杨 昊 陈 斌冯 坦 张 涛 金 炎胡 凯 黄燕平 王鸿祥 韩银发 王益鑫 黄翼然

上海交通大学附属仁济医院（上海 200001）

550例男性不育症患者的血清抑制素B水平分析*

杨 昊 陈 斌**冯 坦 张 涛 金 炎胡 凯 黄燕平 王鸿祥 韩银发 王益鑫 黄翼然

上海交通大学附属仁济医院（上海 200001）

抑制素B（Inhibin B）在男性体内主要由睾丸支持细胞（Sertoli细胞）分泌，是一种糖蛋白激素。由于血清抑制素B的水平能够较准确地评价男性睾丸的生精功能，如今它已逐渐有趋势成为男科临床检测的一个重要指标[1]。本文通过检测550例男性的精液参数以及其血清抑制素B含量，探讨男性血清抑制素B水平与精子浓度、总数以及活力之间的关系，并比较分析其在梗阻性无精子证（OA）与非梗阻性无精子症（NOA）患者中的水平。

对象与方法

一、研究对象

随机选择2011年4月至2011年11月于上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿男科门诊就诊男性不育患者550例，年龄22～58岁，平均（31.67±0.46）岁。婚后性生活正常，未避孕2年以上不育。其中无精子症患者267例、少精子症患者20例、弱精子症患者49例、少弱精子症患者167例，精液参数正常47例。

二、标本收集

禁欲2～7d，用消毒液清洗双手、阴茎和尿道外口后，手淫法留取精液于干燥无菌的广口取精杯内，置于36℃恒温箱内，待完全液化后，进行检测。同时在上午8∶00～10∶30间，使用促凝管收集患者外周静脉血4ml，经3000r/min，10min离心后吸取上清液，储存于-20℃冰箱内，一周内进行检测。

三、精液分析

待精液完全液化后，按照WHO第五版推荐的方法（称重法）检测精液量。使用中科恒业科技有限公司的计算机辅助精液分析仪（CASA）进行检测分析以获得精子浓度、活力（a级+b级精子，即WHO第五版的前向运动精子数的百分比）。无精子症患者标本按照WHO第五版推荐的方法200个高倍视野下在离心沉渣中找精子，若3次检测都未找到精子则判定此份标本“无精子”。

四、血清抑制素B检测

使用96T抑制素B检测试剂盒（美国DSL公司，DSL-84100）进行血清抑制素B的检测。取出实验所需板条，并记录各孔位置。在对应的孔中加入标准品、质控品及待测样本各50μl，加入相应缓冲液，封板，以300～400rpm震荡，室温过夜。次日按步骤分别依次加入50μl抗体-生物素结合物，以500～700rpm震荡，室温下孵育1.5h。之后加入50μl链霉和辣根过氧化物酶结合物，以500～700rpm震荡，室温下孵育20min。在每孔中加入100μlTMB，以500～700rpm震荡，室温下避光孵育15～30min。最后，加入100μl终止液。30min内在450nm处读取吸光度。由于该试剂检测的灵敏度为7pg/mL。因此将检测结果小于7pg/mL的标本视作无法检测出，结果视为0。

五、统计学分析

应用SPSS17.0统计软件处理数据，采用t检验，结果用均数加减标准差（x±s）表示，相关系数r表示相关性。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、血清抑制素B水平与精液参数的相关性分析

血清抑制素B水平与精子浓度呈显著正相关（r=0.242，P＜0.01）（图1）；血清抑制素B水平与精子总数（精子浓度与精液体积的乘积）呈显著正相关（r=0.132，P＜0.01）（图2）；血清抑制素B水平与精子活力呈显著正相关（r=0.272，P＜0.01）（图3）。

图1 血清抑制素B水平与精子浓度相关性分析

图2 血清抑制素B水平与精子总数相关性分析

图3 血清抑制素B水平与精子活力相关性分析

二、OA与NOA患者的血清抑制素B水平比较分析

我们将267例无精子症患者根据诊断结果分为OA组共147例（包括生殖道感染97例、先天性双侧输精管缺如（CBAVD）47例、输精管结扎术后再通梗阻2例、射精管囊肿1例）NOA组共120例（包括特发性无精子症107例、克氏综合征5例、低促性腺激素性性腺功能减退6例、AZF基因缺失症1例、隐睾症1例），两组的血清抑制素B水平分别为（98.43±6.16）pg/mL和（32.18±4.09）pg/mL，两组相比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）。

讨 论

在男科学领域里，抑制素B是性激素的重要组成成员之一。它是由α和βB两个亚基构成且分子量约为26～30K的糖蛋白激素[2]。许多对抑制素的亚基研究表明，它们之间有着同源性并且都是转化生长因子（transforming growth factorβ, TGF-β）家族的成员[3]。

Jorgensen等[4]研究发现，男性血清的抑制素B水平与其精液的精子浓度成较显著的正相关。我们的研究显示男性血清抑制素B水平与精子浓度、精子总数以及精子活力之间都存在正相关。但我们同时需要关注的是最终生成的精子其各项参数不仅取决于睾丸功能的好坏，还取决于附睾、输精管等附属性腺的功能状态，而抑制素B多数由睾丸内Sertoli细胞分泌，故不能非常全面地评价这些附属性腺的功能，比如由于生殖道感染而引起的精子浓度或活力下降时其血清抑制素B水平可正常。

近年有研究表明非梗阻性无精子症患者的血清抑制素B水平明显低于正常对照组以及梗阻性无精子症患者的血清水平[5,6]，这里我们也将267例无精子症患者分为梗阻性无精子症组与非梗阻性无精子症组，并对两组血清抑制素B水平进行比较分析进一步证实了这一理论。故血清抑制素B可能为判断无精子症患者有无梗阻情况提供了重要的参考，甚至可以作为一种预测附睾或睾丸穿刺是否能成功抽取精子的血清指标。同时，国外有学者认为血清抑制素B水平较高的非梗阻性无精子症患者更容易成功取得精子[7]，辅助生殖领域对于从非梗阻性无精子症患者睾丸获取的精子结合ICSI可以有效治疗非梗阻性无精子症不育[8]，故血清抑制素B水平同样可能对于非梗阻性无精子症患者能否成功获得子代有着重要的参考价值与预测作用。但是，近年也有研究表明血清抑制素B水平并不能作为非梗阻性无精子症患者成功取得精子的预测指标[9]，所以血清抑制素B到底能否成功预测非梗阻性无精子症患者获取精子的结果，有待进一步更深入的研究。

国内有文献报道，通过二聚作用形成抑制素B的两个亚基很有可能是由Sertoli细胞与生精细胞共同参与分泌[10]。这与最初的研究认为抑制素B是由睾丸组织内的Sertoli细胞分泌[11]存在分歧，因此对于抑制素B的来源仍然不是非常的清楚。虽然认为抑制素B的主要来源还是Sertoli细胞[12]，其能够较的反映Sertoli细胞的功能，但我们认为这并不一定代表精子产生的数量与之存在绝对的正比关系，即在精子浓度及活力都较为良好的情况下，抑制素B完全有可能比较低。我们统计中就发现有部分患者精子情况并不是非常差，但其血清抑制素B的水平却非常低，甚至有3例出现了有精子但是血清抑制素B却无法检测出的情况，分析原因可能在于作为为抑制素B提供其合成所需的亚基的Sertoli细胞受到一定程度的损害，但这种损害并没有真正的影响到精子的生成。我们还发现血清抑制素B水平较低的精液标本其精子头部畸形率往往较高，国外有文献显示精子头部的畸形率的高低与睾丸功能有着密切的联系[13]，所以这也从另一个方面表明血清抑制素B能够较好的反应睾丸的功能状态。

总之，我们对于550例不育患者的血清抑制素B与精液分析参数进行比较分析，得出男性血清抑制素B水平与精子浓度、精子总数以及精子活力之间存在正相关。并且比较了OA与NOA患者的血清抑制素B水平，证实血清抑制素B水平可能是一个能较好鉴别梗阻与非梗阻无精子症的血清指标。但是，直到目前为止抑制素B的具体来源以及生理作用机制还不是非常的明确，有待进一步更深入的研究。

抑制素B; 不育,男性; 精子计数; 精子能动性

1 Stewart J, Turner KJ. Inhibin B as a potential biomarker of testicular toxicity. Cancer Biomarkers 2005; 1(1)∶75-91

2 Robertson DM, Stephenson T, Mclachlan RI, et al. Characterization of plasma inhibin forms in fertile and infertile men. Hum Reprod 2003; 18(5)∶ 1047-1054

3 Chang H, Brown CW, Matzuk MM, et al. Genetic analysis of the mammalian transforming growth factor-beta superfamily. Endocr Rev 2002; 23(6)∶ 787-823

4 Jorgensen N, Liu F, Andersson AM, et al. Serum inhibin-b in fertile men is strongly correlated with low but not high sperm counts∶ a coordinated study of 1,797 European and US men. Fertil Steril 2010; 94(6)∶ 2128-2134

5 Muttukrishna S, Yussoff H, Naidu M, et al. Serum anti-Müllerian hormone and inhibin B in disorders of spermatogenesis. Fertil Steril 2007; 88(2)∶ 516-518

6 向代军, 高文, 穆莎, 等. 血清抑制素B、卵泡刺激素和精浆中性α-葡萄糖苷酶在无精子症中的诊断意义. 实用医学杂志 2011;27(11)∶2055-2057

7 Ziaee SA, Ezzatnegad M, Nowroozi M, et al. Prediction of successful sperm retrieval in patients with nonobstructive azoospermia. Urol J 2006; 3(2)∶ 92-96

8 黄学锋, 郑菊芬, 吴秀玲, 等. 睾丸精子获取和单精子卵胞浆内注射术治疗非梗阻性无精子症不育. 中华泌尿外科杂志 2002; 23(11)∶ 647-650

9 Mitchell V, Boitrelle F, Pigny P, et al. Seminal plasma levels of anti-Müllerian hormone and inhibin B are not predictive of testicular sperm retrieval in nonobstructive azoospermia∶ a study of 139 men. Fertil Steril 2010; 94(6)∶2147-2150

10 董志英, 于辉, 修贺明, 等. 抑制素BβB亚单位在不同病理分型的无精子症患者睾丸组织中的表达. 中华男科学杂志 2008; 14(1)∶ 20-22

11 Maddocks S, Sharpe RM. The route of secretion of inhibin from the rat testis. J Endocrinol 1989; 120(1)∶R5-R8

12 Kinniburgh D, Anderson RA, et al. Differential patterns of inhibin secretion in response to gonadotrophin stimulation in normal men. Int J Androl 2001; 24(2)∶95-101

13 Amann RP. Tests to measure the quality of spermatozoa at spermiation. Asian Journal of Andrology 2010; 12(1)∶71-78

（2013-08-12收稿）

R 698.2

资助∶ 国家自然科学基金（编号81270741）

**通讯作者, E-mail∶ dr_binchen@126.com

doi∶10.3969/j.issn.1008-0848.2014.02.017