果

2.2.1 IBDV的ELD50测定 传染性囊病病毒尿囊液ELD50=10-3.9/0.2mL。

2.2.2 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对IBDV的杀灭效果 过氧乙酸戊二醛复方消毒剂随稀释倍数的减小和作用时间的延长对IBDV的灭活率增高，该消毒剂灭活IBDV的有效浓度为2 500倍稀释(浓度为0.04%)，其有效浓度对IBDV的最快有效时间为30 min。该消毒剂125倍稀释(浓度为0.8%)作用5 min，即可灭活100%的IBDV，见表4。

表3 传染性囊病病毒对鸡胚的致死情况

表4 复方消毒剂对传染性囊病病毒的杀灭效果

3 讨论与小结

过氧乙酸戊二醛复方消毒剂2 500倍以内稀释作用10 min以上或125倍以内稀释作用5 min以上，即可灭活100%的NDV；过氧乙酸戊二醛复方消毒剂2 500倍以内稀释作用30 min以上或125倍以内稀释作用5 min以上，即可灭活100%的IBDV。故过氧乙酸戊二醛复方消毒剂灭活NDV、IBDV的有效浓度均为0.04%(即2 500倍稀释)，最快有效时间分别为10 min和30 min。而且随着过氧乙酸戊二醛复方消毒剂浓度的增大和作用时间的延长，对NDV和IBDV的杀灭效果增强。

过氧乙酸先通过破坏囊膜、芽孢等通透性屏障，进而破坏和溶解核心，使DNA、RNA、蛋白质及DPA等物质破坏漏出，致使细胞、病毒等死亡。这种破坏主要是通过过氧乙酸释放的活性氧和酸的双重作用，其中活性氧起主导作用[14]。过氧化氢可使细胞膜渗透压和通透性改变，造成细胞的死亡，并且破坏胞内的细菌酶、氨基酸、蛋白质和DNA[15]。戊二醛主要通过凝固蛋白质、还原氨基酸和使蛋白质分子烷基化[16]。

通过对过氧乙酸戊二醛复方消毒剂杀灭NDV和IBDV的效果比较，发现本消毒剂杀灭IBDV时，其杀毒浓度和时间均有增大，是因为NDV为有囊膜的病毒，其囊膜中的主要成分为蛋白质。过氧乙酸戊二醛复方消毒剂的主要成分有过氧乙酸、过氧化氢和戊二醛，其作用机理是通过改变囊膜的渗透压和通透性，凝固蛋白质，进而破坏RNA，故而NDV对外界的抵抗力不强，对高温、紫外线和各种消毒剂均敏感[17]。而IBDV为无囊膜病毒，对外界环境抵抗力较强，对反复冻融、紫外线和超声波处理抵抗力也较强。对乙醚、氯仿、胰蛋白酶具有抵抗力。在酸性(pH值3)、中性或弱碱性条件下稳定，但在碱性(pH值12)条件下可失活，对许多化学物质不敏感[18]。故而，杀灭时间与浓度均有增大。此结果与高富红等[4,7]研究结果相一致。

[1] 中国人民共和国农业部，兽用消毒剂鉴定技术规范(试行)[S].1992.

[2] 卫生部.消毒技术规范[S].北京:2002.

[3] 张厚峰.种鸡非典型新城疫的诊断及病后不同时期种蛋品质及带毒情况检测分析[D].泰安:山东农业大学，2010.

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The inactivated efficacy of Acetic acid peroxide glutaraldehyde compound disinfectant to NDV and IBDV

SHI Chen-jie1, HAO Li-hua2, BAI Rui1, ZHENG Ming-xue1, SU Wen-xue1, ZHANG Li1, XI Rou1, GONG Xin1, SU Xiao-qing1, ZHANG Li-qi1

(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801 , China ; 2.Taiyuan Zoo, Taiyuan 030009 , China)

In order to provide the evidence for preventing chicken virus communicable diseases, we evaluated the effect of Acetic acid peroxide glutaraldehyde compound disinfectant on new castle disease virus(NDV) and infectious bursa disease virus(IBDV). Egg inoculation、hemagglutination test were used to and aqecous suspension test determine the effect of Acetic acid peroxide glutaraldehyde compound disinfectant on New castle disease virus and Infectious bursa disease virus. The effective concentration of disinfectant germicidal to kill NDV and IBDV was 1∶2500,10 min was the shortest time to kill NDV and 30 min was the shortest time to kill IBDV. the efficiency of inactivation of NDV and IBDV increased with the extension of function time and the increase of concentration.

Acetic acid peroxide glutaraldehyde compound disinfectant;New castle disease virus;Infectious bursa disease virus

ZHENG Ming-xue

2016-06-29

国家科技支撑计划项目(2007BAD56B06)；山西省现代农业鸡产业技术体系项目(2016-11-03)

史晨婕(1993-)，女，硕士，主要从事动物传染病诊断与防治研究，E-mail：317660260@qq.com

郑明学，E-mail：zhengmingxue288@163.com

S852.3

A

0529-6005(2017)04-0033-03