布鲁氏菌病疫苗（S2株）免疫羊抗体消长规律的研究

2015-02-11，，，，，，，，，，，，，，，

中国动物检疫 2015年1期

关键词：消长布鲁氏菌绵羊

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（1.内蒙古自治区动物疫病预防控制中心，内蒙古呼和浩特市 010010；2.中国兽医药品监察所，北京 100081；3.内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特市 010018）

布鲁氏菌病疫苗（S2株）免疫羊抗体消长规律的研究

申捷1，宝音达来1，马立峰1，戴晓光1，马晓雪1，苏胜杰1，萨茹拉1，云涛1，双燕1，郝璐1，郭金贵1，菊花1，刘志伟1，毛开荣2，申之义3，赵心力1

（1.内蒙古自治区动物疫病预防控制中心，内蒙古呼和浩特市 010010；2.中国兽医药品监察所，北京 100081；3.内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特市 010018）

为探讨羊经布鲁氏菌病疫苗免疫后的血清抗体消长规律，本研究分别对绵羊和山羊进行布鲁氏菌S2株疫苗不同剂量的灌服，于免疫前和免疫后不同时间采集血清样品，采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行血清抗体检测。结果表明，绵羊及山羊均在免疫后20d时血清抗体阳性率达到最高峰，之后呈下降趋势，免疫后90天降至低点。免疫后90至360d，绵羊组抗体阳性率几乎一直维持在14%以下，各时段无显著性差异（P＞0.05）；山羊组抗体阳性率在免疫后90至360d期间时高时低，起伏较大，无明显规律。试验期间，山羊的抗体阳性率普遍高于绵羊，且降升幅度较大。同时，研究表明，同种羊100亿和200亿两个免疫剂量组的抗体阳性率差异不大。

绵羊；山羊，布鲁氏菌病；免疫；抗体监测

布鲁氏菌病（brucellosis），简称布病，是由布鲁氏菌属细菌（Brucella spp）引起的人畜共患的变态反应性传染病。牛、羊、猪等家畜最易感。对人有高度感染性和致病性[1]。据统计资料表明，全世界每年因布鲁氏菌病造成的经济损失近300亿美元。目前我国该病流行严重，正威胁着人类健康，损害着畜牧业经济。

当前布病的诊断方法多种多样且各具特色，但都存在一定的局限性，尚无成熟、科学的可鉴别布鲁菌免疫和自然感染抗体的方法。因此，采用综合诊断技术比较适宜当前布病防控诊断，采用诸如虎红平板凝集试验（RBT）等快速诊断方法对人和动物进行初步的布病筛选，发现阳性后可进一步进行CFT、ELISA、PCR 综合诊断技术进行判断，确保检测结果可靠、准确[2]。

我国用于预防牲畜布鲁氏菌病的疫苗有牛种布鲁氏菌A19菌株弱毒菌苗、羊种布鲁氏菌M5菌株弱毒菌苗和猪种布鲁氏菌S2菌株弱毒菌苗。这些疫苗虽然具有良好或较好的免疫效果，但均存在一个共同弊端，即现有的血清抗体检测方法均不能从定性上区分疫苗接种动物和自然感染动物，从而影响防疫工作的效果。目前主要通过疫苗免疫抗体和自然感染抗体存续时间的不同鉴别疫苗免疫动物和自然感染动物，一般情况下自然感染动物的抗体存续时间较长，而疫苗免疫动物的抗体存续时间较短。关于S2疫苗免疫家畜的抗体存续时间，已有的报道说法不一，为此本研究对S2疫苗免疫绵羊及山羊采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行血清抗体分阶段的检测，探究S2疫苗免疫后绵羊和山羊的抗体消长规律，为布病防疫工作提供科学指导。

1 材料与方法

1.1 主要材料

1.1.1 试验疫苗布鲁氏菌病S2株活疫苗，中牧实业股份有限公司兰州生药厂生产。

1.1.2 抗体检测试剂虎红平板凝集抗原及阴阳性血清、试管凝集抗原及阴阳性血清购自中国兽药监察所。

1.1.3 试验动物未检出布鲁氏菌病且无布鲁氏菌病感染史的246只山羊和250只绵羊。试验羊群分别来源于鄂尔多斯市棋盘井镇和阿拉善盟阿左旗。试验地点选取在相对比较偏远，试验羊群与其他畜群无直接接触的草场进行。

1.2 方法

1.2.1 试验羊群分组见表1。

表1试验分组

1.2.2 免疫方法灌服免疫。

1.2.3 抗体检测

在免疫前及免疫后20d、50d、90d、120d、150d、180d、210d、240d、270d、300d、330d、360d对两个试验点所有试验动物进行采血并分离血清，采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测免疫抗体水平。虎红平板凝集试验、试管凝集试验操作按产品说明书进行。

2 结果

2.1 绵羊各试验组检测结果

空白对照组各次抗体检测均为阴性。绵羊各试验组结果统计见表3和图1。

2.2 山羊各试验组检测结果

空白对照组各次抗体检测均为阴性。山羊各试验组结果统计见表4和图2。

2.3 100亿剂量免疫各试验组检测结果

空白对照组各次抗体检测均为阴性。试验组结果统计见表5和图3。

2.4 200亿剂量免疫各试验组检测结果

空白对照组各次抗体检测均为阴性。试验组结果统计见表6和图4。

3 讨论

两地绵羊的抗体升降情况基本一致，在免疫后20d时血清抗体阳性率达到最高峰，之后呈下降趋势；免疫后90d，抗体阳性率降到6%以下。阿拉善免疫羊此状况一直维持到约180d，期间多次为0，最高达6%；210d以后个别试验组、个别时段抗体阳性率有所回升，最高达14%。鄂尔多斯免疫羊免疫后90至360d一直维持低水平抗体阳性率，期间多次为0，最高为6%。田素梅的研究表明，绵羊经S2疫苗免疫，免疫后15d凝集抗体达到最高值，至9个月时仍有可检测到的凝集抗体[3]。高红霞的研究结果也表明，羊经S2疫苗免疫后，一个月时凝集抗体达峰值[4]。两地山羊的抗体升降情况基本一致，在免疫后20d后，血清中的抗体阳性率达到最高峰，之后呈下降趋势，免疫后90至360d维持低水平或较低水平的抗体阳性率，但其间抗体阳性率有升有降，且两地的消长曲线有一定差异。党富德进行奶山羊断奶后连年两次口服布鲁氏菌S2菌苗后免疫抗体消长规律研究，结果显示，免疫后25d，试管凝集抗体、平板凝集抗体和虎红平板凝集抗体均达高峰，以后逐渐下降，到第6个月时阳率分别为8.3%、4.16 %、4.16 %，到第7个月时略有上升，到8个月时，试管凝集抗体阳性率又上升到3 5.4%，以后又趋于下降[5]。

表2各免疫组试验结果：抗体阳性率统计

表3绵羊各剂量免疫组抗体阳性率统计表

表4山羊各剂量免疫组抗体阳性率统计表

表5 100亿剂量免疫组抗体阳性率统计表

表6 200亿剂量免疫组抗体阳性率统计表

与绵羊相比，山羊的抗体阳性率普遍偏高，并且降升幅度较大，这可能与山羊的品种有关，有待于进一步研究。无论是山羊还是绵羊，在免疫后150或180d以后的不同时段，都有抗体阳性率回升、下降、再回升现象，这除与羊个体因素有关外，还可能与虎红平板凝集试验和试管凝集试验的特异性和敏感性有关，国内外很多学者认为虎红平板凝集试验和试管凝集试验的特异性和敏感性均不高[6-8]。

总体看，虎红平板凝集试验和试管凝集试验抗体阳性率曲线基本一致，说明这两种方法的吻合率较高。

在本研究中，100亿和200亿两种免疫剂量的抗体阳性率差异不大，所以在达到免疫效果的前提下，从节省成本考虑，可以在今后的免疫工作中对羊群进行布氏杆菌S2株活疫苗100亿剂量的免疫。

[1] 陆承平.兽医微生物学[M].4版.北京：中国农业出版社，2005：265-271.

图1 绵羊各免疫剂量组抗体消长曲线

图2 山羊各免疫剂量组抗体消长曲线

[2] Seleem MN，Boyle SM，Sriranganathan N. Brucellosis areemerging zoonosis[J].Vet Microbiol，2010，140（3/4）：392-398．

[3] 田素梅，周红菊，温都苏，等.绵羊杭布鲁氏菌特异性IgG，IgA和IgM抗体的观察[J]. 中国人兽共患病杂志，1993，9（3）：53.

[4] 高红霞.不同血清学方法检测牛羊布鲁氏菌疫苗免疫抗体消长规律的比较研究[J].畜牧兽医杂志，1990（4）：17-18.

[5] 党富德，何玉财.奶山羊断奶后连年两次口服布鲁氏菌S2菌苗后免疫抗体消长规律试验观察[D].哈尔滨：东北农业大学，2010：28-29.

[6] Nielsen K，Gall D，Smith P，et al. Comparison of Serological tests for the detection of ovine and caprine antibody to Brucella melitensis［J］.Rev Sci Tech，2004，23（3）：979-987.

[7] 李慧，范伟兴，关平原.布鲁菌病血清学检测方法的比较[J].畜牧与饲料科学，2012，33（3）：21-22.

[8] 范伟兴，钟旗，何倩倪，等. 几种布鲁氏菌病血清学诊断方法的比较研究［J］. 中国动物检疫，2006，23（6）：31-33.

Studies on the Antibody Development in Sheep and Goats Immunized with Brucellosis Vaccine（S2）

Shen Jie1，Baoin Dalai1，Ma Lifeng1，Dai Xiaoguang1，Ma Xiaoxue1，Su Shengjie1，Sa Rula1，Yun Tao1，Shuang Yan1，Hao Lu1，Guo Jingui1，Ju Hua1，Liu Zhiwei1，Mao Kairong2，Shen Zhiyi3，Zhao Xinli1
（1.Inner Mongolian Center for Animal Disease Prevention and Control，Huhhot，Inner Mongolia 010010；2.China Control Institute for Veterinary Pharmaceuticals，Beijing 100081；3. Inner Mongolian Agricultural University，Huhhot，Inner Mongolia 010018）

To investigate the pattern of increasing or decreasing of serum antibody in sheep and goats immunized with brucellosis vaccine，RPST and tube agglutination test were used in the study to determine the level of serum antibody in sheep and goats before and after immunization with Brucella strain S2 vaccine. The results indicated that the serum antibody positive rate in sheep reached the highest level 20 DPI，then started to decrease and remained relatively low level 90-360 DPI，mostly below 6%，and relatively higher in few individuals，up to 14%. The positive rate in goats reached the highest 20 DPI，then decreased and remained low or relatively low level 90-360 DPI，but with decreasing or increasing sometimes. Comparatively，antibody positive rate in goats was generally higher than in sheep，and the descending and ascending range was bigger. It was also shown that there was no signif cant difference in antibody positive rate between 10 billion CFU dose group and 20 billion CFU dose group in same species.

sheep；goat；brucellosis；immunization；antibody surveillance