张庆英

生莱菔子和炒莱菔子中芥子碱硫氰酸盐的含量测定

张庆英

目的 建立用HPLC法测定生莱菔子和炒制莱菔子中芥子碱硫氰酸盐含量的方法，比较不同产地药材中芥子碱硫氰酸盐的含量，并研究炒制对药材中芥子碱硫氰酸盐含量的影响。方法 以苯基硅烷键合硅胶为填充剂；进样量5 μL；以乙腈-3%冰醋酸溶液(15∶85)为流动相；检测波长326 nm。 结果 芥子碱硫氰酸盐进样量在0.047 2～1.888 0 μg之间有良好线性关系；生莱菔子的加样平均回收率为99.30%，RSD=0.4%(n=6)；炒制莱菔子的加样平均回收率为94.58%，RSD=0.3%(n=6)。结论 本法快速、简便，结果准确、可靠；不同产地药材芥子碱硫氰酸盐含量差异大；炒制后莱菔子中芥子碱硫氰酸盐含量有所增加。

莱菔子；芥子碱硫氰酸盐；HPLC

0 引言

莱菔子为十字花科一年生或两年生草本植物萝卜RaphanussatiouL.的干燥成熟种子，为临床常用药物。具有下气、化痰、消食的作用[1]。莱菔子含有莱菔素(Raphanin)、芥子碱(Sinapine)、亚油酸、植物甾醇等多种成分，其中芥子碱是降压作用的活性成分之一，多以芥子碱硫氰酸盐的形式存在于药材[2-3]，因此，测定芥子碱的含量对控制莱菔子药材质量具有重要意义。莱菔子可生用和炒用，本实验拟建立生莱菔子和炒制莱菔子中芥子碱硫氰酸盐含量的检测方法，并比较炮制对炒制莱菔子含量的影响。

1 试药与仪器

1.1 对照品与试药 莱菔子(9批实验样品来自国内的不同地区，具有代表性和多样性)，芥子碱硫氰酸盐(中国药品与生物制品检定所，批号：111702-200501)，乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他为分析纯。

1.2 仪器 岛津LC-2010A高效液相色谱仪(日本，岛津公司)，SCL-LC-10Avp紫外可见检测器，CLASS-VP工作站CP225D型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，AS20500A型超声波清洗器(天津奥特塞斯仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验[4]苯基柱Agilent ZORBOX SB-phenyl(4.6 mm×250 mm，5 μm)；进样量：5 μL；以乙腈-3%冰醋酸(15∶85)为流动相；检测波长：326 nm。理论板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算应不低于10 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定介子碱硫氰酸盐对照品适量，加70%甲醇制成1 mL含40 μg的溶液(置棕色量瓶内或避光保存)。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得(置棕色量瓶内或避光保存)。精密吸取对照品溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，测定，即得液相色谱图，见图1、图2。

图1 对照品溶液色谱图

图1 供试品溶液色谱图

2.3 线性关系考察 精密量取含介子碱硫氰酸盐对照品溶液(47.20 μg/mL)1、2、5、10、15、20、25、30、40 μL注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y=3 093 622.16 X+10 073.34，r=0.999 9，表明芥子碱硫氰酸盐在进样量0.047 2～1.888 0 μg之间有良好线性关系。

2.4 精密度试验 精密量取含介子碱硫氰酸盐对照品溶液(45.40 μg/mL)5 μL，重复进样5次测定峰面积，RSD为0.5%，精密度良好。

2.5 重复性试验 取同一批号(110716)生莱菔子样品6份，分别按样品含量测定法测定，结果含量平均值为5.102 1 mg/g，RSD为0.4%，表明本品的重复性较好。

2.6 稳定性试验 芥子碱硫氰酸盐对照品溶液和供试品溶液对光不稳定，采用超高效液相色谱进行考察。将对照品溶液和供试品溶液置棕色量瓶内或避光保存，分别于0、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24 h分别进样，考察其稳定性。结果表明：对照品溶液RSD为1.42%，供试品溶液RSD为1.59%，在24 h内基本稳定。

2.7 回收率试验 精密称定已知含量(含芥子碱硫氰酸盐5.102 1 mg/g)的生莱菔子样品6份，精密加入介子碱硫氰酸盐对照品适量，按含量测定法测定得峰面积，并计算含量，平均回收率为99.30%，RSD=0.4%；精密称定已知含量(含芥子碱硫氰酸盐5.410 1 mg/g)的炒制莱菔子样品6份，精密加入介子碱硫氰酸盐对照品适量，按含量测定法测定得峰面积，并计算含量，平均回收率为94.58%，RSD=0.3%。

表1 莱菔子回收率实验结果

表2 炒莱菔子回收率实验结果

2.8 样品含量测定 按所建立的方法，对生莱菔子及炒制莱菔子各9批进行含量测定。结果显示：生莱菔子含量范围在0.35%～0.53%之间，炮制品含量范围在0.39%～0.56%之间，说明炒制后的莱菔子芥子碱硫氰酸盐的含量有所增加。见表3。

3 讨论

3.1 色谱条件的选择

3.1.1 色谱柱[5-7]首先选用普通C18色谱柱，乙腈-3%冰醋酸(15∶85)为流动相，曾试用3根不同品牌的C18色谱柱，通过调整流动相的比例，改变流速等，都未能达到理想的分离效果，对照品峰有拖尾，样品中待测组分峰与相邻杂质小峰未能有效分离。普通色谱柱不理想，试用苯基柱Agilent ZORBOX SB-phenyl(4.6 mm×250 mm)，能够达到有效分离且分离良好。

表3 莱菔子、炒莱菔子含量测定结果(%)

3.1.2 流动相 在确定上述色谱条件基础上，试图降低流动相酸度，依次用2%冰醋酸、1%冰醋酸代替上述流动相中的3%冰醋酸进行试验，结果显示，随着酸性的减低，峰变宽，峰形变差。通过以上实验，确定采用苯基色谱柱，流动相为乙腈-3%醋酸溶液(15∶85)。

3.2 提取溶剂的考察 芥子碱硫氰酸盐虽然也易溶于水，但是样品很难滤过，芥子碱硫氰酸盐在甲醇、乙醇中有较好的溶解度[8]，所以选择不同浓度甲醇、乙醇溶液试验。乙醇系列作为提取溶媒时，结果显示，70%乙醇含量最高，但重复性稍差，有时色谱图中有小杂质峰出现。甲醇系列作为提取溶媒时，80%甲醇含量最高；但是，80%甲醇作为提取溶媒时，溶液呈乳白色，难以滤过，滤过时间长，溶媒蒸发，使含量偏高，可能致使结果不准确。最终决定采用70%甲醇作为提取溶媒。 结果表明，采用HPLC法测定不同产地的生莱菔子和炒制莱菔子，具有快速、简便、准确的特点；不同产地的药材芥子碱硫氰酸盐的含量有较大差异；本次研究采购的9批药材，炒制后的莱菔子芥子碱硫氰酸盐的含量均有所增加，增加机制有待进一步研究。

[1] 徐国钧.中国药材学[M].北京:中国医药科技出版社,1996:1229-1231.

[2] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学出版社,2000:1801-1802.

[3] 谭鹏,薛玲,吕文海.莱菔子不同炮制品对呼吸系统作用的实验研究[J].山东中医杂志,2005,24(5):300.

[4] 谭鹏,姜虹玉,吕文海.莱菔子研究概况[J].中医药杂志,2005,21(4):254-255.

[5] 戴金玉,赖增发.HPLC法测定妇乐颗粒中芥子碱硫氰酸盐的含量[J].中国实验方剂学杂志,2005,11(4):13-14.

[6] 兰保强,谭潇,邱宏聪.HPLC测定生骨颗粒中芥子碱硫氰酸盐的含量[J].华西药学杂志,2006,22(3):349-350.

[7] 李健,杨涛,宋毅,等.HPLC测定气滞胃痛颗粒中的延胡索乙素[J].华西药学杂志,2008,23(3):375.

[8] 赵杰余,刘金来,李笑慧,等.HPLC法测定“冬病夏治”贴膏中芥子碱硫氰酸含量[J].海峡药学,2013,15(8):78-80.

Determination of sinapine thiocyanate in raw and frying Semen Raphani

ZHANG Qing-ying

(Liaocheng Vocational and Technical College,Shandong 252000,China)

Objective To establish a method for content determination of raw and frying semen raphani,compare the content of samples from different regions of sinapine thiocyanate,and explore the effect of frying on sinapine thiocyanate.Methods Phenyl silane bonded silica column was used.The flow rate was 5 μL.The mobile phase was acetonitrile-3%acetate(15∶85).The detection wavelength was set at 326 nm.Results The linear range of sinapine thiocyanate was 0.047 2～1.888 0 μg.The average recovery of raw semen raphani was 99.30%,RSD=0.4%(n=6),and the average recovery of frying semen raphani was 94.58%,RSD=0.3%(n=6).Conclusion The method is rapid,simple,accurate,and reproducible.It has marked discrepancy in the content of samples from different regions.Frying Semen Raphani can increase the content of Sinapine thiocyanate.

Semen Raphani；Sinapine thiocyanate；HPLC

2014-07-22

聊城职业技术学院，山东 252000

聊城职业技术学院院级科研课题(2012lzyk17)

10.14053/j.cnki.ppcr.201503019

*通信作者