小儿清肺分散片中黄芩苷溶出度测定方法

2016-01-09孙妍,姚琳,李金山等

吉林中医药 2015年3期

小儿清肺分散片中黄芩苷溶出度测定方法

孙妍，姚琳，李金山，王伟明

(黑龙江省中医药科学院中药所，哈尔滨 150036)

摘要：目的建立小儿清肺分散片中黄芩苷的溶出度测定方法。方法采用HPLC法，建立黄芩苷的含量测定方法；采用单因素试验法，以同一时间点的溶出度为指标，分别考察了溶出介质、溶出方式及转速对黄芩苷溶出的影响。结果黄芩苷浓度在0.025～0.125 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为100.41%(n=9)，RSD=2.98%；小儿清肺分散片的溶出条件为采用桨法，以pH值为6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质，转速为75 r/min，取样时间为40 min。结论本方法操作简便，结果准确，重复性好，可作为小儿清肺分散片的溶出度测定方法。

关键词：小儿清肺分散片；黄芩苷；溶出度；色谱法，高压液相

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.03.025

中图分类号：R284文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)03-0297-04

基金项目:黑龙江省中医药科研项目(ZHY12-W027)。

作者简介:孙妍(1981-)，女，硕士研究生，主管药师，主要从事中药新药及质量标准研究。

收稿日期:(责任编辑：张瑞彬2014-08-04)

Method for determination of Baicalin solubility of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet

SUN Yan,YAO Lin,LI Jinshan,WANG Weiming

(Heilongjiang Academy of Traditional Chinese Medicine,Harbin 150036,China)

Abstract:ObjectiveTo establish the method for determination of Baicalin solubility of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet.MethodsHPLC methed was used to determine the content of baicalin;By single factor experiment,at the same time with the solubility as index,investigating the stripping medium,stripping method,stripping speed respectively that effect of baicalin stripping.ResultsBaicalin was linear in the range of 0.025～0.125 mg/mL(r=0.999 9),and the average recovery was 100.41% (n=9) with RSD=2.98%;The digestion conditions of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet is using the paddle,with pH 6.8 artificial intestinal solution,stripping speed 75 r/min,the sampling time is 40 min.ConclusionThis method is accurate,reliable,specific and reproducible,and can be used for the stripping method of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablets.

Keywords:Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet;Baicalin;solubility;HPLC

小儿清肺分散片[1]是由小儿清肺片改剂型而成，小儿清肺片为我院研制的纯中药制剂，用于小儿风热闭肺所致的喘咳及支原体引起的上呼吸道感染等病症，经多年临床验证，对小儿支原体肺炎疗效确切、抗复发、抗耐药作用强、毒副作用小。基于小儿清肺片抗肺炎支原体肺炎的确切疗效及支原体肺炎发病迅速的特点，本研究旨在开发具有抗肺炎支原体肺炎作用的速释制剂。分散片适合于老、幼和吞咽困难的患者[2-3]。分散片能否迅速显效的决定因素是其有效成分的溶出和吸收的速度[4]，为更好地控制药品质量，本试验参照《中国药典》2010年版2部附录XC溶出度测定法,采用高效液相色谱法，建立小儿清肺分散片中黄芩苷的溶出度测定方法。

1实验材料

YP202N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，日本SCL-10A岛津高效液相色谱仪，岛津SPD-10A紫外检测器，BP211D型十万分之一分析天平(赛多利斯有限公司),KQ-300DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，RC806溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)。

黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：715-200111)，小儿清肺分散片(自制，批号：130601、130602、130603)，小儿清肺片(黑龙江省中医药科学院制剂室，批号：130501、130502、130503)，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2含量测定方法的建立[5-10]

2.1色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；检测波长：280 nm；流速:1.0 mL/min；进样量：10 μL。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 000。

2.2对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品12.5 mg，置100 mL量瓶中,加50%甲醇适量，超声使其溶解，放置至室温，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.125 mg/mL的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备取小儿清肺分散片约0.2 g，研细，精密称定，置100 mL量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)30 min,放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性对照溶液的制备取按处方比例配制的缺黄芩药材的阴性样品，同2.3项下供试品溶液制备方法制成黄芩阴性对照溶液。

2.5干扰试验精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件进行测定，结果阴性对照液在与黄芩苷对照品色谱的相应位置上无干扰峰，可见方中其他成分及辅料对测定无干扰。

2.6线性关系考察分别精密吸取2.2项下对照品液5，10，15，20，25 mL于25 mL容量瓶中，用50%甲醇液稀释至刻度，得到浓度分别为0.025，0.05，0.075，0.1，0.125 mg/mL的对照品溶液，按2.1项下色谱条件，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，以黄芩苷峰面积积分值(Y)为纵坐标，黄芩苷进样浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:Y=4 255 613X-224 135.8(r=0.999 9)。表明黄芩苷在0.025～0.125 mg/mL之间呈良好的线性关系。

2.7精密度试验精密吸取浓度为0.05 mg/mL黄芩苷对照品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样6次，每次10 μL,记录黄芩苷峰面积积分值，RSD为0.51%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.8稳定性试验取同一批小儿清肺分散片供试品(130601)，按2.3项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件，分别于0，2，4，6，8，10 h进样，每次10 μL，记录黄芩苷的峰面积积分值，RSD为0.52%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.9重复性试验取同一批小儿清肺分散片供试品(130601),分别精密称取6分，按2.3项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定黄芩苷的含量，结果均值为33.63 mg/g，RSD为0.26%(n=6)。

2.10加样回收试验取已知含量的小儿清肺分散片(批号130601)9分，研细，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品，按2.3项下的方法配制供试品溶液，并按2.1项下色谱条件测定黄芩苷含量，计算回收率和相对标准偏差。结果见表1。

表1　黄芩苷的加样回收率试验结果( n=9)

3溶出度测定方法的建立[11-15]

3.1溶出介质的选择分别以pH值为1.0的人工胃液、2.8的盐酸溶液、4.5的乙酸铵冰乙酸溶液及pH值为6.8磷酸盐缓冲液900 mL作溶出介质,转速为75 r/min，温度为(37±0.5)℃，在30 min时精密吸取5 mL溶出介质，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算黄芩苷溶出度。结果表明黄芩苷在人工肠液中有较好的溶出效果，故选择pH值为6.8的人工肠液作为溶出介质。

3.2溶出方式的选择分别以篮法和桨法进行实验，以pH值为6.8磷酸盐缓冲液900 mL为溶出介质，转速为75 r/min，温度为(37±0.5)℃，在30 min时精密吸取5 mL溶出介质,0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算黄芩苷溶出度。结果桨法的黄芩苷峰面积优于篮法，故采用桨法进行溶出度试验。

3.3转速的选择以pH值为6.8磷酸盐缓冲液900 mL作为溶出介质，温度为(37±0.5)℃，采用桨法进行试验，转速分别为50，75，100 r/min，在30 min时精密吸取5 mL溶出介质，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定,计算黄芩苷溶出度。结果表明，转速为100 r/min时，溶出效果最好，但转速为75 r/min和100 r/min时溶出度差别不大，所以选择转速为75 r/min，进行溶出度实验。

3.4小儿清肺分散片溶出度验证试验依照《中国药典》2010版2部附录XC溶出度第2法进行测定，分别取小儿清肺分散片6片，加入900 mL的经脱气处理的pH值为6.8磷酸盐缓冲液,转速为75 r/min，温度为(37±0.5)℃，分别于5，10，15，20，30，40 min精密吸取5 mL溶出介质，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液,同时补加同温介质5 mL；另取小儿清肺分散片20片,研细，精密称取适量(相当于1片的平均重量)，加入溶出介质超声处理30 min，滤过，取续滤液作为对照液。取上述溶液，按2.1项下色谱条件，分别测定黄芩苷的峰面积，用两者之比计算每片的溶出度，绘制溶出曲线。见图1。

3.5小儿清肺片的溶出度试验依照《中国药典》2010版2部附录XC溶出度第2法测定，取小儿清肺片6片,加入900 mL的经脱气处理的人工肠液，转速为75 r/min，温度为(37±0.5)℃，分别于5，10，15，20，30，40 min精密吸取5 mL介质，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，同时补加同温介质5 mL；另取小儿清肺片20片，研细，精密称取适量(相当于1片的平均重量)，加入溶出介质超声处理30 min，滤过，取续滤液作为对照液。取上述溶液，按2.1项下色谱条件，分别测定黄芩苷的峰面积，用两者之比计算每片的溶出度，绘制溶出曲线。见图1。

图1　小儿清肺片、小儿清肺分散片的累计溶出度曲线

3.6溶出度指标的制定分别取小儿清肺分散片3批(批号:130601、130602、130603)，每批6片，按3.4项下溶出度测定方法试验。结果显示，3批小儿清肺分散片在溶出介质中溶出行为相似，且小儿清肺分散片在40 min时累计溶出率超过90%。为控制本品质量，适当延迟溶出度取样时间及限度，初步确定为40 min时溶出不低于85%。

4讨论

溶出度的检查方法主要包括转篮法、桨法和小杯法等。片剂多采用桨法，因为中药分散片分散后成混悬细颗粒壮溶液，桨法可以避免混悬液堵塞转篮网的筛孔，且试验也证明桨法比转篮法更适用于中药固体制剂。小儿清肺分散片是由小儿清肺片改剂型而成，小儿清肺分散片在15 min累计溶出度达到70%以上，而小儿清肺片在15 min时累计溶出度刚刚达到40%。制成分散片，崩解迅速、有利于药物的溶出，有利于提高药物的血药浓度及生物利用度，方便临床用药，拓展了小儿清肺片的剂型应用范围。

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