李景然，童克婷，朱健生(安徽医科大学，合肥230032)

HPV E6/E7 mRNA联合液基薄层细胞学检测在宫颈病变中的诊断价值

李景然，童克婷，朱健生(安徽医科大学，合肥230032)

摘要：目的评价人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测联合液基薄层细胞学(TCT)方法在宫颈病变中的诊断价值。方法对750例高危型HPV DNA阳性患者分别进行TCT、HPVE6/E7 mRNA检测和阴道镜病理活检，比较HPV E6/E7 mRNA在各宫颈病变中阳性率的差异，以及比较单独检测和联合检测在宫颈病变中诊断价值的差异。结果750例高危型HPV阳性患者进行阴道镜活检检出宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌293例，E6/E7 mRNA阳性患者占286例，各种宫颈病变(意义不明不典型鳞状细胞、低度鳞状上皮内瘤变、高度鳞状上皮内瘤变、鳞状癌变)患者HPV E6/E7 mRNA阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。单用TCT检出CIN阳性256例，单用E6/E7 mRNA检出CIN阳性247例，两者比较无统计学差异，单用TCT或E6/E7 mRNA检测出CIN阳性率均低于联合检测(P均<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA检测联合TCT方法可降低宫颈病变的漏诊率，优于单独检测。

关键词：宫颈病变；人乳头瘤病毒；液基细胞学

研究证实，人乳头瘤病毒(HPV)持续感染宫颈上皮是宫颈癌发生的主要原因，HPV E6/E7 mRNA较人类乳头瘤病毒L1蛋白或人类乳头瘤病毒颗粒特异性更高，且E6/E7 mRNA可以体现HPV致癌基因的活动程度。液基薄层细胞学(TCT)是一种单层细胞涂片筛查技术，其具有高效性、高质性，结果清晰明了，并且采用TBS系统报告的报告方式，利于临床医生考虑患者病情时参考病理学结果。本文探讨了HPV E6/E7 mRNA检测联合TCT方法在宫颈癌早期筛查中的诊断价值。现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料选择2013年1～6月安徽医科大学附属医院收治的750例高危型HPV阳性患者，年龄25～60(41.2±5.6)岁，其中<30岁165例、30～40岁260例、>40～50岁254例、>50～60岁48例、>60岁23例。已婚624例，未婚126例。有生育史615例，无生育史135例。怀孕次数为8(2±1)次，均有性生活史。

1.2方法

1.2.1宫颈病变的TCT检查检查前3 d内不得使用阴道内药物，不得冲洗阴道，1 d内无性行为，生理期不得检查。用颈管刷收集颈管的脱落细胞，用塑料刮板收集宫颈外口的脱落细胞，将细胞轻轻洗入预先盛有Thin Prep细胞保存液的瓶子内[1]，经Thin Prep2000系统处理，将细胞与体液进一步分离，制成约2 cm的细胞薄层涂片，95%乙醇固定，巴氏染色。细胞学诊断采用TBS分级系统，分为未见上皮内细胞病变(NILM)、意义不明不典型鳞状细胞(ASCUS)、低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)细胞、高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)细胞、鳞状癌变(SCC)细胞、腺上皮内意义不明的非典型腺细胞[2]和腺癌细胞。以阴道镜活检诊断结果为金标准。用细胞学分析结果与标准及HPV E6/E7进行对照，细胞学阳性诊断包括ASCUS以上病变并进行分级，其准确性与组织学相差范围为一级的原则，并且各种检测均双盲进行。进行阴道镜活检后若发现以上细胞进行分级处理。

1.2.2宫颈病变的病理学检查阴道镜下对病变最严重处多点取材活检。阳性病理诊断:宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌,以病理学诊断CIN以上病变为金标准。

1.2.3宫颈病变的HPV E6/E7 mRNA检测标本处理：将TCT检测后剩余标本，离心弃上清液，用2 mL蒸馏水清洗后再次离心，弃上清液[3]，加入裂解剂(lysis mixture与proteinase K按1∶800混合，Diacarta公司，美国)，65 ℃水浴30 min，得到裂解液，待测[4]。可检测HPV的16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、66亚型的E6/E7 mRNA的基因片段。

1.2.3统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计数资料采用百分数表示，组间比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1750例高危型HPV阳性患者阴道镜病理活检结果见表1。377例NILM中检出CIN阳性37例，373例TCT阳性患者中检出CIN阳性248例，宫颈癌8例。

表1　750例高危型HPV阳性患者阴道镜病理活检结果(例)

2.2TCT检测出HPV E6/E7 mRNA的阳性数 见表2。不同宫颈病变中E6/E7 mRNA的阳性率比较有统计学差异(P<0.05)。

表2　TCT检测出HPV E6/E7 mRNA的阳性数及拷贝数

2.3病理学检查出HPV E6/E7 mRNA阳性数及拷贝数见表3。不同宫颈病变E6/E7 mRNA的阳性率及拷贝数比较差异均有统计学意义。

表3　病理学检查出HPV E6/E7 mRNA阳性数及拷贝数

2.4TCT或HPV E6/E7 mRNA单独检测与联合检测宫颈病变的比较见表4。

表4　TCT或E6/E7 mRNA单独检测

注：与联合检测比较，*P<0.05。

3讨论

美国阴道镜和宫颈病理学会发布的《子宫颈癌筛查异常妇女处理共识指南》中明确规定应定期用HPV-DNA分型检测方法对30岁以上的妇女进行宫颈癌筛查。在检测过程中，发现HPV-DNA分型检测过程中出现较高的假阴性现象，而且假阴性现象随着年龄增长而增加[3]。早期病毒癌基因为HPV的编码区中E6/E7基因，病毒侵染宿主细胞后，HPV DNA自动整合到宿主细胞的DNA中，癌基因会高速表达，是癌细胞急速扩散的主要原因。癌基因的转录产物E6/E7 mRNA反映了基因表达的活性，因此，对癌基因E6/E7 mRNA的检测可以了解癌基因是否整合到宿主DNA上，转录是否受到抑制。研究证实HPV的基因表达只有一条途径[4](先转录，再翻译)，因此，检测E6/E7 mRNA是了解HPV表达情况的有效途径，其将是研究宫颈癌的主要方式。TCT可以有效地提高宫颈癌的准确率，排除假阴性患者[5]。

本研究证实，各种宫颈病变患者HPV E6/ET mRNA阳性率差异有统计学意义。单独采用HPV E6/ET mRNA检查，有假阴性的存在。而TCT联合HPV E6/ET mRNA检测CIN及宫颈癌的阳性率高于单独TCT或HPV E6/ET mRNA。提示TCT联合HPV E6/ET mRNA既能掌握癌基因的活性状态，又能了解细胞病变程度。互相弥补不足，提高了诊断效能。

参考文献：

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[4] Benevolo M， Terrenato I， Mottolese M， et al. Diagnostic and prognostic validity of the human papillomavirus E6/E7 mRNA test in cervical cytological samples of HC2-positive patients[J]. Cancer Causes Control， 2011，22(6):869-875.

[5] 芮平.HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学对宫颈癌筛查的临床价值[J].中国性科学，2012，21(7):48-50.

(收稿日期:2014-02-06)

通信作者：朱健生

中图分类号：R737.33

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2015)09-0052-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.09.020