解学龙，陈昌花

(1.四川省宜宾市第二人民医院检验科　644000；2.西南医科大学，四川泸州 646000)



·论著·

Coapresta2000全自动凝血分析仪检测CRP的可行性探索

解学龙1，陈昌花2

(1.四川省宜宾市第二人民医院检验科644000；2.西南医科大学，四川泸州 646000)

摘要:目的探索Coapresta2000全自动凝血分析仪检测C反应蛋白(CRP)的可行性。方法测定Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP时的准确度、线性、精密度、携带污染率及两仪器(Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪与Coapresta2000全自动凝血分析仪)的相关性。结果Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP时的3个批号试剂平均回收率为106.0%，准确度良好；批内精密度小于10%，日间精密度小于15%；携带污染率0.32%；Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪与Coapresta2000全自动凝血分析仪测定血浆CRP结果相关方程为Y=0.001 2X+0.489，相关指数r2=0.997 5，差异无统计学意义(P<0.01)，两仪器测定血浆标本CRP结果高度相关；Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP时的线性为0～200 mg/L。结论Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP时批内精密度较好，携带污染率低，与Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪高度相关，有进一步研究价值。

关键词:C反应蛋白;准确性;相关性;精密度;携带污染率

C反应蛋白(CRP)的检测方法有胶乳凝聚试验、金标法、化学发光、免疫比浊等，Coapresta2000自动凝血分析仪可以进行乳液比浊法等项目处理，为探索其检测CRP的可行性，本文对Coapresta2000全自动凝血分析仪检测CRP时的准确度、精密度、携带污染率及与Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪的相关性进行评价分析，现将结果报道如下。

1材料与方法

1.1试验仪器日本积水Coapresta2000全自动凝血分析仪、上海奥普Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪。

1.2试验试剂上海奥普生物医药有限公司提供的全程CRP定量检测试剂，包括试剂Ⅰ(0.05 mol/L，pH7.2磷酸缓冲盐溶液，表面活性剂)、试剂Ⅱ(CRP抗体包被的胶乳颗粒)、配套质控血浆及校准品。

1.3试验标本宜宾市第二人民医院临床患者乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血浆，上海奥普生物医药有限公司提供的全程CRP定量试剂校准品。

1.4试验原理CRP抗体共价结合在聚苯乙烯胶乳微球表面，人体标本抗体中的CRP与结合在聚苯乙烯微球上的CRP抗体相遇后，形成抗原抗体复合物，在特定的缓冲体系中形成浊度。这些免疫复合物会使反应液产生混浊，使得透光度减少，吸光度增加，其浊度高低反映了血清(血浆)标本中的CRP浓度，通过已知浓度的校准品比较可以得到测定的结果。

1.5试验方法

1.5.1准确度按EP5-A2文件[1]:取健康人EDTA-K2抗凝混合血浆分4份，在其中3份中按比例为1∶1分别加入浓度为10、50、200 mg/L CRP标准品，制成3个不同浓度的回收标本，另一份血浆为基础标本，采用上海奥普的CRP试剂在Coapresta2000上对基础标本进行2次重复测定，取其均值计算回收样品的CRP浓度，测定并根据公式“回收率=[新样品测定值-原样品测定值]/已知加样品浓度×100%”计算回收率，评估准确度。

1.5.2不精密度按照EP5-A2文件[1]方法：取2.5、50.0、200.0 mg/L的标准品，每天做2次测试，测试间隔时间不少于4 h，每次对同一样品测试2次，共做20 d。从中计算出精密度。

1.5.3线性范围参考EP6-A文件[2]评估线性范围：取浓度为0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、200.0 mg/L标准液各1份，每个浓度标准液做4次重复测定，对试验数据进行统计处理，评估其线性。

1.5.4Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪与Coapresta2000全自动凝血分析仪测定CRP的比对：随机取68份EDTA抗凝血血浆，分别于两仪器测得标本CRP值，做相关回归分析。

1.5.5携带污染率取高值和低值血清各1份，先测3次高值(H1、H2、H3),再测3次低值(L1、L2、L3)，根据公式计算携带污染率。

1.6统计学处理采用SPSS19.0进行统计学分析，相关性采用相关分析，两组数据相关分析差异检验采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1上海奥普全程CRP试剂在日本积水Coapresta 2000血凝仪上评估。

2.1.1准确度3个不同浓度EDTA-K2抗凝混合血浆分析测试2次，平均回收率为 104.5%、105.8%、107.8%，3个批号总平均回收率水平为 106.0%。准确度良好。

2.1.2不精密度批内精密度检测结果见表1。日间精密度检测结果见表2。

表1　Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP批内精密度结果

表2　Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP日间精密度结果

2.2线性范围线性范围 0～200 mg/L，线性回归方程：Y=3.56+2.84X-0.015X2+0.000 026X3。

2.3与参比仪器检测CRP的比对结果Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪的CRP检测结果为(35.71±3.97)mg/L，Coapresta2000全自动凝血分析仪的CRP检测结果为(35.03±3.92)mg/L，对两仪器测得的结果进行相关分析。结果表明，相关方程为Y=0.001 2X+0.489，相关指数r2=0.997 5，差异无统计学意义(P<0.01)，Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪与Coapresta2000全自动凝血分析仪测定血浆标本CRP结果高度相关。

2.4携带污染率Coapresta2000全自动凝血分析仪检测CRP携带污染率为0.32%。见表3。

表3　Coapresta2000全自动凝血分析仪检测CRP携带污染率结果(mg/L)

3讨论

CRP是一种急性时相反应蛋白，其在健康人体内水平甚微，当人处于创伤、心肌梗死、炎症、感染、外科手术、癌肿浸润等状态时，CRP浓度迅速上升，病变消退后又迅速下降致正常。其在鉴别细菌与病毒感染、病情监测、术后感染监控、抗菌药物疗效观察等时起重要作用，并在预测心血管疾病时起到一定作用[3]。早期，由于操作繁琐、灵敏度低、未能定量等方法学的局限性，CRP在临床中一直未能得到足够的重视和应用，大部分感染性疾病、组织损伤的诊断、疗效观察依赖于传统的白细胞计数与分类及红细胞沉降率等检查项目。直到80年代，随着试验方法和仪器的进步，急性时相反应蛋白尤其是CRP与急性感染、组织损伤等之间的关系越来越受到临床医师的重视[4-7]。CRP上升速度、幅度，持续时间与病情及组织损伤密切相关，且不受放疗、化疗、皮质激素等治疗手段的影响[8-9]，再加上其检测结果的定量化、简便化、微量化、快速化，使CRP在临床应用中的价值远远超过了传统的检查项目[10]。目前常用于CRP测定的方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫比浊法、金标法等[8-9]。免疫比浊法具有试剂稳定、标本用量少、准确度精密度高、操作简便快捷、可自动化、易推广等优点，此种方法在临床应用中越来越广泛[11-14]。

本文研究的仪器为Coapresta2000全自动凝血分析仪，该仪器由日本积水医疗株式会社生产，具有处理标本速度快、可随机追加标本、有急诊位置、可长期存储检测数据、可阅读二维码等优点，更重要的是，Coapresta2000全自动凝血分析仪有乳胶比浊的检测方法，并由此想到了其检测CRP的可行性。宜宾市第二人民医院检验科现有的CRP检测仪器为Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪，其使用的试剂为上海奥普生物医药有限公司提供的全程CRP定量检测试剂盒，检测方法为免疫增强透射比浊法，故利用该试剂盒及其配套校准品调试、定标Coapresta2000全自动凝血分析仪后，进行一系列仪器性能评价试验。

本次试验数据显示，Coapresta2000全自动凝血分析仪在检测血浆CRP浓度时，其批内精密度小于10%，日间精密度小于15%；其测定血浆CRP时与Ottoman全自动特定蛋白即时检测分析仪高度相关，相关指数r2=0.997 5；Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP时的线性为0～200 mg/L。然而1台仪器若要投入临床应用，除了本文研究的几个性能要优良外，还需要灵敏度高；噪声、误差小；分辨率、重复性好；响应迅速；稳定性好等。本研究结果显示，Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP时，不仅与宜宾市第二人民医院检验科测定CRP浓度的仪器Ottoman1000高度相关，还有较好的精密度及线性，故Coapresta2000测定血浆CRP具有进一步研究价值。

研究时发现，Coapresta2000全自动凝血分析仪在检测全血CRP时结果不理想，故本文只研究了其检测血浆CRP时的一些性能。全自动分析仪检测CRP时血浆用量较大，而一些采血困难的患者(如婴幼儿)，测定CRP时需要采集末梢血，若要投入使用，这是一个需要考虑的问题。分析其检测全血结果不理想可能原因，Coapresta2000为凝血分析仪虽有震荡混匀方式但无混匀的搅拌棒，在反应杯中加入全血后可能无法使红细胞充分溶解，从而使测定的全血CRP全血结果不稳定。

本文只研究了Coapresta2000全自动凝血分析仪检测血浆CRP的准确性、批内精密度、日间精密度、相关性、线性、携带污染率，还需要进一步研究其抗干扰能力等。

除此之外，在评价该仪器线性时，达到最大浓度200 mg/L后，仍然显示出良好的线性，思考该仪器检测血浆CRP线性时高值是否可以再高一些，是否可以通过增加已知浓度标本用量，来观察该仪器更高浓度的线性范围。

Coapresta2000全自动凝血分析仪是宜宾市第二人民医院检验科新引进的仪器，除了检测凝血相关项目外，正在探索开发其能检测的其他项目，CRP是其中1项。现目前研究表明，其检测CRP有进一步研究价值，继续研究后，若有投入临床检验使用的机会，即增加了1台CRP检测仪器，又可以作为检测CRP的备用仪器，仪器资源得到了充分利用。但由于该仪器没有检测CRP的配套试剂，还有许多没有被发现的缺点，为了保证其得到准确、稳定的结果，仍然需要进一步探讨。

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作者简介：解学龙,男，副主任技师，主要从事临床基础检验工作。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.021

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)13-1801-03

(收稿日期：2016-01-19修回日期：2016-03-30)

Study on feasibility of Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP

XIEXuelong1,CHENChanghua2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,YibinMunicipalSecondPeople′sHospital,Yibin,Sichuan644000,China;2.SouthwestMedicalUniversity,Luzhou,Sichuan646000,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the feasibility of the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting C-reactive protein(CRP).MethodsThe performance of the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP was analyzed,including accuracy,linearity,precision,carryover rate and the correlation between the Ottoman automatic special protein real time analyzer and the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer.ResultsThe men recovery rate of 3 batches of reagent by the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP for detecting plasma CRP was 106.0% with better accuracy;the within-run precision was less than 10% and the inter-day precision was less than 15%;the carryover rate was 0.32%;the related equation in the Ottoman automatic special protein real time analyzer and the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting plasma CRP was Y=0.001 2X+0.489,the correlation coefficient was r2=0.997 5,the difference was not statistically significant(P>0.05).The CRP results of plasma sample detected by these two instruments was highly correlative;the linearity in the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP was 0-200 mg/L.ConclusionThe Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP has better within-run precision,low carryover rate,high correlation with the Ottoman automatic special protein real time analyze,which has a value for further study.

Key words:C-reactive protein;accuracy;correlation;precision;carryover rate