倪晓蓓，王珊珊，徐志鹏，陈林君，张宁媛，孙海翔

(南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心，南京 210008)

父方年龄及精子来源对ICSI周期临床结局的影响

倪晓蓓，王珊珊，徐志鹏，陈林君，张宁媛，孙海翔*

(南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心，南京 210008)

目的 分析ICSI周期中父方年龄及精子来源与临床结局的关系。 方法 回顾性分析2012年1月至2015年12月在本中心进行ICSI且女方年龄在30～34岁的患者，总例数为489例。将患者按是否临床妊娠分组，分析父方年龄(<30岁、30～40岁、>40岁)和精子来源(精液精子、附睾精子、睾丸精子)对于临床妊娠结局的影响。 结果 临床妊娠组有348例，未临床妊娠组有141例；临床妊娠组与未妊娠组一般情况如女方年龄、基础FSH、体重指数、内膜厚度、可利用胚胎率等均无统计学差异(P>0.05)；以是否临床妊娠作为因变量，精子来源和父方年龄作为自变量，进行回归分析，结果显示精子来源与临床妊娠无统计学相关性(P>0.05)，而父方年龄与临床妊娠相关(P<0.05)；不同父方年龄组的一般情况均无统计学差异(P>0.05)，而随着父方年龄的增长，种植率和临床妊娠率呈现显著下降的趋势(P<0.05)。 结论 在ICSI周期中，随着父方年龄的增长，ICSI的临床妊娠率下降，而精子来源并不影响临床结局。

ICSI； 父方年龄； 精子来源； 临床妊娠率

(JReprodMed2017，26(1)：29-33)

卵胞浆内单精子注射(ICSI)不同于常规的体外受精，主要适用于严重的少弱畸精子症患者、不可逆的梗阻性无精子患者、排除遗传缺陷疾病所致生精功能障碍患者、免疫性不孕、常规体外受精失败、精子顶体异常或需行植入前胚胎遗传学检查的患者，它通过有创的手段将人为挑选的精子注入卵母细胞，规避了自然受精过程中卵母细胞对精子的选择[1]。实施ICSI 的原因、精子来源、处理过程等情况各不相同，因而其术后的受精状况、胚胎发育、妊娠结局等受多方面因素的影响[2-3]。接受ICSI周期治疗的患者精液来源通常有3种：精液精子、附睾精子和睾丸精子，那么究竟何种来源的精子有更好的临床结局呢？目前还存在争议[4-6]。母源性因素与辅助生殖技术的相关性已广泛达成共识，而父源性因素比如父亲年龄等对临床结局的影响还有待进一步研究。本文旨在探寻精子来源、父方年龄与ICSI结局的相关性，以期为临床实践提供有效的参考。

资料和方法

一、研究对象

回顾性分析2012年1月至2015年12月在本院生殖医学中心行ICSI周期的患者。

纳入/排除标准：在本中心行 ICSI 助孕，女方年龄30～34岁且为常规促排新鲜周期移植分裂胚者；夫妻双方染色体核型分析正常；排除中重度子宫内膜异位症、子宫畸形、子宫多发性息肉患者。

共纳入489例病例。根据临床妊娠与否分组，分析男方年龄(<30岁、30～40岁、>40岁)和精子来源(精液精子、附睾精子、睾丸精子)对ICSI周期临床结局的影响。

二、治疗回顾

1促排卵治疗：用本中心常规促排卵方案进行卵巢刺激，B超监测卵泡生长发育，待主导卵泡直径达18～20 mm当晚注射HCG 250 μg(默克雪兰诺，德国)或HCG 10 000 U (丽珠制药)，间隔 36 h左右在B超引导下严格按照无菌要求穿刺取卵。

2.精液处理：(1)精液精子：密度梯度离心后用RINSE(Vitrolife，瑞典)洗涤，IVF(Vitrolife，瑞典)上游备用；(2)附睾精子：将抽吸的附睾液用RINSE(Vitrolife，瑞典)洗涤，离心取沉渣涂皿备用；(3)睾丸精子：在显微镜下将睾丸组织的曲精小管分离研磨，用RINSE(Vitrolife，瑞典)洗涤，离心取沉渣涂皿备用。

3.ICSI：按本中心方案[7]。将卵丘卵母细胞复合物经培养液充分洗涤后置 IVF序贯培养液(Vitrolife，瑞典)中预培养3 h，然后用透明质酸酶消化颗粒细胞，将去除颗粒细胞的卵母细胞置IVF培养液中预培养1 h，精子制动后行ICSI术。

4.受精/卵裂的观察和移植胚胎的筛选：受精后置于G1序贯培养液(Vitrolife，瑞典)中培养，16～18 h观察原核形成；取卵后48 h观察卵裂情况，于72 h选择优质胚胎移植。

5.妊娠结局判定：胚胎移植后14 d检测血HCG阳性，4～6周B超检查见孕囊视为临床妊娠。

三、观察指标

患者一般资料包括年龄、体重指数、基础内分泌水平、移植日内膜厚度；

ICSI相关指标及妊娠结局：可利用胚胎率(移植胚胎数+冷冻胚胎数)/总胚胎数、植入率(植入胚胎数/移植胚胎数)、临床妊娠率(临床妊娠人数/移植人数)、多胎率(临床多胎妊娠人数/临床妊娠人数)、流产率(流产人数/临床妊娠人数)、异位妊娠率(异位妊娠人数/临床妊娠人数)。

四、统计学分析

结 果

一、患者一般资料

将患者按是否临床妊娠分为两组，其中未临床妊娠组有141例，临床妊娠组有348例。两组患者一般情况如女方年龄、基础FSH、体重指数、内膜厚度、可利用胚胎率等均无统计学差异(P>0.05)(表1)。

组别例数女方年龄(岁)基础FSH(U/L)体重指数(kg/m2)内膜厚度(mm)可利用胚胎率(%)未临床妊娠组1413199±121700±1972250±3411101±2094703临床妊娠组3483179±135732±2492242±2941127±2024674

二、精子来源、父方年龄与临床妊娠的关系

以是否临床妊娠作为因变量，精子来源(精液精子、附睾精子和睾丸精子)和父方年龄(<30岁、30～40岁、>40岁)作为自变量，进行回归分析。结果显示，精子来源与临床妊娠无统计学相关性(P>0.05)，而父方年龄与临床妊娠相关(P<0.05)(表2)。

三、不同父方年龄移植组患者一般资料与临床妊娠结局比较

1.不同父方年龄组的一般资料比较：回归分析显示了父方年龄与临床妊娠结局相关(P<0.05)，为了排除这种关联是由于不同父方年龄组的的基础值差异所致，因此按父方年龄分组作了患者一般资料对比，发现不同父方年龄组的一般资料均无统计学差异(P>0.05)(表3)，说明父方年龄与临床妊娠结局的确存在相关性。

2.不同父方年龄组的临床结局指标比较：随着父方年龄的增长，种植率和临床妊娠率呈现下降的趋势(P<0.05)(表4)。

表2 精子来源、父方年龄对ICSI周期临床妊娠影响的Logistic分析

相关因素BSEWalsdfPExp(B)EXP(B)的95%CI下限上限精子来源-01770126197110160083806551073父方年龄06060247602210014183411302976

父方年龄组例数女方年龄(岁)基础FSH(U/L)体重指数(kg/m2)内膜厚度(mm)可利用胚胎率(%)<30岁703119±109735±1762265±3451144±170456230～40岁3943191±131717±2462249±3051114±2064718>40岁253264±125784±2002110±2151144±2594722

表4 不同父方年龄组患者临床妊娠结局比较[n(%)]

父方年龄组例数植入率∗临床妊娠率∗多胎率流产率异位妊娠率<30岁7082/139(5900)58/70(8286)24/58(4138)4/58(690)1/58(172)30～40岁394377/763(4941)275/394(6980)103/275(3745)28/275(1018)5/275(182)>40岁2519/47(4043)15/25(6000)8/15(5333)0/15(0)0/15(0)

注：不同年龄组间比较，*P<0.05

讨 论

ICSI技术的诞生是辅助生殖技术领域的里程碑[1， 8]，该技术利用精液精子、附睾精子或睾丸精子使成熟卵母细胞正常受精、形成优质胚胎并获得临床妊娠和分娩。精子的质量与卵母细胞的受精、早期胚胎发育及后期的发育潜能密切相关，而不同来源的精子其成熟度、形态、质量等存在差异，那么究竟何种来源的精子有更好的临床结局呢？男性生殖力是否随着年龄增加而降低？现有的文献报道还存有争议，值得进一步研究。

有文献提示男性的Leydig细胞(主要生成睾酮的细胞)功能呈年龄相关性[9-10]，在30岁时开始衰减[11]，同时伴有其他生殖相关的功能障碍[11-13]。此外，随着男性年龄的增长对生殖细胞和组织也产生不利的影响，无论是睾丸体积，还是体内的激素[10， 14]，这种变化在>40岁的男性中尤为显著，伴随着生育力的明显下降[15-16]。在健康男性中，30岁和40岁是两个节点，我们依据健康男性中这一自然生理趋势进行了相关分组，选择了3个年龄梯度：<30岁、30～40岁、>40岁。结果显示，父方年龄与临床妊娠结局有统计学相关性，随着父方年龄的增高，ICSI周期的植入率和临床妊娠率呈显著下降趋势。

有文献报道附睾来源的精子有更高的活产率[4]。Meijerink等[5]发现附睾来源的精子与睾丸精子相比会增加出生儿的缺陷。也有文献提示睾丸精子和精液精子对ICSI结局的影响无统计学差异[6， 17-18]；附睾来源精子和睾丸来源精子对ICSI的临床妊娠率、种植率、流产率均无显著影响[19]。我们的结果提示不同来源的精子对临床结局无显著影响，ICSI可应用不同来源的精子。

随着生命周期的延长、婚姻模式的改变，再婚重组家庭、晚婚晚育家庭使得生育孩子的年龄呈现增长的趋势，不孕不育患者中高龄患者也越发增多。Ford等[20]发现随着男方年龄的增长，配偶的怀孕几率呈明显的下降趋势。为了研究父方年龄对辅助生殖技术的影响，Frattarelli等[21]利用供卵的体外受精研究，发现随着男方年龄的增加，囊胚形成率、妊娠率均下降。Hazout等[22]研究表明，反复ICSI失败周期与精子DNA损伤相关联，而父方年龄与精子DNA损伤相关[23]，随着年龄的增长精子的DNA甲基化水平升高[24]，同时使得精子氧化应激增加[25-27]，从而加剧DNA的损伤[26]。我们通过对本中心2012～2015年接受ICSI治疗并实施新鲜周期移植的患者进行回顾性研究发现，随着父方年龄的增长，植入率和临床妊娠率均呈现下降的趋势，提示我们男方年龄对精子质量的影响不可忽视，在行ICSI治疗时， 应关注男方的年龄，对于适应证患者应尽早行ICSI治疗，改善妊娠结局。

综上所述， ICSI可应用不同来源的精子，鉴于男方年龄对精子质量的影响，在严格掌握ICSI指征的基础上对于适应证患者应尽早行ICSI治疗。但是由于本研究是小样本的回顾性研究，此外有关精子来源、父方年龄与成功生育后代的随访数据还有待完善，结果还存在局限性，有待后续研究完善。

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[编辑：罗宏志]

Effect of paternal age and sperm source on outcomes of ICSI

NI Xiao-bei， WANG Shan-shan， XU Zhi-peng， CHEN Lin-jun， ZHANG Ning-yuan， SUN Hai-xiang*

CenterofReproductiveMedicine，DrumTowerHospitalAffiliatedtoNanjingUniversitySchoolofMedicine，Nanjing210008

Objective： To investigate the effect of paternal age and sperm source on outcomes of ICSI.Methods： The data of 489 ICSI cycles in our center from January 2012 to December 2015 were respectively analyzed. The maternal age was between 30-34 years. The patients were grouped according to whether clinical pregnancy happened in order to analyze the effect of the paternal age (<30 years， 30 to 40 years，>40 years) and sperm source (semen sperm， epididymal sperm， testicular sperm) on clinical outcomes.Results： There were 348 patients in pregnancy group and 141 patients in non-pregnancy group. There were no significant differences in age， body mass index， baseline hormone levels， endometrial thickness and available embryo rate between the two groups (P>0.05). Then regression analysis was performed using the clinical pregnancy as the dependent variable and sperm source and paternal age as independent variables. The results of regression analysis showed that sperm source and clinical pregnancy had no significant correlation (P>0.05)， while the paternal age was significantly associated with clinical pregnancy (P<0.05).Conclusions： In the ICSI cycle， the clinical pregnancy rate decreases along with increasing paternal age， while sperm source does not affect clinical outcomes.

ICSI； Paternal age； Sperm source； Clinical outcomes

10.3969/j.issn.1004-3845.2017.01.006

2016-06-09；

2016-07-11

倪晓蓓，女，江苏南通人，硕士，研究实习员，生殖医学专业.(*