马力　杨自建　周元陵　李秀菊

(复旦大学附属金山医院职业病科，*急诊科，上海　200540)



·论著·

神经元特异性烯醇化酶在急性有机磷中毒患者血清中的动态变化及临床意义

马力杨自建*周元陵李秀菊

(复旦大学附属金山医院职业病科，*急诊科，上海200540)

摘要目的：探讨急性有机磷中毒患者血清神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)的变化及临床意义。方法： 选择90例急性有机磷中毒患者作为病例组，另选90例健康成人作为对照组。180例研究对象均于入院即刻采集静脉血3.0 mL；除第1天病死的8例患者外，其余172例研究对象均于第2、3、5、7 天分别采集静脉血3.0 mL。采用酶联免疫吸附法测定血清NSE浓度；采用光电比色法测定血清胆碱酯酶(ChE)浓度。 结果：病例组中8例患者于入院当日病死，其NSE及ChE血清浓度分别为(131.72±10.84) ng/mL、 (199±228)U/L。病例组中其余82例患者入院后第1、2、3 天血清NSE的平均水平分别为(54.56±5.46) ng/mL、(36.18±5.27) ng/mL、(20.56±4.64) ng/mL，对照组相应时间点的NSE浓度分别为(9.72±3.92) ng/mL、(9.48±3.66) ng/mL、(9.86±3.62) ng/mL，两组间差异均有统计学意义(P<0.01)。病例组82例患者入院后第1、2、3 天血清ChE的平均水平分别为(1628.60±112) U/L、(2113.59±324) U/L、(2474.75±711) U/L，对照组相应时间点的ChE浓度分别为(5982±215) U/L、(5651±136) U/L、(5783±764)U/L，两组间的差异均有统计学意义(P<0.01)。入院第1、2、3 天轻、中、重度中毒患者的NSE浓度与ChE浓度呈显著负相关，与中毒程度呈正相关，相关系数(rs)>0.05，P<0.05。结论：血清NSE可作为诊治急性有机磷中毒的参考指标。

关键词有机磷中毒；神经元特异性烯醇化酶；胆碱酯酶

世界范围内每年有3 000 000例有机磷中毒事件，约致300 000例患者死亡[1-2]。有机磷可抑制体内胆碱酯酶(cholinesterase，ChE),导致胆碱能神经递质代谢紊乱，引起毒蕈碱、烟碱样神经系统损害和中枢神经系统损害。Wolf等[3]研究表明，神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)是反映中枢神经系统损伤最灵敏且最有意义的指标。本研究通过监测急性有机磷中毒患者血清中的NSE水平变化，探讨NSE水平在急性有机磷中毒诊治中的临床意义。

1资料与方法

1.1一般资料选择2000年7月—2013年6月底我院急诊科收治的急性有机磷中毒患者90例(病例组)，其中男性42例，女性48例；年龄16 ～70岁，平均(40.2±3.6)岁；90例中甲胺磷中毒36例，对硫磷中毒20例，敌百虫中毒10例，甲基对硫磷中毒9例，敌敌畏中毒8例，乐果中毒4例，甲拌磷中毒3例；患者的症状和体征包括：头痛10例(11.11%)，头晕35例(38.89%)，乏力27例(30.00%)，多汗27例(30.00%)，流涎45例(50.00%)，恶心55例(61.11%)，呕吐19例(21.11%)，瞳孔缩小60例(66.67%)，肌束震颤44例(48.89%)，肺部罗音23例(25.56%)，大小便失禁13例(14.44%)，昏迷27例(30.00%)，抽搐5例(5.56%)；根据病情给予胆碱酯酶复能剂、抗胆碱药物等进行综合治疗。另将90例健康受试者作为对照组，其性别、年龄与病例组的差异无统计学意义。

1.2方法

1.2.1参照我国急性有机磷中毒诊断和临床中毒程度分级标准[ GBZ8-2002]，按临床表现将病例组的90例患者分为轻度中毒23例(25.54%)，中度中毒32例(35.56%)，重度中毒35例(38.89%，其中8例病死)。

1.2.2180例研究对象均于入院即刻采集静脉血3.0 mL；除入院第1天内病死的8例患者外，其余172例研究对象均于入院第2、3、5、7天分别采集静脉血3.0 mL。静脉血以2000 r/min离心10 min，将上清液保存于-80℃备用。

1.2.3采用固相酶联吸附法(ELISA)[4]测定血清NSE浓度。NSE-ELISA试剂盒由北京军事医学科学院提供。按照说明书进行操作。5个标准孔内依次加入NSE浓度为 2.5、 5、 10、 20、 50 ng/mL的标准溶液100 μL，样品孔内加入待检血清及样品稀释溶液各50 μL，混匀后于37℃孵育30 min，洗板5次，甩干。每孔加酶标试剂100 μL ，室温显色10 ～15 min，终止反应后用酶联检测仪检测各孔吸光度，根据标准曲线换算成实际浓度。用瑞氏罗氏公司提供的试剂和自动生化分析仪测定胆碱酯酶(ChE)活力。

2结果

2.1病例组与对照组血清NSE水平的比较病例组8例病死患者的NSE水平为(131.72±10.84)ng/mL；其余82例患者入院第1、2、3天的血清NSE平均水平均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；第5、7天，病例组的82例患者的血清NSE水平仍高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

±s)与对照组的比较

2.2不同程度的急性有机磷中毒患者血清NSE水平的动态变化及比较轻度中毒患者入院第2天起血清NSE水平即较入院第1天显著降低，第3天恢复至正常水平；中度中毒患者入院第2天时血清NSE水平开始下降，第5天恢复至正常水平；重度中毒患者入院第1天的血清NSE水平达100.83 ng/mL,第1、2、3、5天依次降低，各时间点的差异均有统计学意义(P<0.01)，第7天恢复至正常水平。以上提示，急性有机磷中毒患者入院第1天的NSE浓度最高，其后逐渐降低，中毒程度轻的患者NSE水平恢复至正常的时间较短。比较不同程度的急性有机磷中毒患者的血清NSE水平，入院第1天及第2天轻、中、重度中毒患者的血清NSE水平依次升高，差异均有统计学意义(P<0.01),在入院第3天时重度中毒患者的血清NSE水平仍显著高于中度中毒患者(P<0.01)。病死的8例患者与存活的轻、中、重度中毒患者入院第1天的血清NSE水平比较，差异有统计学意义(<0.01)。见表2。

±s，ng/mL)

2.3急性有机磷中毒患者血清ChE水平的动态变化及与中毒程度的关系病死的8例患者血清ChE 水平为(199±228) U/L。存活的82例患者中轻、中、重度中毒患者入院第1天的血清ChE水平依次降低，但均随着治疗逐渐升高，其中轻、中度中毒患者的血清ChE 水平在入院第5天时恢复至正常水平，重度中毒患者的血清ChE 水平在入院第7天时恢复至正常水平；入院第1、2、3天时，轻、中、重度中毒患者血清ChE水平的差异均有统计学意义(P<0.01)。见表3。

±s)

注：ChE正常值为5400～13200 U/L

2.4急性有机磷中毒患者血清NSE浓度与ChE浓度的相关性分析入院第1、2、3天时血清NSE与ChE呈负相关(rs<0.05、P<0.05)，见表4。

表4　急性有机磷中毒患者入院后不同时间点血清NSE 与ChE的相关性分析

3讨论

急性有机磷中毒的诊断和程度分级一般以临床表现和ChE浓度作为依据。以往认为，全血、红细胞ChE是诊断急性有机磷中毒的特异性指标，对判断病情危重程度及评估疗效、预后极为重要；而血浆、血清ChE在受抑制后恢复较快且易受体液的影响，变异系数较大，不能准确反映急性有机磷中毒的危重程度及变化[5]。然而，有学者认为，应用自动生化分析仪和标准试剂检测的血清ChE对急性有机磷中毒的诊断、程度分级、疗效评估亦有指导意义[6]。本研究显示，急性有机磷中毒患者的血清ChE明显下降，且下降程度与中毒程度平行，中毒程度越重，血清ChE水平越低；随着病情恢复，患者血清ChE逐渐升高，一般至第5天恢复至正常水平。由此证实，应用自动生化分析仪和标准试剂测定的血清ChE是对急性有机磷中毒进行诊断、程度分级和疗效评估的重要而特异的指标。

近年来，越来越多的研究[7]表明，NSE是各类神经元损伤的敏感和特异的指标。NSE是参与糖酵解途径的烯醇化酶的一种同功酶,存在于神经组织和神经内分泌组织，主要位于神经元和少突胶质细胞的胞浆中。神经元损伤后，NSE从神经元胞质逸出或“漏”出，通过脑脊液-脑屏障及血-脑屏障进入脑脊液和血液。现已证明，在各种引起神经元损伤或坏死的疾病(如感染、中毒、缺血缺氧性疾病、脑外伤、脑出血、脑梗死等)中，均会出现CSF和血清中的NSE升高[8]。血清NSE水平可反映中枢神经系统损伤、脑损伤，并有助于判断病情严重程度、指导治疗和评估预后[9]。

本研究对90例急性有机磷中毒患者血清NSE的检测结果显示，急性有机磷中毒患者在入院第1天血清NSE水平即升高，明显高于对照组，升高持续至第3天，第5天恢复至正常水平；急性有机磷中毒程度越重，血清NSE水平越高，NSE水平与中毒程度呈正相关。故本研究从生化指标的角度证实了急性有机磷中毒可能导致神经元损害，且这种损害与疾病严重程度相关。

另外，本研究还提示急性有机磷中毒患者血清NSE与血清ChE呈负相关，即急性有机磷中毒病情越重，血清NSE浓度越高，血清ChE浓度越低。这提示，血清NSE和清ChE均能反映急性有机磷中毒患者病情的严重程度。

本研究不足之处在于：未对研究对象进行神经系统损伤的其他检查，如脑电图、磁共振，未进行神经系统评分如格拉斯哥评分等。后续研究可开展相关动物实验，从分子生物学、病理学等角度研究急性有机磷中毒患者的NSE水平与神经系统损伤的关系。

综上所述， NSE和ChE可作为急性有机磷中毒诊断、程度分级和疗效评估的指标。

参考文献

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Dynamic Variation of Serum Neuron-Specific Enolase and Its Clinical Significance in Patients with Acute Organophosphate Poisoning

MaLiYangZijian*ZhouYuanlingLiXiujuDepartmentofOccupationalDisease,*DepartmentofEmergenyMedicine,JinshanHospital，FudanUniversity.Shanghai200540,China

AbstractObjective：To explore the dynamic variation of serum neuron-specific enolase (NSE) and its clinical significance in patients with acute organophosphate poisoning. Methods:Ninety patients with acute organophosphate poisoning were enrolled into case group, and other 90 healthy subjects were enrolled as control group. Venous blood samples of 3.0 mL were collected from the all 180 subjects at admission. Apart from the 8 patients died on day 1, the other 172 subjects underwent collection of 3.0 mL venous blood samples on day 2, day 3, day 5, day 7. Serum NSE concentration was measured by enzyme-linked immunosorbent assay, while cholinesterase(ChE) was determined by photoelectric colorimetry. Results: Eight patients in case group died on admission day, of whom the average concentration of NSE and ChE were (131.72±10.84) ng/mL, (199±228) U/L,respectively. Concentration of NSE of the rest 82 patients on day 1, day 2, day 3 were (54.56±5.46) ng/mL, (36.18±5.27) ng/mL, (20.56±4.64) ng/mL, respectively, and concentration of the control group on the corresponding time points were (9.72±3.92) ng/mL, (9.48±3.66 )ng/mL,(9.86±3.62)ng/mL,respectively. Statistically significant differences were detected between two groups(P<0.01). Average concentration of ChE of the rest 82 patients on day 1, day 2, day 3 were (1628.60±112) U/L、(2113.59±324) U/L、(2474.75±711) U/L, respectively, and those in the control group on the corresponding time points were (5982±215) U/L, (5651±136) U/L, (5783±764)U/L, respectively. Statistically significant differences were detected between two groups(P<0.01). The concentrations of NSE were in significantly negative correlation with that of ChE in mild, middle and severe poisoning patients on day 1, day 2, day 3, and in positive correlation with the poisoning severity. The correlation coefficients rs>0.05,P<0.05. Conclusions: Serum NSE may be used as an reference indicator in the diagnosis and treatment of acute organophosphate poisoning.

Key WordsOrganophosphate poisoning；Neuron-specific enolase；Cholinesterase

通讯作者杨自建，E-mail: yangzijiansh@126.com

中图分类号R 595

文献标识码A