黄泓玮，孙永得，李建华，武玉东

郑州大学第一附属医院泌尿外科 郑州 450052

人前列腺癌组织中ALKBH3及VEGF-C蛋白的表达>*

黄泓玮，孙永得，李建华，武玉东#

郑州大学第一附属医院泌尿外科 郑州 450052

关键词前列腺肿瘤；ALKBH3；血管内皮生长因子-C

摘要目的：探讨前列腺癌组织中ALKBH3蛋白的表达及其与血管内皮生长因子-C(VEGF-C)关系。方法：采用免疫组化SP法检测136例前列腺癌组织和129例前列腺增生组织中ALKBH3和VEGF-C蛋白的表达，分析前列腺癌组织中ALKBH3与VEGF-C蛋白表达的关联性。结果：前列腺癌组织中ALKBH3与VEGF-C蛋白的阳性表达率高于前列腺增生组织(P<0.001)。ALKBH3和VEGF-C蛋白的表达与前列腺癌的组织分化、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。前列腺癌组织中ALKBH3与VEGF-C蛋白的表达呈正关联(rP =0.684，P=0.565)。结论：ALKBH-3可能与VEGF-C协同作用，促进了前列腺癌的发生发展。

前列腺癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，目前对于前列腺癌的治疗采取以根治性切除手术为主，以内分泌治疗及放疗等综合治疗为辅的治疗手段。早期的前列腺癌症状不明显，因而错过了手术治疗的最好时机。目前临床上对于前列腺癌的筛查主要依靠对前列腺特异性抗原(PSA)的检测，但是在前列腺增生及前列腺炎组织中PSA也可以有异常表达。因此寻找一个敏感性强且具有特异性的前列腺癌肿瘤标记物十分重要。近期的研究[1]表明ALKBH3与多种肿瘤有关。血管内皮生长因子(VEGF)-C又称淋巴管生成因子，可诱导多种恶性肿瘤细胞瘤内或者瘤周的淋巴管生成或扩张，与淋巴转移密切相关[2]。作者采用免疫组织化学法SP法检测前列腺癌与前列腺增生组织中ALKBH3与VEGF-C蛋白的表达，探讨ALKBH3和VEGF-C蛋白在前列腺癌组织中的表达及其与淋巴转移的关系。

1对象与方法

1.1研究对象收集郑州大学第一附属医院泌尿外科2005年1月至2014年12月收治的前列腺癌患者的病理组织标本136例，患者年龄53～85岁，中位年龄71岁。依照Gleason评分标准，高、中分化癌74例，低分化癌62例；按WHO的TNM标准，T1、T2和T3、T4期分别为69与67例；有淋巴结转移89例，无淋巴结转移47例。患者术前均未接受化疗和内分泌治疗。选择同期良性前列腺增生组织标本129例，患者年龄50～81岁，中位年龄68岁。所有组织标本均经病理组织学确诊。

1.2ALKBH3与VEGF-C的检测采用免疫组织化学SP方法检测ALKBH3和VEGF-C蛋白在前列腺癌及前列腺增生组织标本中的表达。ALKBH3和VEGF-C一抗及二抗(SP-9002通用试剂盒)和DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。所有标本均4 μm厚切片，一抗稀释100倍使用，DAB染色，苏木素复染，常规脱水、透明、封片。以PBS代替一抗为阴性对照。ALKBH3与VEGF-C均以细胞核或细胞质出现棕黄色颗粒或黄色颗粒为阳性细胞。在染色最密集处连续观察5个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞百分比：0为0分， ～20%为1分，～50%为2分，>50%为3分。染色强度记分：淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。以上两者的乘积大于3为阳性。

1.3统计学处理采用SPSS 17.0进行分析。前列腺癌与前列腺增生组织中，不同病理分期、不同组织分化的前列腺癌组织中两种蛋白的阳性表达率比较采用χ2检验。以列联系数评估前列腺癌组织中两种蛋白的表达关系。检验水准α=0.05。

2结果

2.12种组织中ALKBH3与VEGF-C蛋白的表达

见图1和表1。

2.2前列腺癌组织中ALKBH3和VEGF-C蛋白的表达和临床病理特征的关系见表2。

2.3前列腺癌组织中ALKBH3与VEGF-C蛋白表达的关联性分析见表3。

A:前列腺增生组织;B:前列腺癌组织。图1　前列腺增生与前列腺癌组织中VEGF-C(1)与ALKBH3(2)的表达(SP，×400)

例(%)

表2　前列腺癌组织中ALKBH3和

*:为校正χ2检验。

表3　ALKBH3与VEGF-C

χ2=55.768，rP=0.565。

3讨论

ALKBH3是一个由286个氨基酸构成的蛋白，是α-酮戊二酸加双氧酶家族的成员之一。研究[3]认为ALKBH3与前列腺癌的发生发展有密切关系。研究[4]发现具有三螺旋结构的ALKBH3可通过激活受体络氨酸酶发挥调节细胞生长发育作用。作者的研究结果表明，ALKBH3蛋白在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织，提示ALKBH3与前列腺癌的发生发展有关。前列腺癌组织中ALKBH3蛋白的表达与不同病理分期、组织分化以及有无淋巴结转移有关，病理分期高和组织分化差以及有淋巴结转移的患者ALKBH3蛋白的表达水平高，说明ALKBH3蛋白与前列腺癌的进展、转移和浸润过程有关。

VEGF是近年来第一个被发现的具有调节淋巴管生成作用的VEGF家族成员，又称淋巴管生成因子，可诱导多种恶性肿瘤细胞瘤内或者瘤周的淋巴管生成或扩张，与淋巴转移相关密切[5]。VEGF-C是目前比较公认与熟知的用来评价肿瘤转移的一个重要指标。VEGF-C经蛋白酶水解后，以前肽的形式存在，VEGF-C的受体有VEGFR-3和VEGFR-2，两者均属于络氨酸激酶受体的家族成员，VEGFR-C能够提高血管的通透性，能够结合并激活VEGFR-3，刺激淋巴细胞有丝分裂并增生，从而促进淋巴管的生成与淋巴管的转移[6-8]。作者的研究结果表明，VEGF-C蛋白在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织，提示VEGF-C与前列腺癌的发生发展有关。前列腺癌组织中VEGF-C蛋白的表达与不同病理分期、组织分化以及有无淋巴结转移有关，病理分期高和组织分化差以及有淋巴结转移的患者VEGF-C蛋白的表达水平高，说明VEGF-C蛋白与前列腺癌的进展、转移和浸润过程有关。

该研究中作者分析了前列腺癌组织中ALKBH3与VEGF-C蛋白表达的关系，发现两者呈正关联，进而推断ALKBH3与VEGF-C可能具有协同作用，进而促进前列腺癌的分化与淋巴转移。

综上所述，ALKBH-3可能与VEGF-C具有协同作用，促进前列腺癌的发生发展。

参考文献

[1]SHIMADA K,FUJII T,TSUJIKAWA K,et al.ALKBH3 contributes to survival and angiogenesis of human urothelial carcinoma cells through NADPH oxidase and tweak/Fn14/VEGF signals[J].Clin Cancer Res,2012,18(19):5247

[2]赵富周,杨鲲鹏,庞志刚,等.食管鳞状细胞癌组织中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表达[J].郑州大学学报(医学版),2011,46(5):660

[3]刘秉乾,李沛寰,李建华,等.干扰ALKBH3基因表达对人前列腺癌LNCaP细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用[J].中华实验外科杂志,2014,31(12):2654

[4]DANGO S,MOSAMMAPARAST N,SOWA ME,et al.DNA unwinding by ASCC3 helicase is coupled to ALKBH3-dependent DNA alkylation repair and cancer cell proliferation[J].Mol Cell,2011,44(3):373

[5]HAGURA A,ASAI J,MARUYAMA K,et al.The VEGF-C/VEGFR3 signaling pathway contributes to resolving chronic skin inflammation by activating lymphatic vessel function[J].J Dermatol Sci,2014,73(2):135

[6]王虎霞，盛薇，王光辉，等.乳腺癌VEGF-C和VEGFR-3表达与淋巴结转移关系的研究[J].西安交通大学学报(医学版)，2009,30(3)：342

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[8]SHIMADA K,FUJII T,TSUJIKAWA K,et al.ALKBH3 contributes to survival and angiogenesis of human urothelial carcinoma cells through NADPH oxidase and tweak/Fn14/VEGF signals[J].Clin Cancer Res,2012,18(19):5247

Expressions of ALKBH3 and VEGF-C protein in human prostate cancer tissue

HUANGHongwei，SUNYongde，LIJianhua，WUYudong

DepartmentofUrology，theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052

Key wordsprostate neoplasm;ALKBH3;VEGF-C

AbstractAim: To explore the expressions of ALKBH3 and VEGF-C in prostate cancer tissue.Methods: Immunohistochemical SP method was used to detect the expressions of ALKBH3 and VEGF-C in 136 cases of prostate cancer and 129 cases of prostate hyperplasia.Results: The positive expression rates of ALKBH3 and VEGF-C in prostate cancer tissue were higher than those in prostate hyperplasia tissue(P<0.001).The expressions of ALKBH3 and VEGF-C were related to the differentiation and TNM staging of prostate cancer(P<0.05). The expressions of ALKBH3 and VEGF-C were positively correlated in prostate cancer(rP=0.684，P=0.565).Conclusion: ALKBH-3 may have a synergistic effect with VEGF-C to promote the differentiation and lymph node metastasis of prostate cancer.

doi：10.13705/j.issn.1671-6825.2016.03.018

#通信作者，男，1966年8月生，博士，教授，研究方向：泌尿外科肿瘤与临床，E-mail:wydkw@163.com

中图分类号R737.25

*国家自然科学基金资助项目30801151