王娟萍，薛翼鹏，米瑞娟，姚敬明，吴 忻，孟 帆，樊振华 , 刘文俊，李红丽

(山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西太原030032)

山西地区猪流行性腹泻免疫情况调研

王娟萍，薛翼鹏，米瑞娟，姚敬明，吴 忻，孟 帆，樊振华 , 刘文俊，李红丽

(山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西太原030032)

猪流行性腹泻近年来严重危害养猪业发展，为了查明不同免疫程序对防控本病的效果，对山西各地市10个规模化种猪场母猪疫苗免疫情况、免疫程序及防控效果等进行了调研。结果显示，未免疫疫苗的猪群乳猪死亡率为61.70%，而母猪产前40 d和20 d后海穴注射胃流轮三联活苗，肌肉注射胃流二联灭活苗的猪群乳猪死亡率为10.26%；母猪产前40 d和20 d后海穴注射胃流轮三联活苗，3日龄乳猪后海穴注射胃流轮三联活苗的猪群乳猪死亡率为9.63%；应用PCR检测病原，PEDV、TGEV的阳性率分别为64.1%和2.56%；ELISA检测母猪乳汁中IgA抗体，阳性率为95%；检测母猪、乳猪、断奶仔猪血样中IgA抗体，阳性率为30%。通过本次调研与检测，筛选出两种较好的免疫程序，为猪场防控该类疫病提供参考。

猪流行性腹泻病毒 ； 免疫情况 ； 调研与检测

自2011年以来，全国各地区均有不同程度猪流行性腹泻病(PED)持续性暴发流行[1-4]，课题组在山西11个地市的30个规模化猪场的仔猪腹泻发病情况调研，并重点对10个猪场进行流行病学调查、病原检测及免疫防控情况统计分析，证明了山西猪群发生腹泻主要是由PEDV引起，并筛选出2种较好的免疫程序，可为猪场防控该类疫病提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 调研猪场与方法 课题组在山西11个地市10个规模化种猪场进行调研，重点对猪流行性腹泻疫苗免疫情况、2016年1～3月份母猪产子、乳猪病死情况等进行统计；采集病死猪小肠内容物、母猪及仔猪血样及母猪乳汁备检。

1.2 检测试剂盒 PEDV RT-PCR检测试剂盒和TGEV实时荧光RT-PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；PEDV IgA抗体ELISA检测试剂盒，韩国Bionote生产。

1.3 病原检测 取适量病料于1.5 mL灭菌EP管，加入1 mL PBS 8 000 r/min离心2 min，取100 μL上清，按照检测试剂盒说明书进行RNA提取。PEDV检测在普通PCR仪上进行扩增，1.5%琼脂糖凝胶电泳进行检测，TGEV检测用荧光定量PCR仪检测。

1.4 PEDV IgA抗体检测样品 取10 μL加入包被好的96孔酶标板中，按照检测试剂盒说明书进行操作，用酶标仪在450 nm波长下读值。

2 结果

2.1 山西各猪场防控腹泻类疫病的免疫程序 主要有：程序一：母猪每年9月初首免，3～4周后二免，经产母猪全年产前3～5周跟胎免疫，每头每次后海穴注射4 mL胃流二联灭活苗。程序二：每年秋冬季节母猪间隔3～4周免疫2次胃流二联灭活苗，仔猪不免疫。程序三：母猪产前40天、20天后海穴注射胃流三联活苗，同时肌肉注射胃流二联灭活苗。程序四：母猪产前40天、20天后海穴各注射一次胃流三联活苗，3日龄仔猪后海穴注射胃流三联活苗。未免疫：部分猪场不免疫该类疫苗。

2.2 不同免疫程序猪场母猪产仔与乳猪病死情况 见表1。

表1 不同免疫程序母猪产仔与哺乳仔猪病死情况统计

2.3 病原检测结果 PEDV检测结果见图1，阳性对照可见651 bp左右扩增条带，阴性对照无扩增条带，被检样品可见651 bp左右的扩增条带，鉴定为PEDV阳性；TGEV检测出现Ct值小于30的扩增曲线，为阳性。共39份病料，PEDV阳性率为64.1%；检测其中28份病料，TGEV阳性率为2.56%。

图1 部分样品PEDV RT-PCR检测结果

M：DNA Marker DL-2 000； P：阳性对照(Positive control)；N：阴性对照(Negative control)； 1-11：样品PCR扩增产物

2.4 PEDV IgA抗体检测结果 据试剂盒结果判断值=(0.35+阴性对照的平均OD值)，对结果的阴性、阳性进行判定，详见表2。

3 分析与讨论

2011年以来，课题组每年采集病死猪小肠内容物或粪便进行病原检测，证明了山西省猪腹泻的主要病原是PEDV，与我国近几年其他地区的检测结果相符[1-8]，也说明在中国PEDV仍是引起猪腹泻的最主要病原。

调查发现，未免疫该类疫苗的猪场乳猪病死率最高；采用免疫程序一、二的猪场，2014年之前乳猪较少腹泻，但2015年后突然腹泻导致病死率升高，这可能与PEDV毒株发生变异，导致毒力增强有关[6-8]；采用免疫程序三、四的猪场病死率最低，证明这两种免疫程序对控制猪腹泻有一定的效果，可为养猪者提供参考。同时应加强产房的饲养管理，产房温度保持在22 ℃～24 ℃、湿度保持在50%～70%，严格实施隔离消毒措施、乳猪尽快吃上初乳等饲养管理措施非常必要。

PEDV感染机体后，首先侵害小肠集合淋巴结，随后进入小肠黏膜层上皮细胞，因此肠道黏膜免疫中sIgA抗体尤为重要[9]。通过肌肉或后海穴注射疫苗，尤其是弱毒活苗，可刺激母猪产生大量IgA抗体分泌到乳汁中形成sIgA抗体，为乳猪提供被动免疫保护[10]。本次乳汁sIgA抗体检测结果OD值偏高，尤其PEDV感染阳性猪场更高，证明ELISA试剂盒检测乳汁中PEDV IgA抗体能客观地反映猪群中该病毒的免疫情况和感染情况。相比检测血清中抗体，检测母猪乳汁中PEDV IgA抗体的特异性和敏感性更高，因此监测产后母猪乳汁中PEDV IgA抗体含量，是检验该类疫苗免疫有效与否的新方案[11-12]。但采用ELISA试剂盒检测血清或乳汁中PEDV IgA抗体，至今还不能区分疫苗免疫还是野毒感染，需继续加强该方面的研究。

表2 乳汁和血清IgA抗体检测结果

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Investigation of immune state of porcine epidemic diarrhea in Shanxi

WANG Juan-ping，XUE Yi-peng，MI Rui-juan ，YAO Jing-ming， WU Xin，MENG Fan ，FAN Zhen-hua，LIU Wen-jun，LI Hong-li

(Institution of Animal Husbandry and Veterinary, Shanxi Academy of AgriculturalSciences, Taiyuan 030032， China)

In recent years, the porcine epidemic diarrhea (PED) has caused huge economic losses to the swine industry．In order to ascertain the prevention-control effect of different immune procedures against PED Virus(PEDV), our research group investigated the vaccine type, immune procedure and prevention-control effect of 10 scale pig breeding farms in different cities Shanxi province . The results showed that the mortality rate of sucking piglets in non-vaccine immunity groups was 61.70%. However, and it was 9.63% when the pregnant sows immunized with three-combined live vaccine of the transmissible gastroenteritis virus(TGEV), PEDV and porcine rotavirus via houhai acupoint at 40d and 20d before farrowing, respectively, and the same immune method was used for 3d-sucking peglets. We detected pathogens by PCR, and the positive rate of PEDV and TGEV was 64.1% and 2.56%, respectively. The positive rates of IgA antibody against PEDV from colostrum of sows and sera of sows，sucking piglets and postweaning pigs were 95% and 30% detected by Elisa. Based on the statistical analysis of these results, we selected out the two best immune procedures to provide references for the prevention and control against PEDV in pig farms.

PEDV; Immune state; Investigation and detection

XUE Yi-peng

2016-07-07

山西省科技攻关项目(20140311020-2-A,20150311018-3)

王娟萍(1958-)，女，研究员，本科，从事畜禽传染病的研究，E-mail：jcbyjs@sohu.com

薛翼鹏，E-mail：xyp295337768@163.com

S855.3

A

0529-6005(2017)04-0017-03