许广华 李小伟 韩 双

安徽省太和县中医院，安徽 太和 236608

葛根为豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根，为中风常用的祛风解毒药之一，具有解肌，升阳透疹，解热生津等功效［1］，制剂处方中主药葛根的有效成分为葛根素、黄豆苷、黄豆苷元等黄酮类成分，其中葛根素的含量最高。颈痛舒口服液来自于我院推拿科主任、副主任医师朱向阳的经验方，在长期给予颈椎病患者治疗过程中，除用推拿牵引等非药物治疗的同时服用颈痛舒口服液，以缓解病人因气血不足，而引起的头痛、头晕、手臂麻木、酸痛、活动不利等症状。为了有效控制该药品的质量，根据新药审评有关规定，本文建立了测定颈痛舒口服液中葛根素含量的高效液相色谱法，结果分离度好、重现性好、灵敏度高，可作为控制颈痛舒口服液质量的方法［2］。

1 仪器

北京普析L6－DP6型高效液相色谱仪 (生产厂家:北京普析通用设备科技有限公司);101－1A型数显恒温干燥箱 (生产厂家:上海光地仪器设备有限公司);AL－120型电子天平 (生产厂家:瑞士梅特勒－托利多仪器公司);ZF－2三用紫外仪 (生产厂家:上海安亭仪器厂);HS－180型超声波清洗机 (生产厂家:宁波海曙金兰教仪科研究所);GSY电热恒温水浴锅 (生产厂家:北京医疗器械厂)

2 试药

颈痛舒口服液 (太和中医院中药制剂室，批号:20130105，20130203，20130305);颈痛舒口服液阴性对照品三批 (太和县中医院中药制剂室);葛根素对照品 (中国药品生物)。

色谱甲醇 (生产厂家:安徽时联特种溶剂股份有限公司);水为新制纯化水;其余试剂均为分析纯。

3 葛根素含量测定方法学

3.1 色谱条件 色谱柱:依利特Hypersil ODS(4.6mm×250mm，5um);流动相:甲醇－水 (27∶73);检测波长:250nm;流速:1.0ml/min;柱温:30℃;进样量:20μl。理论塔板数按葛根素峰计应不低于4000，分离度大于1.5。

3.2 对照品溶液的制备 精密称定葛根素对照品适量，加甲醇制成每ml含葛根素对照品50μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备［3］精密量取本品1.0ml，置50ml具塞锥形瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，超声处理 (功率100W，频率40kHz)30分钟，滤过，取续滤液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3.4 干扰试验 取按处方比例及生产工艺制备的不含葛根原药材的颈痛舒口服液，按供试品溶液的制备同法制成阴性对照溶液，按上述色谱条件进行测定，结果表明，葛根素含量测定无干扰，色谱图见图1。

图1 颈痛舒口服液HPLC色谱图

3.5 线性关系考察 精密称取葛根素对照品3.51 mg，置25 ml量瓶中，用30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取对照品溶液2，4，8，12，20μl，按上述色谱条件进样测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程y=3.3E+6 x－31256，R=0.9998。结果表明，葛根素在0.2808～2.808μg范围内线性关系良好。

3.6 精密度试验 取葛根素对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，结果葛根素峰面积的RSD为0.87%。

3.7 重复性试验 取同一批样品6份，每份约1.0ml，按上述方法制成供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算葛根素含量。结果葛根素平均含量为3.52mg/ml，RSD为1.44%。

3.8 稳定性试验 取同一批供试品溶液，室温下放置，按上述色谱条件，分别于配制后0，2，4，6，8，12 h进样测定，记录葛根素峰面积，结果葛根素峰面积的RSD为1.26%。

3.9 加样回收率试验［4－5］精密量取已知含量的样品6份，每份约1.0ml，分别精密加入葛根素对照品适量，按上述方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 葛根素加样回收率试验结果

3.10 样品含量测定 取3批样品，按上述方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算含量。结果葛根素的含量分别为3.51，3.57，3.48mg/ml。

4 结果与讨论

4.1 考察了甲醇－0.2%磷酸 (体积比27∶73)、乙腈－水(体积比20∶80)、甲醇 －水 (体积比27∶73)、甲醇 －0.1%磷酸 (体积比75∶25)［6］等流动相，以甲醇-水(体积比27∶73)的保留时间较为适宜，且分离度良好，其余几种条件葛根素保留时间短，分离度差。

4.2 对样品超声处理时间进行了考察，结果表明样品超声时间30min以上，被测组分含量不再增加，说明超声时间30min即可，故将样品处理的超声时间定为30min。

4.3 采用HPLC法测定颈痛舒口服液中葛根素的含量，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于颈痛舒口服液的质量控制、稳定性考察和有效期，可为颈痛舒口服液的质量标准的建立提供依据。

［1］刘玉国，修彦凤，刘玉红．葛根及其制剂中葛根素的含量测定方法概述［J］．基层中药杂志，1999，13(1):42－44．

［2］陆炜琨，曾芳，李媛．反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量［J］．广州药学学报，2008，26(5):475－477．

［3］张雪荣，董小燕，索伟．HPLC法测定颈复康颗粒剂中葛根素的含量测定［J］．中国药品标准，2002，16(6):56－58．

［4］孙法丽，马毅，王春香．高效液相色谱法测定葛瓜降糖胶囊中葛根素含量［J］．药物鉴定，2007，16(20):33－34．

［5］宿洁，杨晓云，吴爱英．HPLC法测定天乐胶囊中的葛根素含量［J］．中国临床药学杂志，2003，12(2):94－95．

［6］刘必旺，李会芳，赵换，等．HPLC与TLC测定复方葛根胶囊中葛根素含量［J］．中华中医药杂志，2007，26(4):695－697．