敌百虫定性检测方法的比较

2014-07-10刘平平山东省诸城市畜牧兽医管理局262200

山东畜牧兽医 2014年10期

刘平平（山东省诸城市畜牧兽医管理局 262200）

敌百虫定性检测方法的比较

刘平平（山东省诸城市畜牧兽医管理局 262200）

本试验通过对敌百虫的定性检测，观察其性质，将敌百虫和敌百虫的纯溶液分别稀释50、100、200、500、1000倍采用圆形滤纸法、硅胶层析法对比的试验方法，比较出两种方法的灵敏度，结果证明硅胶层析法灵敏度高于圆形滤纸法。

有机磷杀虫药(organophosphorous insecticides)对人畜的毒性主要是对乙酰胆碱酯酶的抑制，引起乙酰胆碱蓄积，使胆碱能神经受到持续冲动，导致先兴奋后衰竭的一系列的毒蕈碱样、烟碱样和中枢神经系统等症状；严重患者可因昏迷和呼吸衰竭而死亡，有机磷杀虫药大都呈油状或结晶状，色泽由淡黄至棕色，稍有挥发性，且有蒜味。除敌百虫外，一般难溶于水，不易溶于多种有机溶剂，在碱性条件下易分解失效。常用的剂型有乳剂、油剂和粉剂等。下面是对敌百虫进行的试验，观察其性质及其方法的灵敏度。

1 材料和方法

1.1 材料

中毒试验动物兔子胃内容物、敌百虫药品、硅胶、甲醇、乙醇、丙酮、苯、间苯二酚、氢氧化钠、10个烧杯、1个玻璃棒、5个滴管、2个吹管、1盒滤纸、2个量筒、药匙、电子天平、水浴锅、活化箱、层析缸。

1.1.1 样品采集采取因饲喂添加有敌百虫的饲料引起的中毒死亡兔子胃内容物。

1.1.2 样品处理将胃内容物放入密闭的试剂瓶中，加入95%的乙醇100ml，在水浴锅中50～60℃水浸2h，过滤，滤液自然挥发干，将残渣用苯或氯仿精制一次，备用。

1.1.3 检液的配制取敌百虫纯品0.5、0.25、0.125、0.05、0.025g溶解于25ml的蒸馏水配制成检液I，稀释后备用。采用稀释50、100、200、500、1000倍的方法进行检测，为了精确的观察和计算。同样的方法取中毒兔子胃内容物精制的残渣0.5、0.25、0.125、0.05、0.025g溶解于蒸馏水中配制成检液II，备用。

1.2 方法

1.2.1 圆形滤纸法（1）原理：敌百虫水解后，产生的醛类物质和间苯二酚反应，生成粉红色的化合物。（2）试剂1%间苯二酚酒精溶液、5%NaoH酒精溶液（3）操作方法：在定性滤纸中心滴加5%NaoH酒精溶液一滴，1%间苯二酚酒精溶液一滴，稍干，滴检液I数滴，在烘箱中微微加热片刻，若出现粉红色，说明有敌百虫的存在，此操作重复3次。同样的方法来检验检液II，重复3次。

1.2.2 硅胶层析法（1）原理：敌百虫水解后，产生的醛类物质和间苯二酚反应，生成粉红色的化合物。（2）试剂硅胶、甲醇、乙醇、丙酮。（3）硅胶板的制作：在烧杯中放入适量的水，加适量的硅胶使浓度适中，倒在准备好的玻片上，尽量的速度均匀使其平面整洁利于实验的进行，放置几分钟使其成型然后小心的放入烤箱中温度适中1～2h，充分的活化。（4）试验步骤及方法：将制作好的硅胶板放入层析缸中，层析缸中间横一玻璃棒固定好，放入前硅胶板的靠边缘的1cm的地方滴加检液I，在盘子中添加配制的甲醇、乙醇、丙酮1:1:3的混合液使其饱和10min左右，然后将硅胶板靠在横着的玻璃棒上，添加混合液靠近此边缘，使其充分的扩散，过数分钟后拿出来用1%间苯二酚酒精溶液、5%NaoH酒精溶液喷加可以看到有粉红色的显示，此操作重复3次。同样的方法检验检液II，重复3次。

2 试验结果

表1 敌百虫纯品不同浓度两种检测方法灵敏度比较(显色情况)

表2 胃内容物中两种检测方法灵敏度比较(显色情况)

在试结果中检液都有不同程度的显色，高浓度的显色较明显，低浓度的显色效果较差，同种条件下，2种试验方法的效果有很大的不同，硅胶层析法的效果好些。

3 讨论

（1）在中毒兔子的胃内容物的萃取后要注意除去内容物中的色素，以免影响颜色的产生。敌百虫为极性强的有机溶剂，必须用强极性的有机溶剂浸提，比如甲醇、乙醇等。另外，萃取过程中试验要求必须在自然的条件下挥干残渣，温度控制适中，萃取后要密封、低温放入冰箱中保存，以备使用。（2）对于检液II：圆形滤纸法和硅胶层析法的实验结果明显，在稀释了50、100、200、500倍的情况下都出现了粉红色的显色带，但是在稀释了1000倍后没有显色。与此同时圆形滤纸法对于硅胶层析法来说显色更加明显，效果更好，更能体现试验的精确性，说明了硅胶层析法更适合此试验，精确度高，准确性强。（3）对于检液I：采用的圆形滤纸法和硅胶层析法的试验结果中，在稀释了50、100、200、500、1000倍的情况下都出现了粉红色的显色带，说明了敌百虫的浓度对于试验来说具有很重要的意义，浓度低的效果差，浓度高的效果明显。与此同时圆形滤纸法和硅胶层析法后者的显色效果的比前者明显，说明硅胶层析法更精确，更能够体现出试验的要求。（4）综合比较圆形滤纸法和硅胶层析法各自的优缺点：①圆形滤纸法方法简单快捷，材料要求低，成本低，操作简单易行，可以很快的掌握试验要领。②硅胶层析法方法复杂，从制作开始到使用花费的时间较长，材料多，成本较高，在操作过程中技术含量高要求能够熟练的掌握硅胶板的制作，而且硅胶板的板面要求光滑平整利于实验的进行。③硅胶层析法比圆形滤纸法实验效果明显，精确度高，准确强度好。（5）综合比较检液I和检液II：①在同稀释浓度的、同样的实验方法情况下，两者的显色效果不一样，后者比前者的显色明显，效果更好。②同样的稀释浓度、不同的试验方法下效果也不一样，后者还是比前者显色明显，效果更好。③说明了经过动物的消化和吸收敌百虫的毒性有了明显的下降，萃取过程中难免有杂质的成分，使精确度下降，显色效果降低。