冯润东,曹　蕾,刘　蕊,宋冰雪，刘　静，曹永孝

(1.陕西省食品药品检验所，陕西 西安　710065;2.西安交通大学医学院, 陕西 西安　710061)



活犀角与犀角抗惊厥作用的研究

冯润东1,曹蕾2,刘蕊2,宋冰雪2，刘静2，曹永孝2

(1.陕西省食品药品检验所，陕西 西安710065;2.西安交通大学医学院, 陕西 西安710061)

摘要：目的通过研究活犀角与犀角对小鼠的抗惊厥作用，探讨活犀角是否可以作为犀角的代用品。方法随机将280 只小鼠(自主活动实验160只，抗惊厥实验120只),分为活犀角与犀角各4个剂量组(700、350、175、90 mg·kg-1)，另设1个空白对照组和1个地西泮片阳性对照组，分别灌胃给予对应剂量的试验样品，连续2 d。末次给药后30 min后用自主活动记录仪记录各组20只小鼠自主活动；同时对各组另外15只小鼠采用尼可刹米诱发动物惊厥，记录小鼠出现惊厥的时间和死亡时间。结果自主活动记录结果显示，4个剂量的活犀角和犀角对小鼠均有兴奋作用；抗惊厥结果显示活犀角700、350、175、90 mg·kg-1和犀角350、175、90 mg·kg-1能明显降低小鼠的惊厥发生率和/或死亡率，且在350、175、90 mg·kg-1剂量下活犀角和犀角对小鼠的抗惊厥作用无显著性差异。结论 在该验条件下，在抗惊厥作用方面可初步判断活犀角在350、175、90 mg·kg-1剂量可以作为犀角的代用品进行使用。

关键词：活犀角；犀角；抗惊厥；小鼠

犀角又名犀牛角，来源于犀科动物角质的角，位于犀牛面鼻骨部正中央的兽角，由角质细胞组成的有机质地物质，属皮肤衍化物的组织。其物质成分起始于毛发，经过生长、硬化而成，角内含角蛋白及胆固醇、磷酸钙、碳酸钙、酪氨酸，还含有其他蛋白质、肽类、游离氨基酸、胍衍生物、甾醇类等成分。犀牛角呈圆锥形，自底部向上渐细，稍弯曲，长短不等[1]，具有清热、凉血、定惊、解毒、治伤寒温疫热入血分、惊狂、烦躁、谵妄、斑疹、发黄、吐血、衄血、下血、痛疽肿毒等功效；是我国特有的一类动物来源的名贵中药，具有活性强、疗效显著、副作用小等特点。近代研究证明犀角在镇静安神、抗惊厥、对抗、弥散性血管内凝血(DIC)[2]、抗炎[3]等方面有较好的疗效，但犀角作为珍贵的中药材，价格昂贵。且随着犀牛猎捕增加，栖息地的消失和种群的分离，犀牛数量日益减少。作为中药材原料的野生犀牛角更是罕见。为了挽救面临绝种的犀牛，白犀牛和亚洲犀牛在1973年，黑犀牛在1977年都被列入《国际野生物贸易公约(CITES)》附录一中，这些行动终结了对犀牛的合法交易。且由于保护野生动物保护法规的执行，犀角已在临床禁用， 目前多用水牛角替代犀牛角作为中药材的使用。因此，寻找一种疗效确切、来源易得的犀角替代品，对于保护野生动物及推动中医药的发展有着重要的作用。本文主要研究活犀角的抗惊厥作用，并与犀角进行了对比研究[4]。

1实验材料

1.1药物和试剂活犀角粉和犀角块均由龙辉药业有限公司提供，批号分别为080101-ZB和080501-ZB。阿司匹林，SIGMA公司，批号107K0101。地西泮片，山东平原制药厂生产，批号060302，国药准字H37023039；尼可刹米，北京市药业有限公司生产，批号07070224，国药准字H11020553。

1.2动物280只雄性18～22 g昆明种小鼠，由西安交通大学医学院实验动物中心提供(实验动物使用许可证号：SYXK(陕)2007-003，温度20～25℃，相对湿度40%～60%)。

1.3仪器YLS-1A型多功能小鼠自主活动记录仪，山东省医学科学院设备维修供应站： AL104型电子分析天平(瑞士Mettior Toiedo)。

2方法

2.1对自主活动的影响的观测取160只小鼠，随机分为8组，每组20只：(1)对照组; (2)地西泮 2.5 mg·kg-1组; (3)～(5)活犀角 700、350、175 mg·kg-1组；(6)～(8)犀角700、350、175 mg·kg-1组。用自主活动记录仪记录小鼠自主活动：自主活动记录仪共有5个记录盒, 每盒每次放1只小鼠，记录30 min小鼠的活动次数。计数期间保持室内安静。各组小鼠ig给药，20 mL·kg-1，每日1次，连续2 d。末次给药后30 min, 再次记录小鼠30 min内自主活动，进行组间比较[5-11]。

2.2抗惊厥作用的观测取小鼠120只，按随机分为8组, 每组15只：(1)对照组; (2)地西泮2.5 mg·kg-1组;(3)～(5)活犀角700、350、175 mg·kg-1组；(6)～(8)犀角700、350、175 mg·kg-1组。各组均按20 mL·kg-1ig给药,每日1次, 连续2 d。末次给药30 min, ip尼可刹米350 mg·kg-1诱发惊厥，尼可刹米后立即秒表计时，记录小鼠出现惊厥的时间、死亡时间。计算惊厥潜伏期、死亡潜伏期、惊厥发生率和死亡率。未惊厥小鼠潜伏期按10 min计，未死亡小鼠死亡潜伏期按2 h计[12-14]。惊厥以小鼠发生强直性跳跃为指标,惊厥的潜伏期为从给尼可刹米开始到小鼠第一次出现惊厥的时间, 死亡时间为从给尼可刹米开始到死亡的时间[15-17]。

3结果

3.1对自主活动的影响表1结果显示，与对照组比较，地西泮组小鼠的自主活动明显降低，活犀角和犀角的自主活动明显升高；活犀角组与犀角组比较，自主活动都明显升高，且结果相似[21-24]。见图1。

3.2抗惊厥作用由表2可以看到由尼可刹米诱发的小鼠惊厥，在地西泮组、活犀角组和犀角组惊厥率、死亡率都有明显下降，活犀角组降低惊厥率死亡率的效果与灌胃剂量成正相关。犀角组在700 mg·kg-1时相较对照组惊厥率、死亡率没有显著差异，而其余剂量组则有显著下降。但是各组惊厥潜伏期和死亡潜伏期偏差较大，多数未见显著性差异[25-27]。

表1　 活犀角对小鼠自主活动的作用

注：同剂量活犀角与犀角组比较**P<0.05，*P<0.01。

表2　活犀角对抗小鼠尼可刹米惊厥的作用

注：同剂量活犀角与犀角组比较**P<0.05，*P<0.01。

由于活犀角、犀角175 mg·kg-1仍能明显降低尼可刹米惊厥小鼠的死亡率，推测这不是其最小有效剂量。为了探索其最小有效剂量，另取小鼠60只，分为：对照组，活犀角、犀角90 mg·kg-1组，同法进行实验，表3、4结果显示，活犀角、犀角90 mg·kg-1的小鼠的惊厥率和/或死亡率仍明显低于对照组[28-29]。再取小鼠60只，分为：对照组，活犀角、犀角45 mg·kg-1组，再次进行实验，结果显示活犀角、犀角45 mg·kg-1组的惊厥率和死亡率与对照组比较无显著性差异[30]。

表3　90 mg·kg-1剂量活犀角对抗小鼠尼可刹米惊厥的作用

注：活犀角与犀角组比较**P<0.05。

表4　 45 mg·kg-1剂量活犀角对抗小鼠尼可刹米惊厥的作用

注：活犀角与犀角组比较**P<0.05，*P<0.01。

4讨论

结果提示，活犀角和犀角均具有抗惊厥作用，从小鼠自主活动记录仪测定结果可以看出，各组的标准差仍较大。由于犀角有镇静作用，我们预计其自主活动会减少，因而选地西泮作对照[31]，实验结果显示，地西泮有减少自主活动的趋势，但与对照组没有显著差异，而犀角和活犀角组的自主活动明显高于对照组[32]。这一结果提示，活犀角、犀角可能对正常小鼠有兴奋作用。但值得一提的小鼠和人对镇静剂的反应可能不同，我们也曾记录过小鼠用小剂量的地西泮和戊巴比妥钠时小鼠出现自主活动增多，而不是降低的现象[33]。我们试图用咖啡因兴奋小鼠，观察受试药对咖啡因兴奋小鼠的作用，但由于用了咖啡因后小鼠表现为明显的挠头动作，虽然也属自主活动，但并不能被自主活动记录仪记录，因此测定自主活动的方法还有待改进。

尼可刹米诱发小鼠惊厥是目前比较常用的一种造惊厥模型的方法。地西泮能明显降低小鼠的惊厥发生率和死亡率[34]。活犀角700、350、175 mg·kg-1和犀角350和175 mg·kg-1能明显降低惊厥的发生率和/或死亡率。由于175 mg·kg-1的作用仍较明显，推测这不是其最小有效剂量[35]。为了探索其最小有效剂量，两次降低剂量后发现活犀角和犀角90 mg·kg-1仍能降低惊厥的发生率和死亡率。而45 mg·kg-1无明显作用[14]。结果提示，活犀角和犀角的抗惊厥作用突出，活犀角的在抗惊厥作用方面可以替代犀角使用。

由于野生动物保护法的执行，传统中药材犀角已禁止在临床上使用，珍稀中药材的的使用一直“做减法”。通过“活体刮角”技术从活体犀牛上获得活犀角，即完成珍稀药材的获取，又保护了野生动物，是中药可持续发展的有利因素。本研究通过动物实验全面比对了活犀角和犀角的药效学，并探讨了其机制，为活犀角进一步的临床研究建立了良好的基础。通过对活犀角药效和安全性的研究，这将为广大患者提供更好的选择。

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通信作者：曹永孝，男，教授，博士生导师，研究方向：药理学，E-mail：43474735@qq.com

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.12.010

(收稿日期：2015-07-21，修回日期：2015-09-28)

A Study of the Anticonvulsive Effects Between Living Rhino
Horn and Rhino Horn

FENG Run-dong1，CAO Lei2， LIU Rui2，et al

(1.ShaanxiInstituteforFoodandDrugControl,Shaanxi，Xi’an710065;

2.Xi’anJiaotongUniversityCollegeofMedicine,Shaangxi，Xi’an710061)

Abstract：ObjectiveTo study of the anticonvulsive effects between living Rhino Horn and Rhino Horn and to explore whether living Rhino Horn could be used as a substitute of Rhino Horn. Methods The 280 mice were randomly divided into four groups of living Rhino Horn (700、350、175、90 mg·kg-1), four groups of Rhino Horn (700、350、175、90 mg·kg-1)，a blank control group and a positive group of diazepam. The mice were gavaged with the corresponding dose of test sample for 2 consecutive days. Thirty minutes after last gavaged，the autonomic activeties of 20 mice in every group were records by the independent event recorder. The other 15 mice in every group were induced convulsion by Nikethamide. And then, it was recorded that the time of convulsion and the time of death of the mice. Results Independent activities and anticonvulsants, according to the results of Rhino Horn, living Rhino Horn could be have excitation on the mice of blank control group. Live Rhino Horn (700、350、175、90 mg·kg-1)and Rhino Horn (350、175、90 mg·kg-1)could significantly reduce the incidence of eclampsia and/or mortality of the mice, and there was no significant difference between live Rhino Horn and Rhino Horn with the same dose (350、175、90 mg·kg-1). Conclusion Under the condition of this experiment，It was estimated preliminarily that the anticonvulsive effect of living Rhino Horn at a dosage of 350、175、90 mg·kg-1was equal to the anticonvulsive effect of the traditional Rhino Horn, and then the living Rhino Horn could be used as a substitute of Rhino Horn.

Key words：livingRhino Horn;Rhino Horn;anticonvulsive effect;mice