杨忠光

(遵义市中医院，贵州　遵义　563000)



加味当归补血方对环磷酰胺模型小鼠免疫功能的影响

杨忠光

(遵义市中医院，贵州遵义563000)

摘要〔〕目的研究加味当归补血方对环磷酰胺(CTX)模型小鼠免疫功能的影响。方法选择昆明小白鼠36只，随机分为对照组、模型组、治疗组，对照组给予0.5 ml/d生理盐水灌服，模型组给予CTX 80 mg/kg腹腔注射；治疗组给予CTX腹腔注射时，同时给予加味当归补血汤灌服。检测血常规指标、免疫球蛋白含量以及T淋巴细胞亚群含量。结果(1)模型组小鼠血液中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM含量以及T淋巴细胞亚群Th1、Th17细胞比例均低于对照组，Th2、Treg细胞比例高于对照组(P<0.05)；(2)治疗组小鼠血液中WBC、RBC、Hb、IgA、IgG、IgM含量以及Th1、Th17细胞比例均高于模型组，Th2、Treg细胞比例低于模型组(P<0.05)。结论加味当归补血方能够提高CTX免疫抑制小鼠模型的体液免疫功能和细胞免疫功能。

关键词〔〕环磷酰胺；加味当归补血方；免疫功能；免疫球蛋白

第一作者：杨忠光(1962-)，男，主要从事中医肿瘤临床及科研工作。

手术切除、放化疗等均是临床处理恶性肿瘤的常用方法。环磷酰胺(CTX)是临床上用于治疗恶性肿瘤的化疗药物，是一类非特异性的烷化剂，对正常细胞和肿瘤细胞均具有杀伤作用〔1〕。在诸多毒副反应中，免疫功能抑制是CTX最突出的毒副反应之一，如何改善CTX所致免疫功能抑制一直是临床研究的热点〔2〕。当归补血汤主要由当归、黄芪组成，为补气益血方剂之一，对正常小鼠免疫功能有一定的促进作用〔3〕。本文拟分析加味当归补血方对CTX模型小鼠免疫功能的影响。

1对象与方法

1.1对象和材料昆明小白鼠36只，雌雄各半，体重18～24 g，随机分成对照组、模型组、治疗组各12只。CTX购买于山西普德药业有限公司；加味当归补血方取相应颗粒药物，用蒸馏水制成0.1 g/ml的混悬液并用于灌胃。

1.2模型制作和给药方法对照组：给予0.5 ml/d生理盐水灌服，连续10 d；模型组：给予CTX 80 mg/kg腹腔注射，1次/3 d；治疗组：给予CTX腹腔注射(方法同模型组)，同时给予加味当归补血汤灌服，连续10 d。

1.3免疫功能评价方法采集外周血，采用血常规检测仪检测白细胞(WBC)、红细胞(RBC)以及血红蛋白(Hb)含量；采用酶联免疫吸附法检测免疫球蛋白(Ig)A、IgG以及IgM含量；采用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例。

1.4统计学方法采用SPSS18.0软件行方差分析或t检验。

2结果

2.1血常规指标模型组小鼠血液中WBC、RBC、Hb含量均低于对照组，治疗组均高于模型组(P<0.05)，见表1。

2.2体液免疫指标模型组小鼠血液中IgA、IgG以及IgM含量均低于对照组(P<0.05)，治疗组均高于模型组(P<0.05)，见表2。

2.3细胞免疫指标模型组小鼠血液中Th1、Th17细胞含量低于对照组，Th2、Treg细胞含量高于对照组；治疗组Th1、Th17细胞含量高于模型组，Th2、Treg细胞含量低于模型组(P<0.05)，见表3。

组别WBC(×109/L)RBC(×1012/L)Hb(g/L)对照组6.82±0.829.12±1.02138.95±17.61模型组4.14±0.551)5.57±0.671)101.34±13.461)治疗组5.69±0.601)2)8.08±0.921)2)122.19±15.521)2)

与对照组比较：1)P<0.05；与模型组比较：2)P<0.05；下表同

组别IgAIgGIgM对照组10.34±1.521.83±0.21145.62±18.82模型组4.18±0.551)0.73±0.091)68.76±9.491)治疗组7.95±0.981)2)1.41±0.171)2)103.41±15.621)2)

组别Th1Th2Th17CD4+CD25+Treg对照组28.91±3.4210.98±1.521.89±0.2410.77±1.26模型组20.52±2.731)17.43±2.271)0.87±0.091)18.51±2.351)治疗组24.59±2.911)13.45±1.981)1.31±0.171)14.45±1.891)

3讨论

免疫功能抑制是CTX治疗过程中最常见的不良反应，会影响化疗效果并增加肿瘤细胞发生免疫逃逸的风险〔4〕。加味当归补血汤的药物成分包括黄芪、当归、灵芝、阿胶、川芎等。其中，黄芪是该方剂的君药，其药理作用为增强自然杀伤细胞的功能、提高机体免疫力〔5〕；当归为臣药，其药理作用为改善微循环、减轻局部炎症反应〔6〕；阿胶、灵芝、川芎等为佐药和使药，能够增强骨髓造血功能、促进淋巴细胞转化、提高机体免疫功能〔7〕。

血液循环中RBC和WBC对于机体免疫功能的维持具有重要作用。RBC和WBC能够识别和递呈抗原并发挥抗原清除的作用；此外，还能调控免疫功能相关细胞因子〔8〕。本研究结果与计小清等〔9〕研究报道基本一致，说明CTX注射后模型小鼠发生了免疫功能抑制，而在给予加味当归补血汤后免疫功能得到了改善。

机体免疫功能由体液免疫和细胞免疫两部分组成。免疫球蛋白是完成体液免疫的重要分子，血清中免疫球蛋白IgA、IgG以及IgM含量可以准确反映体液免疫水平〔6〕。本文结果提示CTX注射后模型小鼠发生了体液免疫功能的损伤，而在给予加味当归补血汤后体液免疫功能得到了提高。

T淋巴细胞参与机体的细胞免疫过程，其中CD4+T淋巴细胞对细胞免疫的完成具有尤为重要的价值。根据细胞表面标志物以及细胞功能的不同，CD4+T淋巴细胞包括辅助性T细胞(Th)和调节性T细胞(Treg)〔10〕。Th1和Th2细胞是最早被认识的Th细胞，前者能够分泌免疫促进因子并增强免疫功能，后者能够分泌免疫抑制因子并抑制免疫功能〔11〕。Th17和Treg是新发现的一对免疫细胞，前者能够分泌IL-17并增强机体免疫功能，辅助完成肿瘤细胞的杀伤；Treg细胞表面的标志分子是CD4+CD25+，具有抑制T细胞分化、成熟的作用，是一类免疫抑制细胞〔12，13〕。本实验结果提示CTX注射后模型小鼠发生了细胞免疫功能的损伤，而在给予加味当归补血汤后细胞免疫功能得到了提高。

参考文献4

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8Sevko A,Sade-Feldman M,Kanterman J,etal.Cyclophosphamide promotes chronic inflammation-dependent immunosuppression and prevents antitumor response in melanoma〔J〕.J Invest Dermatol,2013;133(6):1610-9.

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〔2015-03-19修回〕

(编辑李相军)

中图分类号〔〕R28〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)24-7020-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.024