劳 哲，江恩源

（梧州市疾病预防控制中心,广西 梧州 543002）

试论联用在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱测定毒鼠强的效果

劳 哲，江恩源

（梧州市疾病预防控制中心,广西 梧州 543002）

目的：研究联用在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱（GPC-GC-MS/MS）测定液、固体样品中毒鼠强含量的效果。方法：将毒鼠强标准系列溶液中的6个特征离子（m/z 240、m/z 212、m/z 132、m/z121、m/z132、m/z149）作为母离子，使用3V～45V的电压对其进行碰撞处理，经产物离子优化后得到离子丰度较高的 6个离子对（212→132； 212→92；240→212；240→149；132→105；212→200）。将离子对丰度最高的离子对（212→132）作为定量离子对，将其余5个离子对作为定性离子对设为多反应监测（MRM）参数。标准液与样品同时进行提取、纯化、浓缩、定容，然后进行测定。结果：标准曲线为: y=215232.7x+31 x+31，r=0.9996，回收率为：98.7%，RSD =4.5%，液体样品的检出限为0.00001mg/L，固体样品的检出限为0.00002mg/kg。结论：联用在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱测定毒鼠强标准系列溶液具有高效、准确性好、检出限低的特点。

毒鼠强；准系列溶液；在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱；多反应监测

目前，临床上测定毒鼠强的方法主要有GC[1]、GCMS[2]和GC-MS/MS[3]。不过，用上述方法测定毒鼠强的效果均不理想。在本文中，笔者联用在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱对毒鼠强的标准系列溶液进行测定，取得了很好的效果。研究发现[4]，用在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱对毒鼠强的标准系列溶液进行测定，可直接注入GPC，而且经过GPC在线分离脂肪和色素后，可直接将纯化后的待测液经大体积进样器（PTV）注入到GC-MS/MS中进行测定，从而大大缩短检测的时间，降低MS受到污染的几率。同时，本次实验采用多反应监测模式（MRM）中的高选择性准确定量法[5]对毒鼠强的标准系列溶液及样品进行测定，并将检测的过程与选择性离子检测模式（SIM）的定量方法[6]进行了比较和分析。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱联用仪GPC-GCMS-TQ8030（由日本岛津公司生产）；GPC色谱柱：Shodex-EV-200（2.0mmID*150mm，5μm）；GC毛细管色谱柱；Rxi-5 Sil MS（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；N1氮吹仪（产自上海屹尧）；毒鼠强标准溶液，浓度为：1.0mg /ml（由中国预防医学科学院中毒控制中心提供，批号为∶ 201605号）；乙酸乙酯（色谱纯）；无水硫酸钠（分析纯）。

1.2 检测的条件

1.2.1 GPC的条件 A泵流速为：0.10mL/min；B泵流速为：0.10mL/min；A、B泵的流动相为：丙酮为：环己烷=3∶7；氘灯波长为：210nm；检测池的温度为：40℃；氟胺氰菊酯的保留时间为：3.36min。

1.2.2 GC的条件 载气为∶高纯氦气;柱流速为∶2.10ml /min;大体积进样器（PTV）进样口升温的程序为：初始温度为120℃（保持0 min），以100℃ /min 的速度升温至180℃（保持4.40 min），以﹣49.8 ℃ /min的速度降温至120 ℃（保持18.80 min）；柱温箱升温的程序为：初始温度为82 ℃（保持5.00min），以8℃ /min的速度升温至180 ℃（保持0 min），以50℃ /min 的速度升温至300 ℃（保持5.35 min）；进样量为∶10.0μl，不进行分流进样[7]。

1.2.3 进行选择性离子检测（SIM）的条件 EI 源的温度为∶200 ℃; MS连接口的温度为：300℃；溶剂延迟的时间为∶ 9.70 min;检测器的电压为：0.1kV；间隔为∶0.30 amu；扫描的速度为∶ 2000 ms；阈值为∶1000。SCAN的质量范围为∶m/z 86～m/z 600。SIM的离子设定为∶ 选取特征离子中相对离子对丰度最高的m/z 240作为定量离子， 将m/z 212、m/z 132、m/z121、m/z132、m/z149作为定性离子。

1.2.4 多反应监测模式（MRM）的条件 检测器的电压为：0.10kV；间隔为∶0.30 amu；阈值为∶1000。碰撞气为：高纯氩气；经优化产物离子后得到离子丰度较高的 6个离子对与相应的最佳碰撞电压为：212→132，CE9V；212→92，CE12V； 240→212，CE12V； 240→149，CE9V；132→105，CE6V；212→200，CE3V。将相对离子对丰度最高的离子对（212→132）作为定量离子对，将其余5个离子对（212→92；240→212；240→149；132→105；212→200）作为定性离子对。

1.3 检测方法

1.3.1 毒鼠强标准系列溶液的配置 分别配制毒鼠强标准系列溶液，其浓度分别为∶ 0.000 1μg/ml、0.000 5μg/ml、0.001μg/ml、0.005μg/ml、0.01μg/ml、0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.50μg/ml、1.00μg/ml。

1.3.2 样品的处理 取固体样品5 g、液体样品（包括血液样品）10 ml置于50ml的塑料离心管中，然后加入乙酸乙酯10 ml，进行漩涡振荡提取 3 min，进行5000 r/min的离心处理5 min，再取出上层的乙酸乙酯提取液。用加有无水硫酸钠的滤纸将提取液过滤到另一支50ml的塑料离心管中，并再次对其进行提取（步骤同上）。完成提取后，用2 ml的乙酸乙酯冲洗滤纸，并将冲洗液与滤出液合并，放入氮吹仪中（设定水温为45℃）浓缩至约5 ml。用注射器吸取浓缩液，将其推过抽滤头（0.22μm滤膜），最后将此滤出液用氮吹仪（设定水温45℃）浓缩至近干，用乙酸乙酯将其准确定容至1.00mL[8]。

2 结果

2.1 SIM的测定结果

将标准系列与样品以相同的条件经过GPC装置分别进样10μL，得到数据图谱后用定量离子的峰面积y和对应的浓度x（μg/L）绘制标准曲线，把样品数据图谱中定量离子的峰面积、稀释体积、取样量输入工作站，经计算后得出样品中的毒鼠强浓度。当毒鼠强标准溶液浓度的范围为0.000 1μg/ml～1.00μg/ml时，其响应值与浓度呈正相关，色谱峰的保留时间为18.161 min，标准曲线为y=136594.2x+5926，r=0.998 2，回收率为92.5%。液体样品的检出限为0.0005mg/L，固体样品的检出限为0.001mg/kg。

2.2 MRM的测定结果

当毒鼠强标准溶液浓度的范围为0.000 1μg/ml～1.00μg/ml时，其响应值与浓度呈正相关，色谱峰的保留时间为18.170 min，标准曲线为∶ y=215232.7x+3169，r=0.999 1，回收率为98.1%。液体样品的检出限为0.00001mg/L，固体样品的检出限为0.00002mg/kg。实验结果证明MRM方法比SIM方法的检出限低了50倍，检测的灵敏度更高。

2.3 MRM测定的精密度和样品加标回收率实验的结果

取9份阳性洗胃水（每份10mL）。对其中6 份进行平行样和精密度实验，RSD =4.5%；将其中3份分别加入标准溶液25μl、50 μl、100 μl（标准溶液的浓度为1. 00μg /ml），然后进行漩涡振荡 1 min。按照1.3.2中的方法对样品进行处理，按照1.2.4中的方法对样品进行测定。结果显示，三份样品的回收率分别为96.2%、103.1%、97.9%。

3 讨论

在线凝胶渗透色谱（GPC）技术是测定高分子材料分子量及分布特点最快、最有效的方法[9]。该技术可根据不同分子的尺寸，用GPC色谱柱将脂肪和色素从毒鼠强中分离出来，同时用线流路切换阀将毒鼠强的分子捕集在捕集环路中，再注入GC-MS/MS进行测定。将在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱联合使用检测毒鼠强标准系列溶液，大大缩短了检测的用时，省去了很多前期处理的复杂步骤，而且减少了对样品和MS的污染，因此十分符合临床上快速、准确检测液、固体样品中毒鼠强含量的要求。

总之，联用在线凝胶渗透色谱-气相色谱-三重四极杆质谱测定毒鼠强标准系列溶液具有快速、高效、灵敏度高、准确性好、检出限低的特点。此方法值得推广使用。

[1] 孙磊龙,杨志华. 气相色谱法测定中毒样品中的毒鼠强[J]. 海峡预防医学杂志,2011,04（3）:47-48.

[2] 梁晓聪,王玮,郭蓉,等.气相色谱-质谱法同时测定食物中毒样品中氟乙酰胺与毒鼠强[J]. 中国卫生检验杂志,2015,20（8）:3457-3459+3462.

[3] 符展明,鲍建国,金米聪,等. GC/MS/MS法测定中毒样品中毒鼠强的研究[J]. 中国卫生检验杂志,2003,03（6）:285-286.

[4] 赵琳,张晓波,任红波,等.在线GPC-气相色谱-质谱联用测定玉米中莠去津、乙草胺和2,4-滴丁酯残留[J]. 农药科学与管理,2013,05（5）:35-39.

[5] 陈小萍,赵道辉,林国斌,等. 微量毒鼠强GC/PFPD和GC/MS/MS分析条件研究[J]. 海峡预防医学杂志,2003,06（12）:11-13.

[6] 张学,朱建民,朱福源,等. 固相萃取-气相色谱-质谱法同时测定复杂基质中的氟乙酰胺和毒鼠强[J]. 中国卫生检验杂志,2015,11（4）:1743-1745+1753.

[7] 沈平,彭进,谢朝梅,等. GC-MS同时检测食品中多种常见毒物的方法研究[J]. 中国卫生检验杂志,2011,04（9）:781-784+787.

[8] 陈蓓,刘华良,荣维广,等. 气相色谱-质谱法同时检测食物中的氟乙酰胺与毒鼠强方法研究[J]. 中国食品卫生杂志,2012,06（6）:539-542.

[9] 何智慧,练文柳,蒋腊梅,等. GPC-气相色谱质谱法测定卷烟主流烟气中的苯并[a]芘[J]. 湖南文理学院学报(自然科学版),2009,01（4）:42-46.

Study on detection method for tetramine intoxication by on line GPC-GC-MS/MS

Lao Zhe，Jiang Enyuan
（Center for Disease Control and Prevention of Wu Zhou，Guangxi Wuzhou，543002）

∶ Objective To study the method for determination of tetramine intoxication by on line GPC-GC-MS/MS. Methods With the standard solution to tetramine 6 characteristic ions (m/z 240, m/z 212, m/z 132, m/z121, m/z132, m/z149) as parent ion , use 3V～45V voltage for collision, then got ion abundance high 6 ion pairs(212→132; 212→92; 240→212; 240→149; 132→105; 212→200). After produced ion were optimized, set the highest ion pair (212→132) as the quantitative ion pair, set remained 5 ion pairs as qualitative ion pairs, set MSM parameter. Then to do extraction, purity, concentration, constant volume for standard liquid and sample in the same time, after that ,and do determination.Results Standard curve∶ y=215232.7x 31 x 31, r=0.999 6, recovery rate of 98.7%, RSD =4.5%, The detection limit of the liquid sample was 0.00001 mg/L, and the detection limit of the solid sample was 0.000 02 mg/kg. Conclusion The method for determination of tetramine intoxication by on line GPC-GC-MS/MS effective and exact, had low detection limit.

∶ tetramine; gel permeation chromatography-Gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometer (GPC-GC-MS/MS); multiple reaction monitoring(MRM);

R657.7

B

2095-7629-（2017）7-0020-02

劳哲，男，1977年出生，汉族，学历为本科，副主任技师，研究方向为疾病预防与控制。E-mail:laozhe2000@163.com

梧州市公共突发事件处理专项经费项目资助