李 伟，郭建宁

（山东省潍坊市坊子区人民医院，山东 潍坊 26120）

下调细胞色素P450表达与模拟妊娠高血压综合征的实验研究

李 伟，郭建宁

（山东省潍坊市坊子区人民医院，山东 潍坊 26120）

目的研究妊高症患者中表达细胞色素P450（CYP450）表达的特点。方法通过动物研究中妊娠大鼠和胎鼠生长发育受CYP450的影响的比较，并对动物进行血压监测、妊娠大鼠及胎鼠分化发育情况检查及蛋白质印迹法，分析CYP450对大鼠胚胎分化发育的影响。结果以实验组和对照组比较，对于CYP450受抑制的实验组大鼠血压升高显著（113.4±6）mmHg及对照组（97.8±5）mmHg，实验组和对照组在胎鼠的发育，包括体重、长度和胎盘重等方面比较，差异有统计学意义（P＜0.05），数据如下：（1.50±0.25）g和（2.44土0.53）g，（2.20±0.95）com和（2.98土0.46）com，（0.31±0.15）g和（0.55±0.09）g。同时CYP450受抑制组大鼠胎盘里另一细胞色素2C23（CYP2C23）水平明显下降。结论大鼠胎盘和胎鼠分发发育有潜在地受CYP2C23影响的可能，妊高症的发病与CYP450表达降低密切相关。

CYP450；妊高症；胚胎发育

妊娠高血压综合症是妇产科常见的对孕妇及胎儿造成严重威胁的疾病，其简称为妊高症，可造成患者及胎儿的严重后遗症，如胎儿发育不良，甚至死亡，因而我们应关注妊高症的防治。然而目前的临床诸多研究并未对该病的发生机制进行阐明［1］，在现有的研究结果中我们认识到，妊娠的个体有着正常的与身体改变享福的生理变化，肾组织中CYP450的变化呈规律性。这里我们通过这一发现并使用甲磺酰基-6-（2-丙氧基-苯基）己烷（MSPPOH）对细胞色素P450进行针对性抑制，探索CYP450在妊娠高血压患者和胚胎分化发育中的影响，从而支持临床中相关疾病的治疗和预防。

1 材料与方法

1.1 一般材料

查尔斯河实验室（威明顿，马萨诸塞州）妊娠后期30只大鼠，以随机对照原则分为实验组和对照组，实验组从大鼠尾静脉注射MSPPOH，剂量为20 mg/（kg·d），对照组从妊娠第15～18天尾静脉给予同样剂量。

1.2 实验材料

大鼠平均动脉压的测量：EMKA软件（福尔斯彻市，弗吉尼亚州）；蛋白质印迹法：赛默飞世尔公司；新西兰白兔抗大鼠细胞色素2C23抗体，南京森贝伽生物科技有限公司；甲磺酰基-6-（2-丙氧基-苯基）己烷，由Cayman Chemical提供；在完成相关实验数据测定的同时进行血流动力学的测定［2］。前期完成各种准备工作，对妊娠大鼠行尾静脉麻醉，手术得到其胚胎和胎盘，测量器重量和大小。

1.3 蛋白质印迹法

蛋白样品15 ug，以5% SDS-聚丙烯酰胺（SDSPAGE，含0.1%明胶）电泳分离，其目的是提高化学检测试剂盒的细胞色素酶谱表达变法，并以β-肌动蛋白为内参。一抗浓度：新西兰白兔抗大鼠细胞色素2C23抗体（1：5000），在电泳及相关处理后通过图像分析，并进行统计学分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS 12.0统计学软件对研究数据进行分析，计量单位以“±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 抑制细胞色素酶450对妊娠大鼠血压的影响

对于CYP450受抑制的实验组大鼠血压明显升高（113.4±6）mmHg及对照组（97.8±5）mmHg，差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组未注射MSPPOH，实验组妊娠大鼠注射了MSPPOH，平均动脉压比对照组妊娠大鼠明显升高，由（97.8±5）mmHg到达（113.4±6）mmHg，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 抑制细胞色素酶对胚胎和胎盘的影响（±s）

注：以上各组数据除胎盘直径外，差异有统计学差异（P＜0.05）

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2.2 抑制细胞色素对妊娠大鼠胚胎细胞色素2C23表达的影响

从表1可见，在妊高症第20天，甲磺酰基-6-（2-丙氧基-苯基）己烷对胚胎发育数量几乎无有影响，但是对胚胎重量、长度及胎盘重量有较大影响，均使它们相对于对照组降低，两组数据比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

妊娠期高血压对人体的影响不仅仅局限于心血管系统及妊娠相关因素，还可累计其它多个系统，且相关机制尚不明确，所以给临床诊治带来了困难，我们应关注的最主要特征为母体血压波动性升高和胚胎妊娠期发育障碍。在正常妊娠的个体中，肾脏毛细血管CYP450的表达并不恒定［3］。本次课题以MSPPOH对细胞色素（CYP）的抑制作用来探究CYP对胚胎和胎盘重量及大小的影响，分析其对胎儿发育的影响，以及其参与妊娠期高血压的机制。

在心血管系统及相关疾病中，环氧二十碳烯酸通过肾脏发挥的血压调节作用而产生影响，其中最主要的作用为水钠排出和血管的舒张作用。环氧二十碳烯酸是一种内皮源性血管扩张因子，亦属于内皮源性超极化因子家族。大鼠胚胎中的CYP2C23可被MSPPOH选择性抑制，这也间接导致了妊娠大鼠在研究中胚胎和胎盘的重量均下降，胚胎变小。同时胚胎产生的数量所受影响不明显，可能与妊娠大鼠被应用药物以及实验药物的用量及反映性差异有关［4］，尚待进一步研究分析，然而妊娠高血压胚胎特征在抑制CYP表达后得到了很好的阐释，同时本课题中又对妊娠大鼠的实验前处理也得到了关于妊高症的一个较为适当的动物模型。

［1］ Miyake Y.Hypertension in pregnant women Nippon Rinsho.2007，28；Suppl 4：83-7.

［2］ 黄 辉，王 彤，陈 洁，等.妊娠大鼠肾脏血流动力学变化与肾脏微血管细胞色素P450表达的关系.中国临床实用医学，2008，2（11）：l-2.

［3］ Huang Hui，Venugopal T.Raju，Wang Jingfeng，Hammock BD，Wang MH Increasing or stabilizing renal epoxyeieosatrienoic acid attenuates abnormal renal function and hypertension in obese rats.Am ［J］. Physiol Renal Physiol，2007，293：342-349.

［4］ 李冬红，杨梦庚.胎盘与妊高征发病的关系［J］.中华妇产科杂志，2004，29（11）：687.

本文编辑：刘帅帅

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ISSN.2095-6681.2015.031.054.02