张　嘉,陈美珍,林　旋,温福利,陈仁锋,胡玲英,王寿昆(.福建农林大学动物科学学院,福建福州50002;2.福建省动物药物工程实验室,福建福州50002;.南京军区福州总医院比较医学科,福建福州50025)

福建省某肉兔场球虫感染情况调查

张嘉1,2,陈美珍1,2,林旋1,2,温福利3,陈仁锋1,胡玲英1,王寿昆1,2
(1.福建农林大学动物科学学院,福建福州350002;2.福建省动物药物工程实验室,福建福州350002;3.南京军区福州总医院比较医学科,福建福州350025)

为预防兔球虫病提供依据,采集福州郊区某肉兔场不同日龄肉兔粪便样本587份,采用饱和食盐水漂浮法和麦克马斯特计数法对该场兔球虫感染率、OPG值、球虫卵囊在兔群中的分布、球虫种类及优势种等进行调查分析.调查结果显示,该场兔球虫平均感染率为85.86%,平均OPG值为11 865,个体OPG最高达466 000;OPG值在兔群中呈负二项分布.调查共检测出13种艾美耳球虫,均为混合感染,以纳格浦尔艾美耳球虫(E.nagpurensis)、穿孔艾美耳球虫(E.perforans)、大型艾美耳球虫(E.magna)和盲肠艾美耳球虫(E.coecicola)为优势种.

兔球虫病;感染率;OPG值;麦克马斯特计数法

1　材料与方法

1.1采样采集对象为福州市某肉兔场,共采集粪便样本587份,标明编号,品种、日龄、用药情况.

1.2卵囊检测称量2 g粪样,加入60 mL饱和食盐水,捣匀,经120目网筛过滤,用胶头滴管吸取滤液充满两片计数小室(每片计数室中的容积1 cmX1 cmX0.15 cm=0.15 cm3),将计数板置于显微镜下观察,两片计数室内的平均卵囊乘以200,即为每克粪样总卵囊数[OPG=(n1+n2)/2X 200].

1.3卵囊收集挑取各日龄粪样于装有饱和食盐水的烧杯中,捣匀,过滤.将过滤后的粪汁静置10～15 min,取漂浮液上1/3,收集到的粪汁4 000 r/min离心5 min,去上清,反复2次,沉淀即为球虫卵囊.

1.4卵囊培养与形态学观察标记各日龄阶段卵囊,加入2.5%重铬酸钾液,28℃、120 r/min的摇床中培养2～3 d,待孢子化率达95%以上时,于油镜下观察拍照.

1.5数据处理及分析以χ2检验不同日龄兔球虫感染频数差异显著性,OPG值的比较采用对数化后进行方差分析;以负二项分布和泊松分布拟合球虫卵囊在肉兔群体中的分布,运用曲线方程拟合肉兔日龄与感染率和OPG值的相关与回归分析,得出最优回归方程.

2　结果与分析

2.1不同日龄肉兔球虫感染率、OPG值比较该兔场肉兔球虫总感染率为89.79%;其中,40日龄、50日龄和60日龄肉兔的球虫感染率显著高于20日龄、30日龄、75日龄和90日龄肉兔(P<0.05);日龄与感染率呈曲线相关(P<0.01),最优回归方程为3次曲线方程Y=-88.342+10.004X-0.167X2+0.001X3,R2= 0.978(Y:感染率,X:日龄)(表1、图1).

该兔场球虫平均OPG值为11 865,最大者达466 000;以40日龄肉兔的平均OPG值最高,其与50日龄肉兔之间、30日龄与60日龄之间球虫OPG值差异均不显著(P>0.05),但均高于20日龄、75日龄和90日龄肉兔(P<0.01);日龄与OPG值呈曲线相关(P<0.05),最优回归方程Y=66983.994+ 5456.703X-102.738X2+0.563X3,R2=0.960(Y:OPG值,X:日龄)(表1、图1).

2.2兔球虫种类与感染情况油镜下观察孢子化卵囊,检测出13种艾美耳球虫(见中插彩版图2);各日龄100个孢子化卵囊为1组,分别统计12组,得出穿孔、纳格浦尔、大型、盲肠艾美耳球虫为优势种.致病性较强的斯氏、松林、无残、肠型艾美耳球虫均有感染(见中插彩版图2).

表1　不同日龄兔球虫病感染情况

图1　福州郊区某兔场不同日龄肉兔球虫感染情况

20日龄以穿孔、纳格浦尔、大型、盲肠艾美耳球虫为优势种,其中以穿孔艾美耳球虫卵囊比例最高,达到24.15%;其余艾美耳球虫比例显著低于优势种.30、40、50日龄均以穿孔、纳格浦尔、大型艾美耳球虫为优势种,比例分别为23.42%、15.54%、11.26%以上;大型艾美耳球虫随着日龄增大比例逐渐下降;盲肠艾美耳球虫30日龄与20日龄比较出现显著下降趋势,于40日龄比例下降最低值,50日龄盲肠艾美耳球虫呈上升趋势;无残艾美耳球虫比例随着日龄增大而逐渐增大,于40日龄增大至最大值,50日龄呈现下降趋势;其余艾美耳球虫与20日龄比较未出现较大比例改变.60、75、90日龄均以穿孔、纳格浦尔、盲肠艾美耳球虫为优势种,卵囊比例分别为21.99%、13.43%、17.36%以上;大型艾美耳球虫卵囊比例在60～90日龄内随着日龄增大继续逐渐减小,并于90日龄下降至最低;盲肠艾美耳球虫60～90日龄比例显著高于30～50日龄,其于20日龄比例开始下降并于40日龄比例下降至最低值,后随着日龄增大比例逐渐增大,于90日龄比例最大;中型艾美耳球虫90日龄比例最高,显著高于20～ 75日龄;其余艾美耳球虫感染率均较稳定,比例较低(表2).

2.3球虫卵囊在闽侯某兔场肉兔群体中的分布类型兔群中球虫OPG值在5 000以下的比例为58.26%(342/587),OPG值大于70 000以上的比例为2.56%(15/587).以负二项分布和泊松分布分别拟合球虫卵囊在该兔群体中的分布,负二项分布的理论频数与实际频数接近,χ2值小于临界值,故服从负二项分布.说明兔群中球虫感染后的卵囊排泄量(OPG值),不是随机分布,也不是均匀分布,卵囊排泄量极大的个体较少,多数卵囊OPG值在5 000以下.

表2　肉兔球虫种类比例情况/%

表3　闽侯某兔场肉兔球虫卵囊OPG值的负二项分布和泊松分布拟合

3　讨论

本次调查结果显示,兔球虫病平均感染率为85.86%,平均OPG值为11 865,个体最高OPG达466 000,感染率与感染强度均很高,与全国其他地区报道相似,可见兔球虫疾病仍是养兔行业不容忽视的严重寄生虫疾病.通过对比最高感染率与最大OPG值发现,40日龄OPG值达到顶峰,10 d后感染率随之达到高峰,说明兔球虫卵囊排泄量直接影响兔球虫阳性率.OPG值从20～40日龄逐渐增大情况,可能是由于20日龄幼兔还未断奶,靠母源抗体,对兔球虫病具有一定的抵抗力,所以其感染强度处于最低,30日龄幼兔感染强度逐渐出现峰值,说明母源抗体在体内逐渐降低,感染强度继续逐渐增大,于40日龄OPG值达到高峰,由于断奶15 d,体内母源抗体消失,兔球虫发育完成一个周期所致,符合索勋等(1991)将其裂殖生殖划分为4代,13 d发现成熟配子体,15 d卵囊开始排出发育规律[10].

随着兔子日龄逐渐增大,所感染兔球虫优势种以及比例都发生相应的改变,穿孔艾美耳球虫与纳格浦尔艾美耳球虫为该肉兔场所共患优势种.致病力较强的大型艾美耳球虫为20～50日龄肉兔的球虫优势种,并由30日龄开始直到90日龄,感染比例随着日龄的增大呈现下降趋势,可能随着肉兔日龄增大,对致病力较强的大型艾美耳球虫免疫力逐渐增强有关,未断奶20日龄肉兔的大型艾美耳球虫的感染强度低于30日龄,可见母源抗体对致病力较强的大型艾美耳球虫起到一定抑制作用.盲肠艾美耳球虫为60～90日龄肉兔的球虫优势种,显著高于30～50日龄,可见盲肠艾美耳球虫对大日龄肉兔危害较大.致病力较强的无残艾美耳球虫在40～60日龄感染率出现高峰,可见无残艾美耳球虫对40～60日龄肉兔危害最大.其他致病力较强的斯氏艾美耳球虫、松林艾美耳球虫、肠型艾美耳球虫虽均有感染,但感染率较低,所以对兔球虫病的预防应将重点放在致病力较强的优势种上.

从卵囊OPG值在兔群中的分布情况看,约有兔群中60%的OPG值低于5 000,OPG值大于70 000的只占2.5%,说明多数兔子感染强度不高,感染强度高的只是少数,有利于寄生虫与宿主取得平衡,也有利于各自的种族延续.

[1]乔军,才学鹏,田广孚,等.兰州地区兔球虫种类调查[J].中国兽医杂志,2008,44(8):43.

[2]姜英,闫文朝,王天奇,等.河南省兔球虫感染情况及种类调查研究[J].中国农学通报,2013,29(17):47-51.

[3]J Qiao,Q L Meng,X P Cai,et al.Prevalence of Coccidiosis in Domestic Rabbits(Oryctolagus cuniculus)in Northwest China[J]. Medwell Journals,2012,11(4):517-520.

[4]Ming-Hsien Li,Hai-I Huang,Hong-Kean Ooi.Prevalence,infec⁃tivity and oocyst sporulation time of rabbit-coccidia in Taiwan[J]. Tropical Biomedicine,2010,27(3):424-429.

[5]宋鸿雁,朱顺星,刘春,等.江苏省实验兔球虫感染情况调查研究[J].动物医学进展,2012,33(12):88-91.

[6]樵星芳,陈建康,张云美,等.重庆市中药研究院实验兔球虫感染种类调查[J].四川动物,2012,31(6):20.

[7]崔平,方素芳,顾小龙,等.河北省部分地区兔球虫种类及感染率调查[J].西北农林学报,2010,19(7):21-24.

[8]孟庆玲,田广孚,闫鸿斌,等.新疆部分地区兔球虫种类调查研究[J].动物医学进展,2007,28(8):44-47.

[9]张龙现,殷佩云,林昆华.我国家兔球虫的研究现状[J].动物学杂志,1999,34(5):6.

[10]杨万莲,林昆华.北京地区家兔球虫种类的初步调查[J].黑龙江畜牧兽医,2003,8(33):2.

[11]李国清,林辉环,樊志红,等.广州地区兔球虫种类的初步调查[J].中国养兔杂志,1998(3):19.

[12]陈西宁,廖丽芳.广西家兔球虫病流行情况调查[J].中国兽医科技,1997,27(6):39.

TheInvestigation and Analysisof Rabbit Coccidial Infection in a Meat Rabbit Farmof Fujian Province

ZHANG Jia1,2,CHEN Mei-zhen1,2,LIN Xuan1,2,WEN Fu-li3,CHEN Ren-feng1,HU Ling-ying1,WANG Shou-kun1,2
(1.College of Animal Science,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350002,China; 2.Fujian Animal Pharmaceuticals Engineering Laboratory,Fuzhou 350002,China; 3.Fuzhou General Hospital of Nanjing Command,PLA,Fuzhou 350025,China)

In order to investigate the infection rate,OPG value and the oocysts distribution in rabbits,coccidial species per⁃centage and the dominant species in a rabbit farm,the flotation method of saturated saline solution and McMaster method were used and a total of 587 samples of fecal were collected from rabbits of different ages.The results showed that the total infection rate of coccidian was 85.86%and the average OPG value was 11 865,with the individual OPG up to 466 000,and the distribution pattern of OPG values was negative binonal distribution.We detected a total of 13 species of Eimeria,which were all form mixed infec⁃tions,and the dominant species were E.nagpurensis,E.perforans,E.magna and E.cociola.This study found out the coccidian spe⁃cies in rabbits in this farm and provided some information for the prevention and control of rabbit coccidiosis.

Rabbit coccidiosis;infection rate;OPG(oocysts per gramme of faeces);McMaster counting

WANG Kun-shou

S858.285.9

A

0529-6005(2016)06-0019-03

2015-01-28

福建省科技计划引导性项目(2015Y0075)

张嘉(1990-),男,硕士,从事兽医寄生虫方向研究,E-mai:zhangjia1310@163.com

王寿昆,E-mail:wsk138@163.com