柏明见，冯 璟，冯珍如，李俊霞，闫存玲，梁国威*

(1.航天中心医院 检验科，北京100049；2.北京大学第一医院，北京100034)

*通讯作者

血清及粪便髓过氧化物酶测定对溃疡性结肠炎患者辅助诊断与疾病活动性监测中的应用价值

柏明见1，冯 璟1，冯珍如2，李俊霞2，闫存玲2，梁国威1*

(1.航天中心医院 检验科，北京100049；2.北京大学第一医院，北京100034)

目的 探讨血清及粪便髓过氧化物酶对溃疡性结肠炎患者辅助诊断及其监测疾病活动性的应用价值。方法 选取2010年1月到2012年4月就诊于北京大学第一医院消化内科的溃疡性结肠炎患者45例(男30例，女15例)，根据Mayo评分系统将UC患者分为缓解期组(18例)和活动期组(27例)。对照组25例(男15例，女10例)。搜集两组外周血及粪便标本，采用ELISA法检测血清及粪便中髓过氧化物酶含量。两组间比较采用Mann-whitneyU检验，双侧P<0.05为差异有统计学意义。结果 UC组与对照组中血清MPO (U/L)分别为[113.78(71.31-174.53) vs.62.66(43.39-113.39)],Z=-2.488,P=0.013；活动期与非活动期UC患者血清MPO分别为[102.67(70.52-176.7 0) vs.116.91(68.16-174.04)],Z=-0.255,P=0.799。UC组与对照组粪便MPO分别为[926.47(495.34-1264.07) vs.557.86 (377.84-930.43)],Z=-2.507,P=0.012；活动期与非活动期UC患者粪便MPO分别为[1231.24(725.42-1550.77) vs.692.58(285.98-886.17)],Z=-3.197,P=0.001。结论 血清及粪便MPO检测对UC的辅助诊断有一定应用价值，粪便MPO同时可用于UC患者的疾病活动性评估。

髓过氧化物酶；溃疡性结肠炎

(ChinJLabDiagn,2017,21:0413)

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的主要表型之一[1]，随着诊断技术的不断发展，临床上确诊的UC患者越来越多。UC病情呈活动期与非活动期相交替，给患者带来较大的痛苦，准确评估UC患者疾病活动性是指导准确治疗的重要依据。红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和血清C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)在评估UC疾病活动性中应用较多，是指南中推荐使用的检测指标[2]，但特异性欠佳。肠镜及组织病理学检查是UC确诊及疾病活动性评价的金标准[3]，而内镜检查具有耗时长、创伤大等缺点。近年来发现粪便中有多种生物标志物对UC的诊断及疾病活动性检测有较好的应用价值[4]。

因此，针对UC需要一些新的生物标志物，该类生物标志物对UC的诊断及疾病活动性检测均有较好的应用价值。本研究对UC患者血清及粪便髓过氧化物进行检测，探讨其对UC诊断及疾病活动性评估中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 对象

本研究共纳入UC患者共45例，均选自北京大学第一医院消化内科就诊的患者，研究时间自2010年1月至2012年4月，中位年龄(岁)为39(31-51)，男30例，女15例，纳入标准符合2010年世界胃肠病学组织关于IBD诊断和治疗的实践指南[2]，采用Mayo评分系统将UC患者分为缓解期组(18例)和活动期组(27例)。

选取无消化道症状、便常规及便潜血检查均阴性，经内镜检查排除UC诊断，排除有严重心、肺、肾脏疾患的健康体检者25例作为对照组，中位年龄(岁)为45(33-62)，男15例，女10例。研究经北京大学第一医院伦理委员会批准同意，所有参与本研究患者及对照组均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有血标本收集时间与肠镜检查间隔时间均不超过3天，ESR检测于采血后0.5小时内完成，血清CPR检测于采血当天3小时内完成，剩余血清冻存于-80℃冰箱内，对血清MPO进行统一检测。用一次性无菌容器留取患者及对照组随机粪便标本5.0-10.0 g，置于4℃冰箱保存，3 d内提取粪便内活性成份，冻存于-80℃冰箱内，对粪便MPO进行统一检测。

1.2.2 试剂与仪器 人髓过氧化物酶试剂盒(America RB company)，测量单位用U/L表示；CRP测量(IMMAGE 800，Becman-Coulter)单位用mg/L表示。加样器(规格为200、100、10 μl)、全自动洗板机(Wellwash Versa)，-80℃冰箱(型号MZMY-BX-012 709)，酶标仪(Phomo,MBY201)，恒温箱，微量振荡仪，一次性无菌标本盒、冻存管，封闭式采血管(黄管及黑管)，普通离心机(型号BECKMAN COULTER Allegra X-22R)、高速低温离心机(型号SIGMA 3k15)，分析天平(型号Sartorius BP211D)。

1.2.3 粪便提取方法 称取粪便标本0.5-1.0 g，按1∶4(重量∶体积)比例与提取缓冲液稀释，充分混匀2 min，吸取1.0 ml于EP管中高速离心(20 800 g，30 min，4℃)，吸取上清液50 μl，用提取缓冲液稀释至1.0 ml后充分混匀，-80℃冰箱保存。

提取缓冲液成分[5]：磷酸盐缓冲液缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS )，pH=7.4、10 mmol/L乙二胺四乙酸二钠、0.2%十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、20%甘油、0.05%吐温20、1%小牛血清白蛋白。

1.2.4 检测方法 血清及粪便MPO检测采用ELISA法，ESR检测采用魏氏法，血清CRP检测采用速率散射比浊法。

1.3 统计学分析

采用SPSS13.0软件进行统计学分析，采用MedCalc软件绘制ROC曲线。两组间率的比较采用卡方检验。经检验数据不符合正态分布，连续变量采用中位数(median)及四分位数间距表示(inter-quartile range,IR)，两组间比较采用Mann-whitney U检验。双侧P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 UC组和对照组基线资料、ESR、血清CRP、血清及粪便MPO水平结果

UC组与对照组血清MPO中水平分别为[113.78(71.31-174.53) vs.62.66(43.39-113.39)],Z=-2.488,P=0.013；UC组与对照组粪便MPO水平分别为[926.47(495.34-1264.07) vs.557.86 (377.84-930.43)],Z=-2.507,P=0.012，具体见表1。

表1 UC组和对照组基线资料、ESR、血清CRP及血清MPO水平结果

注：a：中位数及四分位数间距(IR)，b:N (%)

2.2 活动期与非活动期UC患者ESR、血清CRP、血清及粪便MPO水平比较，见表2。

活动期与非活动期UC患者血清MPO分别为[102.67(70.52-176.7 0) vs.116.91(68.16-174.04)],Z=-0.255,P=0.799；活动期与非活动期UC患者粪便MPO分别为[1231.24 (725.42-1550.77) vs.692.58(285.98-886.17)],Z=-3.197,P=0.001，具体见表2。

表2 活动期与非活动期UC患者ESR、血清CRP、血清及粪便MPO水平比较

2.3 ESR、血清CRP、血清及粪便MPO区分活动期与非活动期UC能力比较(表3及图1)

粪便MPO与ESR、血清CRP、血清MPO对区分UC活动期与非活动期的能力相比，其统计值分别为Z=0.703(P=0.482)、Z=0.804(P=0.422)、Z=2.087(P=0.037)。

表3 ESR、血清CRP、血清及粪便MPO区分活动期与非活动期UC患者曲线下面积

图1 ESR、血清CRP、血清及粪便MPO区分活动期与非活动期UC能力比较

3 讨论

本研究结果如下，血清MPO水平在UC患者及对照组中差异有统计学意义，但在活动期与非活动期UC患者中差异无统计学意义；粪便MPO水平在UC患者及对照组中差异有统计学意义，在非活动期与活动期UC患者中差异亦有统计学意义。UC患者血清及粪便MPO水平明显高于对照组，活动期UC患者粪便MPO水平明显高于非活动期患者。

近年来，发展中国家UC的发病率逐年上升[6]，病情呈缓解与复发相交替，难以治愈，准确评估疾病的活动性至关重要[1]。研究发现，在肠道发生炎症的时候，肠黏膜屏障的通透性往往会发生改变，使中性粒细胞能够穿过肠黏膜屏障进入肠腔[7]，但中性粒细胞进入肠腔后极易遭到破坏，难以检测，而中性粒细胞破碎后可释放出较多物质，如钙卫蛋白、乳铁蛋白、MPO等。既往针对UC患者的研究中，以粪便钙卫蛋白最多，粪便钙卫蛋白不仅能够辅助UC诊断，而且能够较好的反映UC疾病活动性，甚至能够预测UC的复发[8]。粪便生物标记物的检测在UC患者中的应用价值受到了越来越多的重视[9]，而其他中性粒细胞来源的生物标志物研究相对较少，Masoodi I等[10]研究发现粪便MPO不仅能够反映UC患者的疾病活动性而且能够监测其治疗效果。

MPO存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，在炎症、感染等刺激条件下，中性粒细胞和单核细胞聚集并释放MPO。MPO在粪便提取液中较为稳定[5]，易于保存和检测。本研究发现UC患者血清及粪便MPO在UC患者中明显高于对照组，考虑二者与血清CRP及其他粪便生物标志物一样，对UC的辅助诊断均有一定的应用价值。

本研究发现，活动期UC患者粪便MPO明显高于非活动期患者，提示粪髓过氧化物酶在区分UC活动与否具有较好的应用价值，其水平高低能较好的反映UC的疾病活动性，与国外研究结果一致[10]。但血清MPO检测对于区分活动期与非活动期UC患者并无应用价值，考虑由于粪便与肠黏膜直接接触，检测粪便中的MPO能够更好的反映出肠道局部的病变情况，而血清MPO水平检测仅能反映出机体全身的状况，推测血清MPO检测对判断UC患者活动特异性较低可能由以上原因造成。因此，考虑粪便MPO检测在判断UC疾病活动性方面优于血清MPO。本研究中，与ESR及血清CRP相比，粪便MPO对UC活动期与非活动期的区分能力差异并无统计学意义，考虑粪便MPO与指南中推荐的ESR、血清CRP一样，均能较好的反映出UC患者的疾病活动性。

综上所述，与ESR、血清CRP常用指标相比，血清及粪便MPO检测对UC的辅助诊断有一定应用价值。在区分UC疾病活动性方面，粪便MPO优于血清MPO，粪便MPO可作为准确、无创的生物标记物，能较好的用于辅助UC疾病活动性评估。

[1]Vilela EG,Torres HO,Martins FP,et al.Evaluation of inflammatory activity in Crohn's disease and ulcerative colitis[J].World J Gastroentero,2012,18:872.

[2]Bernstein CN,Fried M,Krabshuis JH,et al.World Gastroenterology Organization Practice Guidelines for the diagnosis and management of IBD in 2010[J].Inflamm Bowel Dis,2010,16:112.

[3]Eugene C.Ulcerative colitis practice guidelines in adults [J].Clin Res Hepatol Gastroenterol,2012,36:107.

[4]Iskandar HN,Ciorba MA.Biomarkers in inflammatory bowel disease:current practices and recent advances [J].Transl Res,2012,159:313.

[5]Peterson CG,Eklund E,Taha Y,et al.A new method for the quantification of neutrophil and eosinophil cationic proteins in feces:establishment of normal levels and clinical application in patients with inflammatory bowel disease [J].Am J Gastroenterol,2002,97:1755.

[6]El Fassi D,Nielsen CH.Ulcerative colitis [J].N Engl J Med,2012,366:862.

[7]Wagner M,Peterson CG,Ridefelt P,et al.Fecal markers of inflammation used as surrogate markers for treatment outcome in relapsing inflammatory bowel disease[J].World J Gastroenterol,2008,14:5584.

[8]Lasson A,Simren M,Stotzer PO,et al.Fecal calprotectin levels predict the clinical course in patients with new onset of ulcerative colitis [J].Inflamm Bowel Dis,2013,19:576.

[9]Sipponen T.Diagnostics and prognostics of inflammatory bowel disease with fecal neutrophil-derived biomarkers calprotectin and lactoferrin [J].Dig Dis,2013,31:336.

[10]Masoodi I,Kochhar R,Dutta U,et al.Evaluation of fecal myeloperoxidase as a biomarker of disease activity and severity in ulcerative colitis[J].Dig Dis Sci,2012,57:1336.

Serum and feces myeloperoxidase determination for auxiliary diagnosis and monitoring of disease activity in patients with ulcerative colitis

BAIMing-jian,FENGJing,FENGZhen-ru,etal.

(AerospaceCentralHospital,Beijing100049,China)

Objective To investigate the value of serum and feces myeloperoxidase(MPO)in assist diagnosis and disease activity of ulcerative colitis (UC).Methods 45 patients with UC and 25 control subjects were enrolled in present study.UC patients were divide into active(n=27) and inactive (n=18) group according to Mayo score.MPO was detected by ELISA.Mann-whitney U test was used for comparison of different groups.Results serum MPO between UC group and controls were [113.78(71.31-174.53) vs.62.66(43.39-113.39)],Z=-2.488,P=0.013,respectively;serum MPO between active and inactive group were[102.67(70.52-176.70) vs.116.91(68.16-174.04)],Z=-0.255,P=0.799,respectively.Fecal MPO between UC group and controls were[926.47(495.34-1264.07) vs.557.86 (377.84-930.43)],Z=-2.507,P=0.012,respectively；fecal MPO between active and inactive group were[1231.24(725.42-1550.77) vs.692.58(285.98-886.17)],Z=-3.197,P=0.001,respectively.Conclusion Serum and feces MPO was useful for auxiliary diagnosis of UC,feces MPO was a promising biomarker in monitoring disease activity of UC.

myeloperoxidase;ulcerative colitis

1007-4287(2017)03-0413-04

R574.62

A

2016-01-17)