曹海营，金 宇，赵景新，王 瑜，魏 然，李春辉



·论著·

改良穿刺活检技术用于降低VX2肌肉肿瘤穿刺并发症的研究

曹海营，金 宇，赵景新，王 瑜，魏 然，李春辉

【摘要】目的探讨改良穿刺活检技术改善兔VX2肌肉肿瘤穿刺孔出血及其周围肿瘤细胞转移的发生风险。方法将VX2肿瘤组织包埋种植于22只家兔双侧股外侧肌内制作成VX2肌肉肿瘤模型。其中20只左腿肿瘤设为左侧组，采用改良穿刺活检技术，穿刺后通过套管植入密封栓封堵穿刺孔；右腿肿瘤设为右侧组，采用传统穿刺活检技术，对穿刺孔不封堵。穿刺1 h后对左侧组及右侧组穿刺孔及周围行彩色超声检查，评定两组家兔穿刺孔出血情况；穿刺7 d后，处死20只家兔，取其肿瘤外穿刺针道软组织行病理学检查。结果穿刺1 h后，左侧组肿瘤穿刺孔出血率(40%，8/20)低于右侧组(85%，17/20)，差异有统计学意义(χ2=8.64，P<0.005)。左侧组穿刺孔血肿体积为0(32)mm3,小于右侧组的300(162)mm3,差异有统计学意义(Z=161，P<0.05)。穿刺7 d后，左侧组穿刺针道肿瘤细胞转移率(20%，4/20)低于右侧组(70%，14/20)，差异有统计学意义(χ2=10.10，P<0.05)。结论改良穿刺活检技术可降低家兔穿刺孔出血发生率，使穿刺孔周围血肿体积缩小，降低周围软组织肿瘤细胞转移的发生风险。

目前，肿瘤特别是肢体恶性软组织肿瘤发病率逐年升高，影像学技术为肿瘤的诊断提供大部分信息，但组织活检仍是肿瘤诊断的金标准。活检方式多样，穿刺活检应用较为广泛，其具有创伤小、出血少等优点。虽然穿刺活检方式及器械不断进步，但仍存在发生穿刺孔出血、肿瘤细胞经针道转移等并发症的风险，目前对改善软组织肿瘤穿刺孔出血及针道肿瘤细胞转移的研究较少。本研究采用自行设计的改良穿刺活检器械对20只家兔VX2肌肉肿瘤进行穿刺，应用封闭栓对穿刺孔进行封堵，评定穿刺孔出血及针道肿瘤细胞转移情况，为改良穿刺活检技术的推广应用提供依据。

1材料与方法

1.2器材及仪器超声诊断扫描仪(GE Medical Systems-LOGIQ9)，光学显微镜(OLYMPUS-BX53)，自行设计制作的改良穿刺活检器械及密封栓(专利号：201310050606.1)(见图1，本文彩图详见本刊官网www.chinagp.net)。VX2肌肉肿瘤株由广州吉妮欧生物试剂公司提供。

注：a为改良穿刺器械示意图，b为密封栓

图1改良穿刺器械及密封栓

Figure 1Improved puncture instrument and bolt closure

1.3动物准备

1.3.1家兔VX2肌肉肿瘤模型制备将冻存的VX2肿瘤组织在-4 ℃条件下复苏，无菌条件下剪成1 mm3大小的碎组织块，并置入0.9%氯化钠溶液中。耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠(1 ml/kg)麻醉，后肢去毛，俯卧位固定于手术台上。常规手术区消毒、放置无菌洞巾后，分别于兔双侧大腿股外侧肌处做一1 cm长切口，依次切开皮下组织、筋膜，暴露股外侧肌，用眼科镊在肌肉层穿一小洞，采用切口肿块包埋种植法，将一肿块植于其中。依次缝合肌肉、筋膜、皮下组织和皮肤，该家兔VX2肌肉肿瘤模型即制作完毕。

1.3.2实验对象选取每7 d对家兔双侧后肢行彩色超声检查明确肿瘤生长情况。3周后家兔双侧大腿切口愈合良好，局部均可见包块，质韧，超声检查示肿物大小30 mm×30 mm×40 mm，边界较清(见图2)。于植入3、4周后各处死1只家兔，取双侧肿瘤周围软组织行病理HE染色检查，均未见瘤细胞。

注：a为植入3周后，VX2肌肉肿瘤大体像，切面观呈淡红色鱼肉状，质脆；b示超声下肿瘤影像，边界较清，周围血运较丰富

图2植入3周后VX2肌肉肿瘤大体像及超声所见

Figure 2Gross anatomy and ultrasonography of VX2 tumor 3 weeks after implantation

1.4穿刺方法植入3周后，经耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠(1 ml/kg)麻醉，分别将后肢肿物表面毛发剃除，俯卧位固定于手术台上。常规碘伏消毒，铺无菌孔单。将20只家兔左下肢VX2肌肉肿瘤作为左侧组，采用改良穿刺活检技术进行穿刺，当穿刺针到达肿瘤内时，拔出针芯，套管针保持位置不动，插入取病理针，旋转采取少量肿瘤组织，并将密封栓从针尾放进套管，用针芯顺套管将密封栓顶置肌肉肿瘤浅层穿刺孔内进行封堵，缝合(见图3～4)。右下肢作为右侧组，采用传统穿刺活检技术，对穿刺孔不封堵。

注:由内到外依次为肿瘤组织、肿瘤包膜、肿瘤反应区、正常软组织；a示带针芯的套管通过VX2肌肉肿瘤内，b示拔出针芯，使VX2肌肉肿瘤组织与体外相通，c示通过套管插入取病理套管，取出肿瘤组织，d示通过套管放入封闭栓，e示拔出通道套管，封闭栓留在穿刺孔发挥封闭作用

图3改良穿刺活检技术穿刺VX2肌肉肿瘤过程

Figure 3Operational process of the improved biopsy technique on VX2 tumor

1.5术后评价穿刺1 h后，对家兔穿刺部位行彩色超声检查，观察穿刺孔周围出血情况。对穿刺孔周围出血的家兔，由医师超声下测量穿刺孔血肿长径、厚径，依据Carlsson公式V=0.5×a×b2(a、b分别为超声下测得血肿长径、厚径，V为血肿体积)计算血肿体积[1]。穿刺7 d后，处死家兔，取肿瘤外穿刺针道软组织。浸泡于4%甲醛溶液中固定，石蜡包埋，切片并进行HE染色，观察镜下病理结果。

有学者提出在二语习得中，影响语言迁移的社会因素有很多，主要包括学习者的文化传统、思维模式以及非语言交际等。本文从探讨影响语言迁移的社会因素出发，发现这些因素都会影响母语迁移的发生，这些因素可能对母语迁移产生正迁移，也可能对母语迁移产生负迁移。

图4　一次性密封栓封堵VX2肌肉肿瘤穿刺孔

1.6统计学分析采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计量资料以M(QR)表示，组间比较采用配对样本Wilcoxon符号秩检验；计数资料的分析采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1穿刺后出血情况穿刺1 h后，左侧组家兔封闭栓均未见脱落，其中8只家兔穿刺孔出血；右侧组17只家兔穿刺孔出血(见图5)。左侧组肿瘤穿刺孔出血率(40%，8/20)低于右侧组(85%，17/20)，差异有统计学意义(χ2=8.64，P<0.005)。左侧组穿刺孔血肿体积为0(32)mm3,小于右侧组的300(162)mm3,差异有统计学意义(Z=161，P<0.05)。

注：a示左侧组穿刺孔周围无明显出血；b示右侧组穿刺孔周围可见血肿形成

图5穿刺1 h后穿刺部位超声图像

Figure 5Ultrasonoscopy of puncture area 1 hour after puncture

2.2周围软组织肿瘤细胞转移情况穿刺7 d后，左侧组可见密封栓依旧封堵于穿刺孔内，4只家兔针道软组织中发现瘤细胞，而右侧组14只家兔发现瘤细胞(见图6)。左侧组穿刺孔针道肿瘤细胞转移率(20%，4/20)低于右侧组(70%，14/20)，差异有统计学意义(χ2=10.10，P<0.05)。植入3、4周时处死的未行肿瘤穿刺的家兔病理检查示肿瘤周围正常软组织均未发现瘤细胞侵犯(见图7)。

注：a示左侧组穿刺孔周围软组织未见瘤细胞转移(×10)；b示右侧组穿刺孔周围软组织见瘤细胞转移，可见周围肿瘤外针道肌肉组织中含核大深染的瘤细胞(×10)；c示高倍镜下瘤细胞核大深染，部分胞质量少，核仁明显，有较多核分裂象，细胞异型性大(×40)

图6穿刺7 d后穿刺孔周围软组织病理图片(HE染色)

Figure 6Pathological pictures of soft issues around the puncture 7 days after puncture

图7　未行肿瘤穿刺的家兔病理检查结果(HE染色，×10)

Figure 7Pathologic examination results of rabbits without tumor puncture

3讨论

肢体软组织肿瘤病变较为复杂，其组织学分型仍需组织学检查确定，活体组织检查作为决定病理类型及肿瘤诊断准确性最高的方法，是诊断肌肉和骨骼病变的金标准[2]，也是制定手术方案的重要依据[3]。目前肢体软组织肿瘤活检方式分为闭合活检、切开活检及切除活检，各种活检方式各有利弊。切开活检获取组织较多，具有较高的整体诊断准确率[4-5],但缺点是出血多、肿瘤细胞特别是恶性肿瘤细胞容易局部扩散，且相关手术切口可能影响下次手术治疗方案。闭合活检多为针吸活检和穿刺活检，骨科常用穿刺活检，其优点是创伤小、出血少、操作方便以及穿刺孔对下次手术治疗方案影响较小，但缺点是取材较少、准确率较切开活检低。穿刺活检病理提取完毕后，拔出组织取样套管，医生通过按压的方式使组织止血，由于穿刺对患者形成的创伤孔径较小，人体组织会自然愈合。但由于人体肿瘤内压力与外界不同，肿瘤内组织会渗透到肿瘤外形成血肿，若患者骨内组织包含恶性肿瘤细胞，肿瘤细胞会随骨内组织液体的外渗，造成恶性肿瘤转移。据报道，穿刺活检后可能发生穿刺孔出血、周围血肿形成、肿瘤细胞经针道转移等并发症[6-7]。本研究通过自行设计并已经申报国家专利的穿刺活检器械及密封栓，对质地较韧的兔VX2肌肉肿瘤进行穿刺活检，该器械的套管进入穿刺孔同时，对穿刺孔进行了物理隔离[8]，病理组织提取完毕后，用密封栓对穿刺孔进行封堵，整个操作过程保证了穿刺孔内组织液不会外渗，从而降低穿刺孔出血及肿瘤细胞经针道转移的发生风险。

VX2肌肉肿瘤是一类质韧的软组织恶性乳头状瘤，可接种在兔肺脏、肝脏、肌肉、骨骼等处，具有较高的生物学特性[9-10]，而将VX2瘤株接种于肌肉内建立肿瘤模型的研究很少，通常用作传种瘤株[11]。苏静等[12]对兔VX2肌肉肿瘤模型制造发现，21～28 d时肿瘤体积迅速增大，质地较韧，B超显示为圆形或类圆形，边界较清楚，彩色多普勒血流成像显示肿瘤病灶周边均可见大量的短条状或分支状血流信号包饶瘤灶；接种21 d取材，切面观呈灰红色鱼肉状，光镜下可见肿瘤区与小片状坏死区交错分布，界限清楚，肿瘤周围软组织无瘤细胞浸润，且肿瘤尚未出现脏器转移。席占国等[13]认为应用组织块包埋法建立的模型操作简单、成瘤率高、肿瘤生长局限、形态较规则、转移发生相对较晚。本研究采用肿瘤组织块包埋法在兔大腿股外侧肌内移植建立VX2肌肉肿瘤模型均获得成功，肿瘤生长较局限、质韧、形状较规则，转移发生较晚，接种21 d后VX2肌肉肿瘤模型可作为理想的穿刺研究对象。

本研究发现，应用改良穿刺法后，家兔穿刺孔出血发生率降低，穿刺孔周围血肿体积缩小，周围软组织肿瘤细胞转移发生率降低。该改良穿刺法及器械的优点在于套管进入穿刺孔时，不仅对穿刺孔进行了物理隔离，且对穿刺孔进行了封堵。密封栓由医用高分子聚合物材料制成，可植入体内，环状翘片的直径及成对凸起和成对倒钩的间距均大于套管通孔内径，可有效固定并封堵穿刺孔，避免穿刺孔出血，同时也避免了穿刺孔的渗漏所造成恶性肿瘤转移。前期研究证明，此改良穿刺方法明显改善骨髓穿刺孔出血情况[8]。软组织肿瘤多为质软或质韧的肿物，密封栓稳定性较差，不易卡在穿刺孔内而存在脱落风险，导致封堵失败。VX2肌肉肿瘤质地较韧，而密封栓成对凸起和成对倒钩的间距均大于套管通孔的内径，可有效固定并封堵穿刺孔，本研究穿刺7 d后，均未发现密封栓脱落。随着对本改良穿刺活检技术及器械的不断改进，在骨及软组织肿瘤穿刺动物模型中进行进一步验证，为本项技术早日应用临床奠定良好的基础。

作者贡献：曹海营进行数据收集、文章撰写并对文章负责；金宇负责文章修改、实验医学伦理学审查及实验全面统筹工作；赵景新负责动物实验肿瘤模型制作；王瑜负责动物病理组织取材；魏然进行动物肿瘤影像学评估；李春辉进行动物肿瘤病理组织的病理学评估。

本文无利益冲突。

参考文献

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(本文编辑：吴立波)

【关键词】穿刺术；肌肉瘤；手术后出血；肿瘤转移

曹海营，金宇，赵景新，等.改良穿刺活检技术用于降低VX2肌肉肿瘤穿刺并发症的研究[J].中国全科医学，2016，19(5)：560-564.[www.chinagp.net]

Cao HY,Jin Y,Zhao JX，et al.Application of improved biopsy technique in reducing complications induced by VX2 tumour puncture[J].Chinese General Practice，2016，19(5)：560-564.

Application of Improved Biopsy Technique in Reducing Complications Induced by VX2 Tumour PunctureCAOHai-ying,JINYu,ZHAOJing-xin，etal.ChengdeMedicalCollege,Chengde067000,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of improved biopsy technique in reducing the risk of puncture hole hemorrhage and surrounding tumor cell metastasis induced by VX2 tumour puncture.MethodsThe VX2 tumor was implanted in thigh vastus lateralis of 22 rabbits to build VX2 tumor models.Twenty cases of adult rabbits with tumor on left leg were assigned into left group,and the puncture holes were implanted with bolt closure through casing after needle biopsy.The rabbits with tumor on right leg were assigned into right group,and were managed with traditional biopsy technique without closure of puncture holes.Ultrasonography was used to assess the bleeding of the puncture hole and adjacent area 1 hour after puncture;7 days after puncture,20 rabbits were killed,and the soft tissues outside tumor where the puncture needle was placed were obtained to conduct pathological examination.ResultsOne hour later，the left group was lower than the right group in bleeding incidence〔(40%，8/20)vs.(85%，17/20);χ2=8.64，P<0.005〕.The hematoma volume of the left group was lower than that of right group〔0(32)mm3vs.300(162)mm3;Z=161，P<0.05〕.Seven days after puncture,the left group was lower than the right group in tumor cell metastasis rate at puncture needle passage〔(20%，4/20)vs.(70%，14/20);χ2=10.10，P<0.05〕.ConclusionImproved needle biopsy technology could lessen the incidence of bleeding at puncture hole,reduce the hematoma volume around puncture hole and reduce the risk for tumor cell metastasis in the adjacent soft tissues.

【Key words】Punctures；Myosarcoma；Postoperative hemorrhage；Neoplasm metastasis

(收稿日期：2015-06-23；修回日期：2015-11-20)

【中图分类号】R 446.8

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.05.015

通信作者:金宇，067000河北省承德市，承德医学院附属医院；E-mail：792027135@qq.com

基金项目：2014年河北省科技厅指令性项目(14277790D)
作者单位：067000河北省承德市，承德医学院(曹海营，魏然)；承德医学院附属医院(金宇，赵景新，王瑜，李春辉)