马明兰

摘 要：本文用高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中格列本脲和盐酸小檗碱的含量。通过利用PLPLC法来沉淀待测物标准曲线，从而分析消糖灵类药物的中药成分与西药成份。该方法简单，准确，重现性及稳定性好，能够用于消糖灵胶囊的质量控制。

关键词：HPLC；消糖灵胶囊；格列本脲；盐酸小檗碱；含量检测

中图分类号：R284.1 文献标识码：A

消糖灵胶囊药的处方由人参、天花粉、黄连、丹参、杜仲、黄芪、枸杞子、五味子、沙苑子、白芍、知母、优降糖（格列本脲）十二味药组成作用。临床用于治疗糖尿病，具有益气养阴，清热泻火，益肾缩尿之功效。该药是一种中西复方药物，格列本脲为本处方中的西药成分，其化学名称为：N-[2-[4-[[[（环己氨基）羰基]氨基]磺酰基]苯基]乙基]-2-甲氧基-5-氯苯甲酰胺，分子式：C23H28ClN3O5S 分子量：494.01，具有降血糖的功效。黄连素是一种重要的生物碱，是我国应用很久的一种中药材，有很好的杀菌作用，主要化学成分是盐酸小檗碱，具有显著的抗心力衰竭、抗心律失常、降低胆固醇、抗制血管平滑肌增殖、改善胰岛素抵抗、抗血小板、抗炎等等作用。格列本脲和盐酸小檗碱和药品的功能密切相关，都可用高效液相色谱法进行含量的测定。

本文通过高相液相色谱法测定消糖灵胶囊中的格列本脲和盐酸小檗碱含量，方法简便快速，重现性及稳定性均较好，通过利用HPLC法构建待测物质的标准曲线，以此来测定样品待测物质的含量，并考察分析仪器精密度，样品稳定性，加样回收率四项指标。目的在于分析消糖灵该类药物的中药成分和西药成分的含量和新药的筛选提供新的思路和途径，以达到为该类药物做出更好的质量控制。

1 實验材料和仪器

1.1 材料及试剂

格列本脲对照品（上海源叶生物科技有限公司），盐酸小檗碱对照品（上海源叶生物科技有限公），消糖灵胶囊（0.4g/粒，辽宁绿丹药业有限公司），甲醇、乙腈为色谱纯，醋酸溶液，蒸馏水，进样针，进样瓶0.45um过滤纸（水系、有机系），烧杯，玻璃棒，容量瓶。

1.2 实验仪器

电子分析天平（型号：BT 224S；厂家：北京赛多利斯仪器系统有限公司）、高效液相色谱仪（型号：SPD-15；厂家：日本岛津）、pH计（型号：PHS-3B；厂家：上海雷磁仪器有限公司 ）、超声波清洗仪（型号：KQ-100DB；厂家：昆山市超声仪器有限公司）

2 实验方法

2.1 格列本脲的含量测定

2.1.1 格列本脲色谱条件

色谱柱：C18柱；流动相：甲醇—水溶液（70：30）；检测波长：274nm；流速1ml.min-1；柱温：室温；理论塔板数按格列本脲计算应不低于2000。

2.1.2 格列本脲对照品及供试品溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取格列本脲对照品5mg，加流动相甲醇溶解并于10ml容量瓶中定容，制成格列本脲对照品溶液，即得浓度为0.5mg/ml对照液。

供试品溶液的制备：取样品适量去胶囊壳，研细，混匀，精密称取 2.0000g，加流动相甲醇溶解并于50ml容量瓶中定容，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量至刻度线，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

2.1.3 标准曲线的绘制

精密吸取上述格列本脲对照品溶液（0.5mg.ml-1），精密量取1ml、2ml、3ml、4 ml、5 ml，分别置10ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，各进样20?l，按上述色谱条件测定峰面积，峰面积y为纵坐标，格列本脲进样量x（ml）为横坐标绘制标准曲线，并计算回归方程

2.2 盐酸小檗碱的含量测定

2.2.1 盐酸小檗碱色谱条件

色谱柱： C18柱；流动相：甲醇—水溶液（加入适量醋酸）（75：25）；检测波长为350nm，流速1ml.min-1；柱温：35℃；理论塔板数按盐酸小檗碱计算应不低于3000。

2.2.2 盐酸小檗碱对照品及供试品溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品10mg，加流动相甲醇溶解并于25ml容量瓶中定容，制成盐酸小檗碱对照品溶液，浓度为0.4mg/ml，即得。

供试品溶液的制备：取样品适量去胶囊壳，研细，混匀，精密称取 2.0000g，加流动相甲醇溶解并于50ml容量瓶中定容，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量至刻度线，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

2.2.3 标准曲线的绘制

精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液 （0.4mg.ml-1），精密量取1ml、2ml、3ml、4 ml、5 ml，分别置10ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，各进样20?l，按上述色谱条件测定峰面积，峰面积y为纵坐标，盐酸小檗碱进样量x（ml）为横坐标绘制标准曲线，并计算回归方程。

3 实验结果

3.1 格列本脲测定结果

3.1.1 格列本脲对照品不同浓度的图谱及供试品的图谱（见图1，2，3，4，5，6）

由图谱可知，格列本脲的保留时间tR=8.24min

3.1.2 格列本脲标准曲线（见表1）

3.1.3 格列本脲的含量测定结果

利用前述的方法进行处理，对测定的峰面积数据进行整理分析与格列本脲的标准曲线进行比对计算，供试品溶液的格列本脲的峰面积为A=345587，得到待测样品的含量数据。

由标准曲线方程 ：

3.2 盐酸小檗碱测定结果

3.2.1 盐酸小檗碱对照品不同浓度的图谱及供试品的图谱（见图7，8，9，10，11，12）

由图谱可知，盐酸小檗碱的保留时间

3.2.2 盐酸小檗碱标准曲线（见表2）

3.2.3 盐酸小檗碱的含量测定

（1）利用前述的方法进行处理，对测定的峰面积数据进行整理分析与盐酸小檗碱的标准曲线进行比对计算，供试品溶液中的盐酸小檗碱的峰面积A=12304836，得到待测样品的含量数据。

4 方法学考察

4.1 格列本脲的方法学考察

4.1.1 精密度试验

精密吸取上述供试品溶液，注入液相色谱仪，重复进样5次，格列本脲的峰面积RSD为3.4%，结果表明所用的仪器精密度良好。

结论：所得到的精密度RSD%=3.4%≤5%，故符合要求。

4.1.2 稳定性试验

精密吸取供试品溶液20 ?l，依正文方法测定，测定格列本脲的峰面积的RSD为2.2% ，表明在24小时内样品中格列本脲的含量基本稳定。 结论：样品在24h内稳定，RSD%=2.2%。

4.1.3 回收率试验

精密称取已知含量的供试品 6份，分别精密加入格列本脲对照品适量，依法测定，计算回收率。结论：经吸光度检测，本实验的加样回收率结果平均值为101.0%，RSD%为2.3%。而药典规定的范围为95%～105%，均符合限量规定。

4.2 盐酸小檗碱的方法学考察

4.2.1 精密度试验

结论：所得到的精密度RSD%=1.83%，故符合要求。

4.2.2 稳定性试验

精密吸取供試品溶液20 ?l，依正文方法测定，测定盐酸小檗碱的峰面积的RSD为 ，表明在24小时内样品中盐酸小檗碱的含量基本稳定。

结论：样品在24h内稳定，RSD%=2.4%。

4.2.3 回收率试验

精密称取已知含量的供试品6份，分别精密加入盐酸小檗碱对照品适量，依法测定，计算回收率。

结论：经吸光度检测，本实验的加样回收率结果平均值为100.3%，RSD%为1.02%。而药典规定的范围为95%～105%，均符合限量规定

5 结论

本实验采用高效液相对消糖灵胶囊中格列本脲和盐酸小檗碱的定量分析，格列本脲标准品R=0.9993，盐酸小檗碱标准品R=0.9997，证明两种物质的线性关系良好。

运用标准曲线法和外标法两种方法测定，计算得到消糖灵胶囊中格列本脲的含量为2.2mg/g，盐酸小檗碱的含量为3.6mg/g。

在线性回归分析中，格列本脲测定中，仪器精密度准确RSD%=3.4%，8h内稳定性良好RSD%=2.2%，加样回收率平均值101.03%且RSD%=2.3%；盐酸小檗碱测定中，仪器精密度准确RSD%=1.8%，8h内稳定性良好RSD%=2.4%，加样回收率平均值100.3%且RSD%=1.02%

综合得出，以上数据较为准确，符合药典各项限量规定。

参考文献：

[1] 曾水云，杨四海.HPLC测定消糖灵胶囊中芍药苷的含量[J].中成药，2004 （12）.

[2] 张继安，张薇.HPLC法测定消糖灵胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].辽宁中医志，2007 （4）.

[3] 张玉娟，田景振，付英杰等.HPLC测定消糖灵胶囊中格列本脲的含量[J].食品与药品，2005 （4）.

（本文审稿 戴定兰）