褚 燕

（沈阳市红十字会医院呼吸内科，辽宁 沈阳 110013）

不同剂量阿托伐他汀对肺纤维化小鼠Smad3/7蛋白表达的影响

褚 燕

（沈阳市红十字会医院呼吸内科，辽宁 沈阳 110013）

目的研究不同剂量阿托伐他汀对肺纤维化小鼠肺组织中smad3，smad7蛋白表达影响。方法小鼠随机分为对照组，模型组，阿托伐他汀（10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg）治疗组。对照组小鼠气管内灌注生理盐水，其余小鼠气管内灌注博来霉素制备肺纤维化模型。给药后第2天开始阿托伐他汀组给予不同剂量阿托伐他汀灌胃，其余两组给予等量生理盐水灌胃，于第7，14，28天分别处死各组小鼠4只，取肺组织进行HE染色观察病理变化，免疫组化法测定肺组织smad3，smad7蛋白表达情况。结果与模型组比较，阿托伐他汀治疗组smad3蛋白表达均降低，smad7蛋白表达升高，且降低及升高程度均与阿托伐他汀剂量呈正相关。结论阿托伐他汀可减轻小鼠肺纤维化程度，其减轻与Smad3/7通路密切相关，且具有剂量依赖性。

阿托伐他汀；TGF-β1；smad3蛋白；smad7蛋白

肺间质纤维化是多种病因引起的肺部破坏性疾病，一旦确诊，预后极差，由于目前尚无有效治疗手段，故提高对肺纤维化发生机制认识，有利于帮助我们研究新的治疗手段[1]。在前期试验中，我们已证实阿托伐他汀可以通过对转化生长因子β1（TGF-β1）及Samd3/7蛋白通路的调节，干预肺纤维化程度。本实验就在此基础上，研究不同剂量阿托伐他汀对肺纤维化影响。

1 材料与方法

1.1 动物及试剂：健康清洁级雌性C57BL-6小鼠100只，体质量约20 g（中国医科大学附属盛京医院实验动物中心提供），博莱霉素粉剂（日本株式会社，15毫克/支），兔抗鼠Smad3及Smad7抗体免疫组化试剂盒（购自北京博奥森生物技术有限公司）。

1.2 分组与建模：将100只小鼠分为5组，空白组20只，模型组20只，阿托伐他汀（10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg）每组各 20只。将小鼠适应性喂养5 d，开始模型制作，用10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔内注射麻醉，起效后于颈部正中纵向切口，暴露气管，除空白组外，其余4组均用1 mL注射器抽取含博莱霉素(7 mg/kg)的生理盐水0.3 mL，气管内给药，随后逐层缝合肌肉皮肤，消毒。将小鼠左侧卧位放回鼠笼，对照组为同法注入同等剂量的生理盐水。约10 min后小鼠清醒，送回动物间，再原有条件下继续饲养。

1.3 给药：造模后第2天开始，每日给空白组和模型组小鼠生理盐水2 mL灌胃，阿托伐他汀组按10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg进行灌胃治疗。

1.4 留取标本：各组分别于造模后第7，14，28天随机处死4只，剖胸取肺组织，固定于4%多聚甲醛1周，常规固定，石蜡包埋，切片。

1.5 组织病理学观察：切片行HE染色。比较不同时间点各组标本的肺泡炎和肺纤维化程度。

1.6 免疫组化检测：smad3，smad7蛋白表达 按照试剂盒要求对切片进行免疫组化SP法染色。

1.7 统计学分析：所有数据以表示，采用SPSS13.0统计分析软件，各实验组和对照组之间采用多组单因素方差分析，组间比较用t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结 果

2.1 镜下观：空白组小鼠肺泡结构完整，无纤维增生。模型组小鼠第7天肺泡腔内大量炎性细胞浸润，但肺泡间隔无明显增厚，无明显纤维增生；第14天炎性细胞浸润较前减轻，但肺泡间隔明显增厚，偶见纤维增生，第28天肺泡结构破坏，肺泡间隔增厚，可见明显胶原纤维增生。各剂量阿托伐他汀组上述症状均较相应时间点模型组明显减轻，且随着阿托伐他汀剂量的增加，上述症状缓解越明显。

2.2 阿托伐他汀对肺纤维化小鼠组织Smad3及Smad7表达的影响：通过统计学分析，与模型组比较，阿托伐他汀治疗组smad3蛋白表达均降低，smad7蛋白表达升高，且降低及升高程度均与阿托伐他汀剂量呈正相关。

3 讨 论

肺纤维化是多种肺间质疾病最终结局，也是呼吸系统最严重的疾病之一，预后极差，最终可以引起呼吸功能衰竭而死亡，5年生存率不超过50%。近年来，多种抗纤维化药物用于治疗该病，但效果均不理想。阿托伐他汀作为调脂类药物已经广泛应用于临床，近些年对其抗纤维化的研究也成为国内外热点。TGF-β1是公认的促纤维化因子，可调节细胞增殖、分化、凋亡、移行、分泌ECM、调试细胞与细胞间、细胞与ECM间相互作用[2]。Smads蛋白是近年来发现参与TGF-β超家族信号在细胞内转导的一组信号蛋白[3]。TGF-β本身是以无活性的形式存在于细胞内，它的表达需要借助其相对应的信号通路，其中Smads通路是最重要的信号转导分子。 Smad蛋白作为TGF-β1下游信号分子，将TGF-β1信号从细胞外转导到细胞内，调节靶基因的转录，使胶原过度沉积，从而导致肺纤维化的发生发展[4]。在本实验中，通过测试发现，阿托伐他汀治疗组smad3蛋白表达均降低，smad7蛋白表达升高，且降低及升高程度均与阿托伐他汀剂量呈正相关。

综上所述，阿托伐他汀可减轻小鼠肺纤维化程度，其减轻与Smad3/7通路密切相关，且具有剂量依赖性。

[1] Gameau-Tsodikova S,Thannickal VJ.Protein kinase inhibitors in the treatment of pulmonary fibrosis[J]. CurrMed Chem,2008,15 (25):2632-2640.

[2] Kim IY,Kim MM,Kim SJ.Transforming growth factor-: biology and clinical relevance[J]. Biochem Mol Biol,2005,38(1):1-8.

[3] Attisano L,Wrana JL.Signal transduction by the TGF- β superfamily[J].Science,2002,296(5573):1646-1647.

[4] Gressner AM,Weiskirchen R,Breitkopf K,et al.Roles of TGF-beta in hepatic fibrosis[J].Front Biosci,2002,7(7):d793-807.

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1671-8194（2016）33-0018-01