徐培培　马　强

（1江苏省如东县农产品质量检测中心　226400；2苏州大学卫生与环境技术研究所）

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使用高效液相色谱仪检测蔬菜农药残留的几点体会

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（1江苏省如东县农产品质量检测中心226400；2苏州大学卫生与环境技术研究所）

本文主要从农产品的前处理、使用器皿、流动相及色谱使用前的预处理等几个方面介绍高效液相色谱仪的正确使用和日常维护。

高效液相色谱仪；农产品；正确使用；日常维护

高效液相色谱仪是分析实验室常用的测试仪器之一，其应用越来越广泛。在使用过程中，若使用方法不当会导致分析数据错误，直接影响所测数据的准确性和仪器的正常工作。农产品质量安全现在越来越受到广大消费者的重视，本文主要介绍在使用高效液相色谱仪测定农产品农药残留时，前处理需要注意的事项。

1　农产品的前处理环节

检测时需称取样品25.00g。新鲜刚粉粹的样品可直接称取；解冻后的样品，在称取时应先混匀解冻液和解冻物再称取。加入乙腈进行匀浆的过程，每次匀浆完1个样品应彻底清洗匀浆机，匀浆的时间和频率一定要按标准操作。加盐过滤后，1批样品需同时摇匀和静置，保证摇匀次数和静置时间一样，确保平行性。静置后吸取定量溶液置于烧杯中，可以进行蒸干或风干。蒸干时应确保有1～2滴溶液的状态，避免完全蒸干，否则会损失农药残留的量。蒸干操作不熟练，可采用风干方法。在过净化柱的环节，应先清洗净化柱，操作过程中应确保净化柱的海绵部分不能过干，要使溶液与海绵上部分相切。甲醇定容环节，应采用少量多次方法用甲醇清洗烧杯进行定容，以确保农药残留量不会损失。

2　仪器使用时对环境的要求

使用高效液相色谱仪时，控制环境温度在4～35℃，操作期间应尽量降低温度变化幅度，防止形成露珠；环境相对湿度保持45%～85%；保证通风良好，没有酸性或碱性气体，没有溶剂蒸汽。仪器不可直接暴露在阳光下，保持环境整洁，避免强烈振动和晃动。

3　使用器皿的选择及清洗

高效液相色谱仪对环境条件特别敏感，实验器具应保持洁净，否则影响实验结果的准确性。有些样品会在试管壁、烧杯壁吸附残留，每次使用的烧杯、试管都应进行超声清洗，后用蒸馏水清洗、烘干。测定标准样品，浓度较高，进样针最好专针专用，每次用完后用甲醇进行浸泡、清洗。

4　色谱分析前的准备工作

采用高效液相色谱分析法，最常用紫外检测器，因此所用溶剂的吸光度要非常小，可使用甲醇、乙醇、乙腈等。有机溶剂空气含量高，在未使用失效的流动相时，应尽量除去溶解在流动相中的气体，否则基线会因为气泡干扰、单向阀的故障、柱效降低而产生波动。分析前，重视色谱柱的预处理和平衡过程。实验前，首先用纯甲醇进行排气、冲洗色谱柱和管路30min左右，将色谱柱中的纯有机溶剂替换掉，然后再用所需流动相进行足够时间的平衡，大约1h。在色谱柱平衡30min时打开检测器，平衡近1h时打开色谱工作站，点击查看基线是否走平直，基线走平直后方可进行分析检测，以保证检测结果的准确性和保留时间的重复性。调流速时，要按小梯度向上调节，缓慢进行，直至调到所需流速。分析前的流动相脱气、色谱管路及泵内排气非常重要，否则在实验过程中就会造成检测器噪声加大、泵的流速不稳、压来回波动很大、降低柱效、检测器采集的图像基线很难稳定和走直、出现基线漂移和波动、色谱峰面积不重现，最终影响峰面积的读取。

5　色谱分析过程中操作进样

手动进样，样品要通过0.45um的过滤器进行过滤，除去样品中外来的物质和灰尘。若样品杯中有上次进样时的样品残留，应先在LOAD位置时，以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次，然后将进样阀板手扳至INJECT位置，再以流动相清洗几次，再将样品注射到进样阀里。按照上述步骤操作，可避免由进样阀引起的污染，从而消除干扰峰并提高分析结果的准确性。

6　数据和图像结果分析

色谱工作站的积分设置方式有两种：一种是自动积分，一种是手动积分。要将两者积分方法有效结合使用。

7　高效液相色谱议的日常维护

色谱分析结束后，应及时清洗色谱柱。用纯甲醇溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，清理30min以上，色谱柱中不可进入含有微粒的样品。高压泵在有气泡时，功能正常，在更换试剂瓶或给瓶中添加溶剂时必须停泵。若不经常使用色谱仪，也应定期清洗色谱柱，每月清理1次，每次30min以上。每4个月用超声波清洗机清洗溶剂过滤器。

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