钟红兰，苏潮品，林云斌，申 健，陈铁钎，秦 冰

(广东省生物制品与药物研究所，广东 广州 510440)



盐制柚核炮制工艺研究

钟红兰，苏潮品，林云斌，申 健，陈铁钎，秦 冰

(广东省生物制品与药物研究所，广东 广州 510440)

目的：筛选盐制柚核的最佳炮制工艺。方法：采用紫外分光光度法测定盐制柚核中柠檬苦素含量，以烘制温度、烘制时间和浸盐量为考察因素，采用正交试验设计对盐制柚核的炮制工艺进行优选。结果：浸盐量为2%，在70℃下烘烤60min为最佳炮制工艺。结论：正交试验确定的盐制柚核炮制工艺合理可靠，稳定性好，可为大批量生产提供参考依据。

盐制柚核；柠檬苦素；炮制工艺；正交设计

柚核为芸香科柑橘属植物柚(Citrusgrandis(L.)Osbeck)干燥成熟的核(种子)，性平、温，味苦，归肝经，具有疏肝理气、宣肺止咳的功效，临床可用于治疗疝气、咳嗽、呃逆等疾病[1]。其来源和功效与橘核(芸香科柑橘属植物橘及其栽培变种的干燥成熟种子)相似，关于橘核历代有多种炮制方法，在2010版《中华人民共和国药典》也有规定其炮制方法：盐橘核(盐水炙法)[2]。但历代均没有记载关于柚核的炮制方法，而临床和其他行业又常常会用到柚核。为促进传统中药的综合开发，更好地利用药用资源，变废为宝，有必要对柚核的炮制工艺进行研究，为其临床使用提供科学依据。现代研究表明，柚核的主要活性成分和橘核相似，主要为柠檬苦素类化合物[3]。故本研究参照橘核(盐炙法)的炮制方法，但考虑到盐炙药材加热温度不宜过高，因此对该方法进行改良，采用烘箱烘烤的方法使盐分渗入到药材内部。采用正交试验对柚核的最优炮制工艺进行筛选，现报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

722型可见分光光度计(上海菁华科技)；Denver Instrument Company AA-200型分析天平(美国产)；HX1001T电子天平(慈溪市天东衡器厂)；TG-16高速离心机(巩义市宇华仪器)；XW-80漩涡混合器(上海医科大学仪器厂)；HK-电热恒温干燥箱(智能电脑，广州市旭郎机械)；微型植物试样粉碎机。

1.2 试剂

柠檬苦素对照品购于北京德威钠生物技术有限公司(含量(HPLC)为99.3%)；所用试剂均为分析纯：无水乙醇、石油醚(60～90℃)、硫酸、三氯化铁、丙酮、对二-甲氨基苯甲醛；纯化水。

反应液：125mg对二甲氨基苯甲醛溶解于100mL硫酸-无水乙醇混合液(硫酸65mL，无水乙醇35mL，放冷使用)中，加入0.5mL 0.9%三氯化铁溶液，现配现用。

1.3 实验原料

柚核为梅州产沙田柚的果核，经鉴定为芸香科柑橘属植物柚(Citrusgrandis(L.) Osbeck)干燥成熟的核(种子)，于50℃下烘干至恒重，保存于干燥环境中。

2 方法

2.1 柠檬苦素标准曲线制备

精密称取柠檬苦素对照品1.30mg于100mL容量瓶中，用无水甲醇配成130μg/mL标准工作液。在6支刻度试管中分别加入0、0.5、0.8、1.2、1.5、2.0mL标准溶液，分别加无水乙醇至2.0mL，再分别加入反应液5.0mL，摇匀，静置30min，于500nm波长下测定吸光度[4]。以空白溶液(精密吸取2.0mL无色乙醇，加入反应液5.0mL)为参比溶液，以标准品加入量为横坐标，吸光度为纵坐标，采用直线回归方法计算出标准曲线的回归方程，并绘制标准曲线(见图1)，结果表明，柠檬苦素线性范围为9.291 6～37.166 6μg/mL，回归方程为Y=0.0177X+0.269，R2=0.997 6(Y：吸光值，X：标准品相当量) 。

图1 标准曲线

2.2 盐制柚核制备

取生柚核9份，每份100g，将药材平铺于托盘中，厚度约为2cm，分别加盐水30mL至密闭容器内拌匀，焖润2h，待盐水全部吸干后将药材放入烘箱内烘制。根据预实验结果可知低温烘制即可获得稳定的实验结果，故烘制温度不宜过高。选择正交试验因素为加盐量(A)、烘制温度(B)、烘制时间(C)，每个因素取3个水平(见表1)，采用L9(34)正交表[5]安排实验。

表1 盐制柚核因素水平

注：加盐量(%)为质量分数，即每100g柚核中盐用量克数。

2.3 柠檬苦素类物质总量测定

2.3.1 样品液制备 取柚核炮制品10g，粉碎，过40目筛。精确称取0.2g供试品(精确到0.001g)于10mL刻度试管中，加2mL石油醚，涡流混合3min，于4 000r/min条件下离心，吸走石油醚提取物，再加入适量石油醚重复以上操作，至提取物无色为止。试管中的剩余物中加入2mL丙酮，涡流提取3min，4 000r/min条件下离心，收集上清液，再加入丙酮重复以上操作数次。丙酮提取物用无水乙醇定容至10mL，待测[6]。

2.3.2 含量测定 精密吸取2.0mL样品制备液，测定其吸光度，根据标准曲线计算柠檬苦素含量，按照下列公式计算出原料中柠檬苦素类似物的含量。结果见表2，方差分析见表3。原料中柠檬苦素类似物含量(%)=(10C/LM)×100(其中C：检测值；L：样品加入体积；10：样品制备定容体积；M：样品质量)。

表2 正交试验表及实验结果

注：最佳条件为A2B2C1。

表3 正交实验(方差分析)

注：F0.05(2,2)=14.434。

2.3.3 最佳炮制工艺验证实验 按照最佳炮制工艺A2B2C1制备3批盐制柚核样品，每批100g，测定其中柠檬苦素类物质总量。结果见表4。

表4 3批盐制柚核烘制实验 (mg/L)

3 结论

实验结果显示，以柠檬苦素为考察指标，盐制柚核的最佳炮制工艺A2B2C1，即生柚核加2%盐水拌匀，焖润2h，待盐水全部吸干后置于70℃烘箱烘制60min，取出，放凉。其中各因素对柠檬苦素含量的影响由大到小依次为：烘制时间>浸盐浓度>烘制温度。

4 讨论

目前，中药材炮制工艺大多缺乏科学合理的技术参数，而柚核作为一种常用中药，在历版药典及古籍中均未收载其炮制方法。柚核在抗癌、抗氧化、抑菌、抗炎、镇痛、抗病毒等方面的功效备受关注，其提取物不仅可作为食品风味改良剂和添加剂应用在食品工业，亦可用于化妆品行业[6]。因此，对柚核炮制工艺的研究具有重要意义。

[1] 南京中医药大学.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1985:2225-2226.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2015.

[3] 钟红兰,苏潮品,林云斌,等.中药柚核(种子)研究进展[J].亚太传统医药,2014,10(8):38-40.

[4] 田庆国,丁霄霖.测定橘核中柠檬苦素中柠檬苦素类似物的分光光度法[J].分析测试学报,1999,18(9):45-47.

[5] 付志玲,房敏峰,王启林,等.烘法炮制苦杏仁工艺及影响因素研究[J].云南民族大学学报:自然科学版,2010,19(2):140-142.

[6] 徐玉娟,施英,肖更生,等.橘核中柠檬苦素类物质测定方法的研究[J].现代食品科技,2007(2):80-81.

(责任编辑：尹晨茹)

Study on the Processing Technology of Pomelo Nuclear by Salty Water

Zhong Honglan，Su Chaopin，Lin Yunbin，Shen Jian，Chen Tieqian，Qin Bing

(Guangdong Provincial Institute of Biological Products and Materia Medica，Guangzhou 510440,China)

Objective:To optimize the processing technology of Pomelo nuclear by salty water through orthogonal test. Methods:Ultraviolet spectrophotometry was applied to determine the limonin content,which was extracted from processed Pomelo nuclear,and the processing was designed by orthogonal design,selecting three factors: soaking temperature, time and salt solution.Results:The best sample was soaked by 2% salt solution at 70℃ for 60minutes.Conclusion:The processing of Pomelo nuclear by salty water is reasonable and reliable and has a practical applicability.

Pomelo Nuclear Processed by Salty Water;Limonin;Processing Technology;Orthogonal Design

2015-06-26

广东省建设中医药强省立项课题(20122183)

钟红兰(1965-)，女，广东省生物制品与药物研究所副主任中药师，研究方向为预防药物及中药质量标准。

R282.02

A

1673-2197(2015)22-0036-02

10.11954/ytctyy.201522015