刘飞，方磊，李佳，张永清*

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355；2.山东省分析测试中心，山东 济南 250014)

·基础研究·

栝楼雄株茎叶酚酸类化学成分研究△

刘飞1，方磊2，李佳1，张永清1*

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355；2.山东省分析测试中心，山东 济南 250014)

目的：研究栝楼雄株茎叶中的酚酸类成分，充分利用生产中的废弃资源。方法：乙醇提取，提取物以适量水混悬，依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，利用聚酰胺和Sephadex LH-20柱色谱、C18中压柱色谱及制备型高效液相色谱等手段进行分离纯化，根据各化合物的理化性质及谱学数据进行结构鉴定。结果：共分离得到8个酚酸类化合物，分别鉴定为反式桂皮酸(1)、香草酸(2)、反式阿魏酸(3)、3-羟基乙酰基吲哚(4)、对羟基苯甲酸(5)、对羟基桂皮酸(6)、原儿茶酸(7)、对羟基苯甲醛(8)。结论：除化合物5以外，其他化合物均为首次从该部位分离得到，化合物1、3、4、6、7均为首次从该植物中分离得到，为生产中废弃资源的综合利用提供了参考。

栝楼；雄株茎叶；酚酸类；提取分离；结构鉴定

栝楼TrichosantheskirilowiiMaxim.隶属于葫芦科栝楼属，是多年生草质藤本植物。其果实(瓜蒌)、果皮(瓜蒌皮)、种子(瓜蒌子)、块根(天花粉)均可药用[1]。栝楼化学成分多种多样，主要包括挥发油、甾醇、萜、黄酮及酚、蛋白质等类及其他类化合物[2-4]。近年来，关于栝楼各药用部位化学成分的研究报道逐渐增多，但少见对栝楼茎叶化学成分的研究。栝楼茎叶在治疗胃癌、高血压等的中药配方中起着重要作用[5-6]，证明了栝楼茎叶同样具有药用价值，因此笔者认为有必要对栝楼茎叶化学成分进行研究。栝楼为雌雄异株植物，在用种子进行繁殖的时候，往往雄株多于雌株，如果以果实为目标产品时，就需要在花蕾出现、容易区分性别时将雄株拔除，这样就会产生大量的雄株茎叶，为充分利用该资源，笔者以雄株栝楼植株茎叶为实验材料，系统研究了其化学成分组成，本研究报道栝楼雄株茎叶中的酚酸类成分。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Bruker-400核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司)；普源L-3000高效液相色谱仪(北京普源精电科技有限公司)；innoval C18高效液相色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；电子分析天平(日本Shimadzu公司)。

1.2 材料

硅胶填料(100～200目、200～300目，青岛海洋化工厂)；GF254硅胶板(青岛海洋化工厂)；聚酰胺(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)；Sephadex LH-20填料(日本YMC公司)；高效液相用甲醇、乙腈(色谱纯，美国Tedia公司)；水(娃哈哈纯净水)；乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、冰乙酸等均为分析纯。

栝楼雄株茎叶于2014年7月采于山东省济南市长清区马山镇双泉村栝楼种植基地，经山东中医药大学张永清教授鉴定为葫芦科栝楼属植物栝楼TrichosantheskirilowiiMaxim.的雄株茎叶。晒干，粉碎成粗粉，备用。

2 提取与分离

取干燥的栝楼雄株茎叶粗粉30 kg，加入适量95%乙醇水溶液回流提取2 h，过滤，滤渣重复提取2次，提取时间分别为2、1 h，将滤液合并，旋转蒸发至无醇味。将乙醇提取物以适量水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别旋转蒸发得到各极性部位。其中乙酸乙酯部位(108 g)经聚酰胺柱，以乙醇-水梯度洗脱，初步分离为11个组分(A1～A11)。A6(30%乙醇洗脱物)通过硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，通过硅胶TLC指导合并具有相同斑点的流分，得组分A6-1～A6-17。其中A6-4、A6-9通过制备型高效液相色谱分离，分别得到化合物1(9.8 g)、7(18.5 mg)；A6-5、A6-6经Sephadex LH-20柱色谱及制备型高效液相色谱，分别得到化合物2(11.0 mg)、3(13.2 mg)、4(9.7 mg)、5(11.6 mg)和6(10.6 mg)。A5经C18硅胶中压柱色谱，以甲醇-水(10%～100%)梯度洗脱，其中12.5%甲醇洗脱组分经制备型高效液相色谱分离纯化，得到化合物8(8.6 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：ESI-MSm/z：147[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.43(1H，-COOH)，7.69(2H，s，H-2，H-6)，7.59(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，7.42(3H，s，H-3，H-4，H-5)，6.53(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，7.21(2H，m，H-5，H-6)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：134.7(C-1)，128.7(C-2)，129.4(C-3)，130.7(C-4)，129.4(C-5)，128.7(C-6)，144.3(C-7)，119.8(C-8)，168.0(C-9)。以上数据与文献[7]报道基本一致，因此确定该化合物为反式桂皮酸(trans-cinnamic acid)，为首次从该植物中分离得到。

化合物2：白色片状结晶；ESI-MSm/z：214[M+2Na]+，167[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.44(2H，s，H-2，H-6)，6.84(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，3.81(3H，s，3-OCH3)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：167.7(-COOH)，151.5(C-4)，147.7(C-3)，123.9(C-6)，122.2(C-1)，115.5(C-2)，113.2(C-5)，56.0(-OCH3)。以上数据与文献[8]报道基本一致，因此确定该化合物为香草酸(vanillic acid)。

化合物3：白色针晶；ESI-MS m/z：195[M+H]+，193[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.49(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)和δ6.37(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，提示该化合物结构中存在1个反式双键，δ7.08(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.79(1H，d，J=8.0Hz，H-5)，7.28(1H，s，H-2)，3.82(3H，s，3-OCH3)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：126.3(C-1)，111.6(C-2)，149.5(C-3)，148.4(C-4)，116.2(C-5)，123.3(C-6)，144.9(C-7)，116.0(C-8)，168.5(C-9)。以上数据与文献[9]报道基本一致，因此确定该化合物为反式阿魏酸(trans-ferulic acid)，为首次从该植物中分离得到。

化合物4：ESI-MSm/z：176[M+H]+，174[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：11.97(1H，br s，-NH)，8.35(1H，s，H-2)，8.18(1H，d，J=8.0 Hz，H-4)，7.48(1H，d，J=8.0 Hz，H-7)，7.21(2H，s，H-5，H-6)，4.93(1H，brs，-OH)，4.58(2H，s，H-9)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：133.8(C-2)，113.7(C-3)，112.6(C-4)，122.2(C-5)，123.3(C-6)，121.6(C-7)，194.9(C-8)，65.8(C-9)，125.9(C-3a)，136.8(C-7a)。以上数据与文献[10]报道基本一致，因此确定该化合物为3-羟基乙酰基吲哚[3-(hydroxyacetyl)indole]，为首次从该植物中分离得到。

化合物5：白色棱柱形结晶体；ESI-MSm/z：139[M+H]+，137[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.80(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.83(2H，d，J=8.4Hz，H-3，5)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：121.9(C-1)，132.0(C-2)，115.6(C-3)，162.1(C-4)，115.6(C-5)，132.0(C-6)，167.7(C-7)。以上数据与文献[11]报道基本一致，因此确定该化合物为对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)。

化合物6：ESI-MSm/z：165[M+H]+，163[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.52(2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6)，6.79(2H，d，J=8.0 Hz，H-3，5)，为苯环上氢信号，提示苯环上取代基为对称取代。7.49(1H，d，J=14.0 Hz，H-7)，6.29(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，提示该化合物结构中存在双键。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：115.9(C-1)，116.2(C-2，6)，130.5(C-3，5)，160.0(C-4)，125.8(C-7)，144.5(C-8)，168.4(C-9)。以上数据与文献[12]报道基本一致，因此确定该化合物为对羟基桂皮酸(p-hydroxycinnamic acid)，为首次从该植物中分离得到。

化合物7：浅褐色粉末；ESI-MSm/z：193[M+K]+，153[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.34(1H，brs，H-2)，7.29(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，以上1H-NMR数据与文献[13]中原儿茶酸数据一致，因此确定该化合物为原儿茶酸(protocatechuic acid)，为首次从该植物中分离得到。

化合物8：白色结晶；ESI-MSm/z：123[M+H]+，121[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.76(2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6)，6.93(2H，d，J=8.0Hz，H-3，5)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：128.9(C-1)，132.6(C-2)，116.3(C-3)，163.9(C-4)，116.3(C-5)，132.6(C-6)，191.4(C-7)。以上数据与文献[14]报道基本一致，因此确定该化合物为对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzalde-hyde)。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：112-114.

[2] 屠婕红，余菁，陈伟光.瓜蒌的化学成分和药理作用研究概况[J].中国药师，2004，7(7)：562-563.

[3] 李爱峰，张永清.栝楼的化学成分研究进展[J].安徽农业科学，2012，40(30)：14713-14716.

[4] 刘金娜，温春秀，刘铭，等.瓜蒌的化学成分和药理活性研究进展[J].中药材，2013，36(5)：843-848.

[5] 济南骄泰信息技术有限公司.一种用于治疗胃癌的中药组合物：CN201510103748.9[P].2015-03-10.

[6] 济南骄泰信息技术有限公司.治疗高血压的中药汤剂：CN201510090839.3[P].2015-02-28.

[7] 仝晓刚，程永现.石菖蒲的化学成分研究[J].天然产物研究与开发，2011，23(3)：404-409.

[8] 徐美霞.瓜蒌皮化学成分分离与鉴定[D].泰安：山东农业大学，2013.

[9] 刘天行，郭佳，王伟，等.小米中结合型酚类化合物的分离与鉴定[J].南京农业大学学报，2014，37(1)：138-142.

[10] 陆瑶，李志宏，马林，等.栽培尼泊尔菊三七化学成分的研究[J].中国中药杂志，2014，39(19)：3777-3781.

[11] 冯宝民，刘菁琰，王惠国，等.红火麻化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报，2011，28(5)：364-367.

[12] Lee S J，Kim H M，Lee J M，et al.Artemisterol，a new steryl ester from the whole plant ofArtemisiaapiacea[J].J Asian Nat Prod Res，2008，10(4)：281-283.

[13] 王颖，潘英，邢亚超，等.文冠果种皮化学成分的分离与鉴定[J].中国药物化学杂志，2013，23(5)：397-399.

[14] 王方方，汪冶.仙茅中的3个苯酚类化合物鉴定[J].山地农业生物学报，2012，31(4)：372-373.

PhenolicAcidinStemsandLeavesofMalePlantsinTrichosantheskirilowiiMaxim.

LIUFei1，FANGLei2，LIJia1，ZHANGYongqing1*

(1.SchoolofMedicine，ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine，Jinan250355，China；2.ShandongAnalysisandTestCenter，Jinan250014，China)

Objective：To study the phenolic acid in stems and leaves of male plants inTrichosantheskirilowiiMaxim.and make full use of waste resources in production.Methods：The plant material was extracted with ethanol.The ethanol extract was suspended in a moderate amount of water，extracted successively with petroleum ether，ethyl acetate and n-butanol，and compounds were separated and purified by polyamide resin，Sephadex LH-20，C18 middle-pressure chromatography and semi-preparative high performance liquid chromatography.The chemical structures of the compounds were determined on the basis of the chemical properties and spectral analysis.Results：Eight phenolic acids were isolated from stems and leaves of maleT.Kirilowii，which were identified astrans-cinnamic acid(1)，vanillic acid(2)，trans-ferulic acid(3)，3-(hydroxyacetyl)indole(4)，p-hydroxybenzoic acid(5)，p-Hydroxycinnamic acid(6)，protocatechuic acid(7)，andp-hydroxybenzaldehyde(8).Conclusion：All compounds except compound5were isolated from this part for the first time，and compounds1，3，4，6，and7were isolated from this plant for the first time.It provides a reference for the comprehensive utilization of waste resources in production.

TrichosantheskirilowiiMaxim.；stems and leaves of male plants；phenolic acid；extraction and separation；structure identification

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.003

2015-09-09)

国家科技支撑计划(2011BAI06B06)；山东省科技发展计划项目(2011GSF11904)；公益性行业科研专项(201407002)

*

张永清，博士，教授，博士生导师，研究方向：中药资源及其质量控制；E-mail：zyq622003@126.com