汪 晶，吴晓燕

(1.江苏省中医药研究院，江苏 南京 210028；2.南京市鼓楼医院，江苏 南京 210046)



复方益气止咳颗粒质量标准研究

汪 晶1，吴晓燕2*

(1.江苏省中医药研究院，江苏 南京 210028；2.南京市鼓楼医院，江苏 南京 210046)

目的：建立复方益气止咳颗粒的质量标准。方法：采用双波长高效液相色谱法(HPLC)同时测定颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖苷及橙皮苷的含量；采用薄层色谱法(TLC)对方中黄芪、陈皮、白术成分进行定性鉴别。结果：薄层鉴别的色谱斑点清晰，阴性对照无干扰；毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷分别在5.5～220μg·mL-1、10.7～428μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为94.5%、102.34%。结论：该方法具有简便、准确及专属性强的特点，可用于复方益气止咳颗粒的质量控制。

橙皮苷；黄芪甲苷；白术；薄层色谱；高效液相色谱；质量控制

复方益气止咳颗粒是由黄芪、陈皮、白术、鸡内金等中药饮片加工制备的颗粒剂，处方源于医院临床经验方，具有健脾补肺、化痰止咳、益气固表的作用，疗效显著，主治脾肺气虚之证，如临床咳嗽痰多、气喘、食少纳呆、腹胀便溏等多见症状。本研究采用薄层色谱法对方中黄芪、陈皮、白术成分进行了定性鉴别，同时采用高效液相色谱法对制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷及橙皮苷进行含量测定，为进一步提升该制剂的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695高效液相色谱仪；Sartorius BP211D电子分析天平；硅胶G薄层板(青岛海洋化工10cm×10cm；10cm×20cm)；超声仪AS3120A(天津奥特赛恩斯)；水浴锅(郑州科创仪器有限公司)；暗箱紫外分析仪(上海精科实业有限公司)。

1.2 材料

黄芪甲苷(批号110781-200813)，橙皮苷(批号110721-201011)，毛蕊异黄酮葡萄糖苷(批号：111920-201004)，白术对照药材(批号120925-201003)，均购于中国食品药品检定研究院；复方益气止咳颗粒(三批,批号140511；140518；140525，院内自制)；乙腈(美国天地)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC薄层鉴别

2.1.1 黄芪 取本品颗粒6g，平行三份操作，加甲醇50mL，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL，加热使溶解，待冷却后加入水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30mL，合并正丁醇液，正丁醇液加浓氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去洗涤液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。按供试品溶液制备方法制备无黄芪药材的阴性对照溶液；精密称取黄芪甲苷对照品，加入甲醇制成1mg·mL-1的对照品溶液。按薄层色谱法《中国药典》(2010版)一部附录(附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液及黄芪甲苷对照品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10℃以下放置的三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)下层溶液为展开剂，展开，展距12cm，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，于105℃加热3～5min至斑点显色清晰。结果显示：在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的橙黄色荧光斑点，阴性样品无斑点[1-2]。薄层色谱见图1。

1.对照品(对照药材)；2.样品140511；3.样品140518；

2.1.2 陈皮 取本品颗粒6g，平行三份操作，加甲醇50mL，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10mL使溶解，作为供试品溶液；按供试品溶液制备方法制备无陈皮药材的阴性对照溶液；精密称取橙皮苷对照品，加入甲醇制备0.5mg·mL-1的对照品溶液；按照薄层色谱法《中国药典》(2010版)一部附录(附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液及橙皮苷对照品各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂，展开4cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)上层溶液为展开剂，展至约10cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果显示：在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无斑点[3]。薄层色谱见图1。

2.1.3 白术 取本品颗粒6g，平行三份操作，加甲醇50mL，回流提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，水溶液加入正己烷萃取2次，每次20mL，合并正己烷萃取液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；同法制备白术对照药材溶液及缺白术药材阴性对照品溶液。按照薄层色谱法《中国药典》(2010版)一部附录(附录VIB)试验，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(10∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热，置紫外光灯(365nm)下检视。结果显示：在供试品色谱中，与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性样品无斑点[4-5]。薄层色谱见图1。

2.2 HPLC含量测定

2.2.1 色谱条件及系统适应性试验 采用Waters C18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱；以乙腈(A)-0.4%乙酸水(B)为流动相，按表1进行梯度洗脱，流速1mL·min-1，检测波长为260nm、280nm，柱温30℃。在该色谱条件下，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的保留时间为21.2min，橙皮苷的保留时间为33.16min，分离度均大于1.5，样品中其他成分对其测定无干扰。色谱见图2。

表1 梯度洗脱

A.对照品色谱图；B.样品色谱图；1.毛蕊异黄酮葡萄糖苷；2.橙皮苷

图2 HPLC液相色谱

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖及橙皮苷对照品适量，加甲醇制备毛蕊异黄酮葡萄糖苷浓度为220μg·mL-1、橙皮苷浓度为428μg·mL-1的混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品颗粒，研细，称量2g颗粒，精密称定，至25mL中具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇，超声提取60min，放冷至室温，精密称定，补足挥发的甲醇量，过滤，取续滤液，微孔滤膜过滤，即得。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、5.0mL至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成不同浓度对照品溶液，分别精密吸取不同浓度对照品及混合对照品母液10μL，进样测定，以峰面积为纵坐标(Y)，对照品质量浓度(μg·mL-1)为横坐标(X)，绘制标准曲线。结果见表2。

表2 标准曲线结果

2.2.5 精密度试验 精密吸取毛蕊异黄酮葡萄糖苷及橙皮苷对照品溶液10μL，在上述色谱条件下，重复进样6次，分别测定其峰面积，结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷及橙皮苷峰面积的RSD(n=6)分别为0.93%、0.87%。结果表明精密度良好。

2.2.6 重复性试验 精密称取同一批样品，按“2.2.3”项供试品溶液方法平行制备供试品溶液6份，在上述色谱条件下分别进样测定，结果供试品供试品中毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均质量浓度为12.4μg·mL-1，RSD为1.27%；橙皮苷的平均质量浓度为153μg·mL-1，RSD为1.35%。 结果表明重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，在上述色谱条件下进样测定，其中，毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD(n=6)为2.10%；橙皮苷峰面积的RSD(n=6)为1.96%。结果表明：供试品溶液中毛蕊异黄酮葡萄糖苷及橙皮苷在室温条件下24h内测定结果稳定。

2.2.8 加样回收率试验 取1g颗粒，精密称定，加入至10mL容量瓶中，分别精密加入含有等量对照品成分的溶液，按“2.2.3”项方法制备供试品溶液，平行6份，分别精密吸取上述供试品溶液各10μL，在上述色谱条件下进行测定，计算回收率和RSD。结果显示：毛蕊异黄酮葡萄糖苷的平均回收率为94.5%，RSD为3.23%；橙皮苷的平均回收率为102.34%，RSD为2.17%。

2.2.9 样品含量测定 取3批颗粒样品，按“2.2.3”项方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定，每批次平行3份。计算每批次样品中指标性成分的质量浓度。结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

通过对毛蕊异黄酮葡萄糖苷[6]及橙皮苷进行紫外扫描图谱分析，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的最大吸收波长为260nm，橙皮苷的最大吸收波长为283nm；采用单波长直接测定两种成分结果发现，在260nm条件下，橙皮苷峰形较差；在283nm条件下，样品中其他成分影响毛蕊异黄酮葡萄糖苷的测定，故采用双波长检测方法同时测定两种成分含量[7]。

黄芪为方中君药，传统质控指标为皂苷类成分，对其黄酮类物质质量控制研究较少，本研究采用HPLC同时测定黄芪中黄酮类成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷及陈皮中橙皮苷的含量；同时采用薄层色谱法建立了复方益气止咳颗粒中黄芪、陈皮、白术三种饮片的鉴别方法，结果准确、方便，重现性好，为全面建立复方益气止咳颗粒的质量标准提供了参考依据。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:283.

[2] 张玉东，徐士云. 益气养血口服液中黄芪的薄层色谱鉴别法探讨[J].中成药，2007，29(10):1560-1561.

[3] 戴敬,杨晓婧,郝培培,等.女金丸薄层色谱鉴别方法研究[J].中成药,2010,32(11):2021-2025.

[4] 李伟,文红梅,崔小兵,等.白术的化学成分研究[J].中草药，2007，38(10):1460-1462.

[5] 寿旦,俞忠明,章建民.改良的白术药材薄层色谱鉴别研究[J].中华中医药学刊,2011,29(3):535-537.

[6] 石子仪,鲍忠,姜勇,等.不同来源黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的定量分析[J].中国中药杂志,2007,32(9):779-783.

[7] 孙冬梅,毕晓黎,胥爱丽,等.HPLC法测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(11):1-3.

(责任编辑：李岚春)

Study on Quality Standard of Fufang Yiqi Zhike Granule

Wang Jing1,Wu Xiaoyan2*

(1.Jiangsu Provincial Academy of Chinese Medicine, Nanjing 210000,China; 2.Nanjing Drum Tower Hospital,Nanjing 210000,China)

Objective:To establish a quality standard for Yiqi Zhike Granule.Methods:Radix Astragali, Citri Reticulatae Pericarpium and Atractylodis Macrocephalae Rhizoma were identified by thin layer chromatography(TLC). Calycosin 7-O-β-D-Glucopyranoside and Hesperidin were determined by high performance liquid chromatography(HPLC). Results:TLC chromatographic spots were clear, without the interference of negative control.Calycosin 7-O-β-D-Glucopyranoside and Hesperidin were separated well and the linearity range of them were 5.5～220μg·mL-1, 10.7～428μg·mL-1, the average recovery were 94.5%, 102.34% respectively.Conclusion:the method was simple, accurate and with good specificity, which can be used for the quality control of the Yiqi Zhike Granule.

Hesperidin; Astragaloside; Atractylodis;TLC; HPLC;Quality Control

2015-09-17

国家自然科学基金(81403121)

汪晶(1986-)，男，江苏省中医药研究院实习研究员，研究方向为中药学。E-mail：wangjing3968@gmail.com

吴晓燕(1983-)，女，南京市鼓楼医院药师，研究方向为药剂学。E-mail：wxypharmacy@126.com

R284

A

1673-2197(2015)22-0017-03

10.11954/ytctyy.201522007