杨笑琼,肖　翔,钟阳青,张达秀

(广东省东莞市塘厦医院检验科　523721)



·临床研究·

2 816例妇女宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒的检测结果分析

杨笑琼,肖翔,钟阳青,张达秀

(广东省东莞市塘厦医院检验科523721)

摘要:目的了解东莞地区妇女宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况和基因型分布特点。方法收集2014年1月至2015年10月该院就诊的妇女宫颈脱落细胞，进行HPV基因分型检测。采用深圳亚能公司生产的核酸提取试剂、聚合酶链反应(PCR)试剂和反向斑点杂交(RDB)试剂检测23种常见的HPV基因型。统计HPV的感染率和基因型分布特点。结果总共检测2 816例标本，HPV阳性标本数为1 018例，总感染率为36.15%，其中高危型占68.86%(701/1 018)，低危型占31.14%(317/1 018)。高危型以HPV52、58、18 3种亚型为主，分别占13.7%(139/1 018)、7.0%(71/1 018)和4.9%(50/1 018)，低危型以HPV6、16、43 3种亚型为主，分别占11.3%(115/1 018)、10.6%(108/1 018)、9.3%(95/1 018)。<20岁、20～<30岁、30～<40岁、40～<50岁、50～<60岁、>60岁年龄组的HPV感染率分别为24.36%、33.27%、41.96%、38.24%、30.11%、33.62%。HPV单一感染率为68.27%，混合感染率为31.73%。结论东莞地区HPV感染率较高，应加强HPV的筛查。

关键词:人乳头瘤病毒;基因型;流行病学调查

人乳头瘤病毒(HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。HPV持续感染是引起宫颈癌的必要因素，90%以上的患者有HPV感染[1]。据报道，全球约有2.91亿妇女感染HPV，宫颈癌已成为全世界女性常见的恶性肿瘤。不同的HPV基因型具有不同的致病性，一般将其分为高危型和低危型。HPV感染在不同国家、不同地区存在着较大差异。因此，获得东莞地区的HPV基因型分布特点有助于临床疾病的筛查和诊疗。本研究对2 816例妇科门诊患者的宫颈脱落细胞HPV感染率进行分析得到东莞地区的流行病学调查数据，为临床诊疗提供依据。

1资料与方法

1.1一般资料2014年1月至2015年7月在本院就诊的门诊或住院患者共2 816例。年龄15～83岁，平均36.4岁。

1.2仪器与试剂DNA快速提取试剂盒； 聚合酶链反应(PCR)扩增仪；PCR-反向斑点杂交(PCR-RDB)试剂盒；分子杂交箱。以上试剂设备均由深圳亚能公司提供。

1.3方法

1.3.1宫颈脱落细胞的采集采集使用专用的宫颈脱落细胞采集器，先用窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将阴道及宫颈口过多的分泌物轻轻擦拭干净，再用试剂盒提供的专用宫颈刷插入子宫颈外口，单方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞标本，然后将其放入含专用细胞保存液的试管中，2～8 ℃冰箱保存，每隔3 d检测1次。

1.3.2DNA提取与扩增 吸取500 μL细胞悬液标本，14 000 r/min离心1 min，弃去上清液，然后按试剂盒的DNA提取步骤抽提DNA。取1 μL DNA抽提液，加入HPV扩增体系，采用扩增仪扩增，95 ℃ 预变性10 min，95 ℃ 变性10 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，扩增40个循环，最后72 ℃延伸5 min，PCR扩增的产物立即杂交分型或-20 ℃保存备用。

1.3.3分子杂交PCR扩增产物95 ℃ 变性5 min，立即放入冰盒2 min，与1 mL预热至45 ℃的杂交缓冲液混合，在导流杂交仪上45 ℃孵育10 min后导流杂交，加入封阻液封闭，酶标，冲洗，显色，在30 min内查看分析结果，每次试验必须具备反应质控点，杂交显色质控点，阳性对照点显色，阴性对照点不显色，表示同时在控，试验结果有效。

1.3.4结果判断检测结果按照说明书规定的判读方法进行结果判断。本研究使用的是深圳亚能公司生产的PCR-RDB试剂盒，其可以检测23中常见HPV基因型，包括18种高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4；5种低危型：HPV6、11、41、42、43。

1.4统计学处理研究数据全部记录在Excel表格中，采用SPSS17.0统计软件进行分析，计数资料以率表示，比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1HPV总体感染情况在接受HPV检查的2 816例患者中，共检测出1 018例HPV感染者，HPV总感染率为36.15%，其中高危型占68.86%(701/1 018)，低危型占31.14%(317/1 018)。高危型以HPV52、58、18 3种亚型为主，分别占13.7%(139/1 018)、7.0%(71/1 018)和4.9%(50/1 018)，低危型以HPV6、16、43 3种亚型为主，分别占11.3%(115/1 018)、10.6%(108/1 018)、9.3%(95/1 018)。见图1。

图1　HPV不同亚型感染率(%)

2.2不同年龄段的感染情况各年龄段的HPV感染率分别为24.36%、33.27%、41.96%、8.24%、30.11%、33.62%。见表1。

表1　各年龄段HPV感染情况表

2.3多重感染情况本实验检测的基因型有21种，2 816例受检者中有单一型HPV基因型感染，有两种基因型感染，还有多种基因型感染。本次研究得到的1 018例阳性标本中有单一型感染695例，占阳性标本的68.27%；混合感染323例，占阳性标本的31.73%。

3讨论

HPV是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。根据其致病性可将其分为高危型和低危型，研究表明HPV高危型持续感染是引起宫颈癌的必要因数，约有90%以上的宫颈癌患者中存在HPV感染[2]。近年来，宫颈癌已成为全球妇女最常见的恶性肿瘤之一。HPV感染属于性传播疾病，性活跃期妇女普遍易感，随着易感人群的年轻化，HPV感染率持续升高。据统计每年宫颈癌的发病率按照2%～3%的速度增长[3]。

近年来，因为HPV感染得到了大量的研究，研究表明不同地区、人群、筛查方法等原因得到的结果有较大差异。国外研究指出，宫颈癌患者中常见亚型感染依次为HPV16、18、45、31、33、58和52型，而亚洲地区58和52型高于欧美地区常见的31、33和45型[4-6]。我国幅员辽阔，人口众多，各族人群的生活方式和习惯不同造成我国HPV感染呈现地区多态性。本研究显示，HPV总感染率为36.15%，其中最长见的亚型为HPV52、6、16、43，与我国其他学者的研究差异较大。

本研究显示，各个年龄段的HPV感染率都比较高，其中高峰出现在30～<40岁(41.96%)，低谷出现在小于20岁(24.36%)，与其他学者的研究结果之间出现了较大差异，这可能与东莞地区的人口结构有一定的关系，东莞地区有大量的外来务工人员，这些人员中普遍文化程度不高，健康意识淡薄，且经济基础不够扎实，故来医院检查的人数较少。在20～<40岁年龄段中的女性普遍性活跃程度比较高，且有了一定的经济基础和健康意识，故作检查的人数和检出率都比较高；而老年妇女可能是由于处于绝经期，激素水平紊乱、降低、保护性乳酸杆菌的减少及阴道pH 值变化等而使得机体疫功能衰退，HPV易感性增加及清除HPV的能力降低[7-8]。

有文献显示，单一型HPV感染可以使宫颈癌的患病风险提高19.9倍，而多重HPV感染则使该风险增加31.8倍，且多重感染对宫颈病变有促进作用[9]。本研究显示，HPV单一型的感染率为68.27%,多重感染率为31.73%。因此，对HPV多基因型的联合检测有利于宫颈癌的早期诊断和治疗。

综上所述，本地区HPV感染率较高达到36.15%，最长见的基因亚型为HPV52、6、16、43。不同年龄段的感染率差异有统计学意义(P<0.05)，且呈现年轻化趋势。本地区HPV多重感染率较高，达到31.73%。HPV感染潜伏期长短不一，一般为3～6个月，但是也有长达几年甚至十几年者。因此，筛查HPV感染是疾病的早期预防和治疗的必要手段。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.050

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)13-1862-02

(收稿日期：2016-02-23修回日期：2016-05-02)